丹芍化纤胶囊对基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的：探讨丹芍化纤胶囊抗大鼠肝纤维化的作用及对基质金属蛋白酶-1(MMP-1)表达的影响。方法：雄性Wistar大鼠80只分为正常组、肝纤维化模型组、自然恢复组、低剂量治疗组、高剂量治疗组，除正常组外，其余采用四氯化碳(CCl4)、饮酒、高脂低蛋白饮食等复合病因刺激制备肝纤维化动物模型8周，然后两治疗组分别予以低剂量(0．5g／kg)、高剂量(1g／kg)丹芍化纤胶囊灌胃8周。实验结束后测定肝脏指数、血清透明质酸(HA)及谷丙转氨酶(ALT)，光镜下观察肝组织纤维化程度，检测尿羟脯氨酸(Hyp)排出量，同时免疫组织化学SABC法检测肝组织MMP-1的表达。结果：治疗组与肝纤维化模型组及自然恢复组比较，肝脏指数、血清HA及ALT显著下降，肝纤维化程度显著减轻，尿Hyp排出明显增加，肝脏MMP-1表达显著增加。以上结果均以高剂量组较低剂量组改善明显。结论：丹芍化纤胶囊增加大鼠肝组织中MMP-1的表达，可能是其抗纤维化作用的机制之一。     

丹芍化纤胶囊对肝纤维化大鼠肝组织结缔组织生长因子表达的影响

目的：研究结缔组织生长因子(CTGF)在丹芍化纤胶囊治疗大鼠实验性肝纤维化组织中的表达，探讨丹芍化纤胶囊延缓肝脏纤维化的药理机制。方法：雄性Wistar大鼠80只分为正常组、肝纤维化模型组、自然恢复组、低剂量治疗组、高剂量治疗组，除正常组外，采用四氯化碳(CCl4)、饮酒、高脂低蛋白饮食等复合病因制备肝纤维化动物模型，低剂量组和高剂量组分别给予0．5g／kg、1g／kg丹芍化纤胶囊灌胃治疗8周，自然恢复组则给予等容量生理盐水。实验结束后测定血清透明质酸(HA)及谷丙转氨酶(ALT)，光镜下观察肝组织纤维化程度，同时用免疫组织化学法(SABC)检测肝组织中CTGF的表达。结果：与肝纤维化模型组、自然恢复组比较，治疗组血清HA及ALT显著下降，肝纤维化程度明显减轻，肝组织中CTGF的表达明显减少。结论：丹芍化纤胶囊能够抑制肝纤维化组织中CTGF的表达，这可能是丹芍化纤胶囊抗肝纤维化作用的机制之一。     

糖尿病大鼠肾脏PAI-1、TIMP-1表达的变化

目的:动态观察纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在糖尿病大鼠肾脏中的表达,探讨PAI-1及TIMP-1在糖尿病肾病(DN)肾纤维化发生、发展过程中的作用.方法:链脲菌素(STZ)诱导大鼠糖尿病肾病,免疫组织化学的方法动态观察糖尿病.肾病发生、发展过程中大鼠肾脏PAI-1、TIMP-1及纤维连接蛋白(FN)表达.结果:PAI.1、TIMP.1及FN表达从糖尿病2周起较正常对照组明显增多(P<0.01),PAI-1和TIMP-1阳性表达主要位于肾小管上皮细胞胞浆内,FN阳性表达主要位于肾小管间质和肾小球,且随着糖尿病进展有逐渐增加的趋势.结论:PAI-1和TIMP-1在肾小管上皮细胞的高表达可能参与了糖尿病肾病过程中肾纤维化的形成.     

BMP-7在糖尿病肾病发生发展中表达的变化

目的: 探讨BMP-7在糖尿病(DM)肾病发病机制中的作用.方法: 以免疫组织化学、Western blot及荧光实时定量PCR(RT-PCR)的方法动态观察链脲佐菌素诱导的大鼠糖尿病肾病发生过程中大鼠肾脏BMP-7蛋白及mRNA表达.结果: 在正常大鼠及DM大鼠肾小管均有BMP-7蛋白表达,以胞浆表达为主,DM大鼠肾小管和集合管BMP-7蛋白表达较正常对照组明显增多(P＜0.05),BMP-7mRNA的表达呈现先增加后降低的趋势.结论: 作为TGF-β超家族的一员,BMP-7信号通路在糖尿病肾病发生早期可能起到重要的反馈性抑制作用.     

丹芍化纤胶囊治疗大鼠肝纤维化对金属蛋白酶组织抑制因子-1表达的影响

目的：探讨丹芍化纤胶囊对大鼠实验性肝纤维化TIMP-1表达的影响。方法：雄性Wistar大鼠80只分为正常组、肝纤维化模型组、自然恢复组、低剂量治疗组、高剂量治疗组,除正常组外,其余采用CCl4、饮酒、高脂低蛋白饮食等复合病因刺激制备肝纤维化动物模型8周,然后两治疗组分别予以低剂量(0．5g／kg)、高剂量(1g／kg)丹芍化纤胶囊灌胃治疗8周。实验结束后测定肝脏指数、血清透明质酸(HA)及谷丙转氨酶(ALT),光镜下观察肝组织纤维化程度,检测尿羟脯氨酸(Hyp)排出量,同时用免疫组化SABC法检测肝组织中TIMP-1的表达。结果：治疗组与肝纤维化模型组、自然恢复组比较：肝脏指数、血清HA及ALT显著下降;肝纤维化程度显著减轻;尿Hyp排出明显增加;治疗组肝组织中TIMP-1的表达与肝纤维化模型组和自然恢复组相比则显著降低。结论：丹芍化纤胶囊能够抑制肝纤维化组织中TIMP-1的表达,从而提高MMP-1的活性,促进细胞外基质的降解,这可能是丹芍化纤胶囊抗肝纤维化作用的机制之一。     

肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1表达和细胞外胶原沉积及中药抗肝纤维化治疗影响

目的 探索中药丹芍化纤胶囊治疗CCl4肝纤维化大鼠对肝组织转化生长因子β1（transfotruing growing factor TGF-β1）、间质胶原蛋白（COL）Ⅰ、Ⅲ表达的影响。方法以CCl4复合因子刺激8周制备Wistar大鼠肝纤维化模型后,予丹芍化纤胶囊治疗8周,收集血、尿及肝组织标本,测定血尿羟脯氨酸（Hyp）、血清谷丙转氨酶（ALT）及透明质酸（HA）;观察肝组织纤维化程度、TGF-β1及COLⅠ、Ⅲ的表达水平。结果模型组、自然恢复组及治疗组动物肝组织出现不同程度肝纤维化病变,TGF-β1和COLⅠ、Ⅲ表达水平升高,其中模型组各指标升高最明显。丹芍化纤胶囊治疗组各项指标虽高于正常对照组,但与模型组比较有明显改善。结论丹芍化纤胶囊可能通过降低肝组织TGF-β1的表达水平,减少细胞外基质中COLⅠ、Ⅲ的沉积,同时通过促进其降解而起到治疗肝纤维化的作用。     

大鼠原代肝星状细胞活化后组蛋白修饰水平的观察

目的:观察体外培养大鼠肝星状细胞(HSCs)活化过程中组蛋白修饰的改变以及与HSCs活化指标α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的关系,探讨组蛋白修饰在HSCs活化过程中可能的作用。方法:体外分离、鉴定、培养大鼠HSCs,光镜观察HSCs活化过程中的形态变化,细胞免疫荧光染色和Western blotting检测desmin和α-SMA的表达,比较静止型HSCs和激活型HSCs中H4K12乙酰化、H3K9乙酰化、H3K4二甲基化和H3K9二甲基化的变化。结果:(1)细胞形态学观察结果表明HSCs在培养过程中形态由静息状态向高度分化的肌成纤维细胞转化。细胞免疫荧光染色及Western blotting检测结果显示,分离培养24 h的HSCs有desmin表达,但几乎不表达α-SMA;随着培养时间延长,HSCs内α-SMA和desmin表达逐步增加,至15 d时达到最大。(2)根据HSCs细胞形态变化及HSCs活化标志蛋白检测结果,确定培养24 h的HSCs为静止型HSCs,培养15 d的HSCs为激活型HSCs,分别检测其组蛋白修饰变化。结果显示,与静止型HSCs比较,激活型HSCs中H4K12乙酰化、H3K9乙酰化和H3K9二甲基化修饰水平明显降低(P0.01),而H3K4二甲基化修饰水平明显增加(P0.01),且H3K4二甲基化修饰水平变化与α-SMA表达变化一致。结论:在体外培养HSCs活化过程中,组蛋白修饰发生明显异常,提示组蛋白修饰改变有可能参与了HSCs活化以及肝纤维化的发生。     

辛二酰苯胺异羟肟酸诱导大鼠原代肝星状细胞凋亡

目的:通过研究辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对大鼠原代肝星状细胞(HSCs)凋亡及相关蛋白表达的影响,探讨SAHA诱导HSCs凋亡的作用机制。方法:采用Opti Prep梯度离心法分离大鼠原代HSCs;通过实时细胞分析技术检测SAHA对HSCs增殖的影响;倒置显微镜观察不同浓度SAHA处理HSCs后的形态变化;荧光显微镜及流式细胞术Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率;Western blotting法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP1)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)的蛋白表达;免疫共沉淀法检测GRP78蛋白与HDAC6蛋白是否形成复合物。结果:成功分离的HSCs连续培养14 d,HSCs逐渐由静止状态变为激活状态。SAHA可显著抑制HSCs增殖,且呈剂量时间依赖性(P0.05);SAHA对HSCs的促凋亡作用具有时间依赖性(P0.05)。SAHA处理HSCs后,α-SMA、Ⅰ型胶原、HDAC6和TIMP1的蛋白表达水平明显降低(P0.05),GRP78的蛋白表达水平明显升高(P0.05)。与激活型的HSCs相比,SAHA处理后的HSCs中免疫共沉淀下的蛋白复合物中GRP78与总的乙酰化赖氨酸蛋白显著增多,而HDAC6蛋白显著降低,同时证明GRP78与HDAC6形成复合物。结论:SAHA抗肝纤维化的机制可能是,SAHA下调HDAC6蛋白表达水平,上调乙酰化GRP78蛋白表达水平,诱导HSCs内质网应激,促进肝星状细胞凋亡,从而起到抗肝纤维化的作用。     

肝纤维化大鼠肝细胞内质网形态及GRP78表达的研究

目的: 观察四氯化碳(CCl₄)致大鼠肝纤维化过程中内质网形态及内质网应激标志性蛋白——葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达变化, 探讨内质网应激在肝纤维化发病机制中可能的作用。方法: 雄性Wistar大鼠皮下注射CCl₄制备肝纤维化模型,分别在4周及8周处死大鼠测定肝脏指数、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性, 观察肝组织病理改变和肝细胞内质网形态, 免疫组化和real-time PCR分别检测肝组织GRP78蛋白及mRNA表达变化。结果: 肝纤维化组大鼠肝脏指数、血清ALT和AST活性显著高于正常对照组(P<0.01),肝纤维化明显, 电镜下见肝细胞内质网扩张,数量明显减少; 肝细胞胞浆中GRP78蛋白表达量及mRNA表达量较正常组显著增加(P<0.01)。结论: 在CCl₄诱导的肝纤维化发生过程中肝细胞内质网形态有明显损伤性变化, 内质网应激蛋白GRP78蛋白及基因表达水平明显增加, 提示内质网应激参与肝纤维化发生发展。     

实验性肺癌中蛋白激酶C的表达及意义

[目的]建立肺癌动物模型基础上研究蛋白激酶C(PKC)α在肺鳞癌组织中表达,探讨其在肺鳞癌发生发展中的可能作用.[方法]用肺叶支气管内灌注致癌物碘油溶液诱发大白鼠肺癌的方法建立大鼠肺鳞癌模型,以免疫组化方法研究PKCα在肿瘤组织、肿瘤周围组织及正常组织的表达.[结果]诱发的肺部肿瘤均为肺鳞癌,诱癌率达77.8%;肺鳞癌组织中PKCα表达明显增高,在诱癌组对侧肺组织表达也明显高于正常肺组织,分别为(24.08±2.93)%,(5.00±2.10)%,(1.96±0.29)%,差异有显著性(P＜0.05).[结论]肺癌组织中PKCα的异常高表达提示致癌剂可能通过活化PKCα介导的多个环节的信号转导而参与了肺鳞癌的发生、发展.