消脂护肝方对脂肪肝模型大鼠血脂、肝功能的恢复作用及对下丘脑瘦素和瘦素受体表达的影响

[目的]观察消脂护肝方对脂肪肝模型大鼠血脂、肝功能的恢复作用及其机理。[方法]Wistar大鼠24只,随机分为正常对照组、模型组和消脂护肝方组(中药组),除正常组外,采用体积分数为40%CCl4豆油溶液按前3周2 ml/kg,后3 周1 mL/kg剂量皮下注射结合高脂饮食复制大鼠脂肪肝模型;造模期间中药组灌服消脂护肝方(12.4 g·kg-1·d-1),6周后处死所有大鼠,检测肝功能、血脂并观察肝组织病理变化;采用免疫组化方法检测下丘脑组织中瘦素(Leptin)、瘦素长型受体OB-RL的含量。[结果]消脂护肝方组大鼠肝功能指标血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)及血脂指标甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)均较模型组显著降低(P<0.05),与正常组比较无显著性差异(P>0.05),表明该方具有抑制脂肪肝形成作用;免疫组化法结果显示,消脂护肝方组大鼠下丘脑组织内Leptin、OB-RL的表达均较模型组升高(P<0.05),与正常组比较无显著性差异(P>0.05)。[结论]消脂护肝方可使脂肪肝大鼠升高的血脂和损伤的肝功能恢复至正常,其可能的机理是与升高下丘脑组织中Leptin、OB—RL的表达有关。     

肛瘘诊治研究进展

肛瘘是肛管直肠与肛周皮肤相通的一种异常通道,是肛周脓肿的慢性化阶段,其临床表现特点主要为肛门硬结、局部反复破溃流脓、疼痛、潮湿及瘙痒等。在整个外科历史上,肛瘘对于患者和医师来说都是一个令人心烦的疾病。国外有学者报道,每十万人口有8.6人罹患肛瘘（非特异性肛瘘占90.4%,结核性肛瘘占0.2%,医源性肛瘘占3.3%,肛裂发展成的肛瘘占3.3%,溃疡性结肠炎并发的肛瘘占1.5%,克罗恩氏病并发的肛瘘占1.3%）,平均年龄38.3岁,男女比例为1.8∶1.0,年龄小于15岁的患者多为男性。我国尚无权威的肛瘘流行病学报告。     

EGCG联合不同剂量放疗对人肝癌细胞系HepG2中hTERT表达的影响

目的:研究相同剂量表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)联合不同剂量放疗对HepG2中hTERT基因表达的影响, 探讨EGCG成为放疗增敏剂的作用.方法:用MTT比色法检测EGCG对HepG2细胞增殖的影响, 用荧光显微镜检测EGCG诱导HepG2的细胞凋亡, 从而找到合适的EGCG(25μmol/L)剂量用于观察其放射效果的实验; 采用实时荧光定量PCR检测不同剂量放疗(0、2、4、6 Gy)联合EGCG和不联合EGCG治疗后, HepG2中hTERT基因的表达. 放疗用直线加速器6MVX线.结果:EGCG具有抑制HepG2细胞增殖并诱导HepG2细胞凋亡的作用. 同时, 不同剂量放疗联合EGCG和不联合EGCG治疗后HepG2中hTERT基因的表达比较, 空白组无显著差异; 2Gy组、4 Gy组、6 Gy组均有显著差异(hTERT基因表达的扩增倍数: 0.477±0.025 vs 0.973±0.024; 1.110±0.083 vs 1.382±0.051; 1.174±0.128 vs 1.452±0.109, P <0.01或0.05), 并以2 Gy组最为显著.结论:EGCG具有抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡的作用; EGCG联合不同剂量放疗可能下调HepG2中hTERT基因水平, 从而抑制端粒酶活性, 以放射剂量为2 Gy时显著, 因此,EGCG有可能成为放疗增敏剂.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对缺氧诱导的肝细胞癌HepG2细胞HIF-1α及VEGF蛋白表达的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)]对缺氧诱导的肝细胞癌HepG2细胞HIF-1α及VEGF表达的影响.方法:在缺氧条件体外培养肝细胞癌HepG2细胞16 h,并以不同浓度EGCG处理,即低剂量(10 μmol/L)、中剂量(50 μmol/L)、高剂量(100 μmol/L),制成细胞爬片以免疫组化SABC法检测HIF-1α及VEGF表达的变化,同时设常氧组及缺氧对照组进行比较.结果:常氧状态下HepG2细胞中HIF-1α几乎无表达,VEGF有少量表达.缺氧对照组经16h缺氧后HIF-1α表达明显上调,与常氧组相比有显著差异( t = 3.579,P<0.01);VEGF表达亦较常氧组明显上调,两者有明显差异( t =6.372,P<0.01).同浓度的EGCG对缺氧各组细胞HIF-1α及VEGF表达,与缺氧对照组相比均有不同明显抑制作用(HIF:F = 56.818,P<0.05;VEGF:F = 10.016,P<0.05),EGCG对HIF-1α及VEGF表达的抑制作用呈剂量依赖性,且相关分析显示,HIF-1α及VEGF蛋白表达同步化( r=0.617,P<0.05).结论:EGCG可从蛋白水平下调缺氧诱导的HepG2细胞HIF-1α及VEGF的表达水平,从而有可能抑制肿瘤血管新生.     

保护素D1 通过抑制肾脏炎症及足突细胞上皮-间充质转化而抑制早期 糖尿病肾病小鼠肾纤维化

 目的：保护素D1 (PD1) 是一个潜在的抗炎症脂蛋白分子,本实验探讨其治疗早期糖尿病肾病（DN）肾纤维化的作用及机制。方法：用链脲佐菌素125 mg/kg 2次腹腔注射C57BL/6J雌性小鼠,建立早期DN小鼠模型。糖尿病模型成功后,用PD1（0.08 mg·kg-1·d-1）腹腔注射治疗,设正常鼠及DN鼠为对照。治疗8周后检测各组小鼠24 h尿蛋白及尿白蛋白定量、体重、肾重、肾重/体重比、血清及尿肌酐和肌酐清除率;用PAS染色法检测肾小球系膜区基质/肾小球面积比,用免疫荧光染色法检测肾皮质中巨噬细胞的数量,用Western blotting检测肾小球纤连蛋白（FN）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,以及肾小球足突细胞特异性上皮标志蛋白zonula occludens-1(ZO-1)和P-cadherin的表达;同时,体外用高糖刺激小鼠巨噬细胞株RAW264.7,检测PD1对其分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的抑制作用。体外用转化生长因子β1（TGF-β1）刺激小鼠足突细胞株,用Western blotting检测PD1对其诱导足突细胞上皮-间充质转化(EMT)中上皮细胞标志蛋白P-cadherin 和ZO-1减少的恢复作用,及间充质细胞标志蛋白成纤维细胞特异性蛋白1（FSP1） 和α-SMA过表达的抑制作用。结果：PD1能减少DN小鼠肾小球系膜基质的积聚、24 h尿蛋白及尿白蛋白定量、体重、肾重和肾重/体重比,抑制异常增高的肌酐清除率。PD1能减少DN小鼠肾皮质中巨噬细胞的数量,抑制DN小鼠肾小球FN和α-SMA的表达,恢复足突细胞特异性上皮标志蛋白ZO-1和P-cadherin的表达。PD1能抑制高糖诱导RAW264.7分泌TNF-α和IL-1β,能抑制TGF-β1诱导足突细胞FSP1和α-SMA表达的增加以及ZO-1和P-cadherin表达的减少。结论：PD1能减轻早期DN小鼠肾纤维化,其部分机制可能通过抑制肾脏的炎症及足突细胞EMT。     

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1在糖尿病小鼠肾皮质中的表达变化

目的探索在糖尿病（diabetes mellitus，DM）肾脏病变进程中，血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1（serum and glueoeortieoid—inducible kinase 1，SGK1）在肾皮质中的表达变化。方法采用链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）单次腹腔注射诱导小鼠DM模型，设DM组和正常对照（normal control，NC）组，在DM模型1、3、4、6和12周时，检测肾重指数、血糖和糖化血红蛋白（HbA1c），RT-PCR方法检测肾皮质SGK1 mRNA的表达，Western blot法检测肾皮质SGK1蛋白的表达，同时应用免疫组织化学技术检测肾皮质中肾小球的SGK1蛋白的表达。结果与NC组相比，从第1周末起到第12周末DM组小鼠肾重指数、血糖和HbA1c均显著增加；第1周末肾皮质SGK1mRNA和蛋白以及肾小球中SGK1蛋白的表达即开始上调，到第4周末肾皮质SGK1mRNA和蛋白表达达到顶峰，第6周至第12周仍有较高表达。结论随DM肾脏病变发展，肾皮质及肾小球中SGK1持续高表达，进一步提示它在DM肾脏病变进程中起重要作用。     

方证相关论肝纤维化

肝纤维化不是一个独立的疾病,而是发生在大多数慢性肝病过程中,由于细胞外基质以及胶原的过度积累造成的,是大多数慢性肝脏疾病发展至肝硬化的必经阶段。晚期肝纤维化导致肝硬化、肝衰竭和门脉高压,最后往往需要肝移植。据世界卫生组织不完整统计,全世界大约有1．7亿慢性肝纤维化患者,大约占全世界人口的3％。     

下瘀血汤调控ACE2介导的RAS自稳抑制肝纤维化实验研究

目的探讨下瘀血汤是否通过恢复或重建肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)的自稳平衡抑制肝纤维化进展。方法将27只Wistar雄性大鼠随机分为5组,即正常组、模型组、去除病因组、下瘀血汤组和氯沙坦钾组。除正常组外,各实验组大鼠背部皮下注射2.5 mL/kg 40%四氯化碳橄榄油混悬液造模,并以下瘀血汤及氯沙坦钾干预肝纤维化进展,应用HE染色、Masson三色胶原染色和超微病理学方法观察肝脏组织结构的改变,采用免疫组织化学染色法检测各组AT1R、TGF-β1表达,采用RT-PCR及Western-blot法检测RAS相关因子的基因和蛋白表达。结果①HE染色、Masson三色胶原染色和超微病理学结果均显示去除病因组、下瘀血汤组、氯沙坦钾组和模型组肝纤维化程度依次加重。②RT-PCR及Western-blot结果显示,与正常组相比,其他组RAS相关分子ACE2、ACE、AngⅡ、AT1R及TGF-β1的mRNA及蛋白表达均升高;除去除病因组TGF-β1基因表达差异无统计学意义(P>0.05)之外,其他组间比较均具有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,去除病因组、下瘀血汤组、氯沙坦钾组RAS相关分子ACE2、ACE、AngⅡ、AT1R及TGF-β1的mRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.05)。③与氯沙坦钾组比较,下瘀血汤组ACE2的mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05),而AngⅡ及TGF-β1的mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论下瘀血汤可能通过增加ACE2的表达,抑制ACE、AngⅡ和TGF-β1的表达,使RAS中促进肝纤维化的经典通路ACE-AngⅡ-AT1R转变为抑制肝纤维化的ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴为主导,从而抑制肝纤维化。     

High Glucose Promotes the CTGF Expression in Human Mesangial Cells via Serum and Glucocorticoid-induced Kinase 1 Pathway

The role of serum and glucocorticoid-induced kinase 1 （SGK1） pathway in the connective tissue growth factor （CTGF） expression was investigated in cultured human mesangial cells （HMCs） under high glucose. By using RT-PCR and Western blot, the effect of SGK1 on the CTGF expression in HMCs under high glucose was examined. Overexpression of active SGK1 in HMCs transfected with PIRES2-EGFP- S422D hSGK1 （SD） could increase the expression of phosphorylated SGK1 and CTGF as compared with HMCs groups transfected with PIRES2-EGFP （FP） under high glucose or normal glucose. Overexpression of inactive SGK1 in HMCs transfected with PIRES2-EGFP- K127N hSGK1 （KN） could decrease phosphorylated SGK1 and CTGF expression as compared with HMCs groups transfected with FP under high glucose. In conclusion, these results suggest that high glucose-induced CTGF expression is mediated through the active SGK1 in HMCs.