AIB1蛋白双单克隆抗体夹心ELISA检测法的建立及初步应用

目的 建立双单克隆抗体夹心ELISA方法检测血清中AIB1的水平,探讨其在AIB1蛋白检测中的应用价值.方法 应用抗AIB1-C单克隆抗体4B9F12作为固相抗体,Biotin-1A2E1作为标记抗体,ELISA双抗体夹心法检测AIB1.构建及优化的内容包括:最适包被浓度、最适包被缓冲液、生物素标记抗体工作的浓度;鉴定的指标包括:敏感性、特异性、稳定性等.结果 使用0.05 mo·L-1碳酸盐缓冲液(pH9.6)为包被缓冲液,包被抗体4B9F12工作浓度为10μg·mL-1,Biotin-1A2E1工作浓度选择1∶500;采用双抗体夹心法检测外周血中AIB1的特异性和敏感性均较高.结论 抗AIB1双抗体夹心ELISA方案的构建、鉴定达到了预期目的 ,为临床研究奠定了基础.     

Survivin基因和增殖细胞核抗原在大肠癌组织中表达及其意义

目的:探讨Survivin和增殖细胞核抗原PCNA在大肠癌组织中的表达和意义。方法:采用免疫组织化学方法检测正常大肠粘膜、腺瘤和腺癌组织中Survivin和PCNA表达。结果;Survivin在正常大肠粘膜无表达,在大肠腺癌和腺瘤组织中表达的阳性率分别为70.9%和62.5%;大肠癌组和大肠腺瘤组OD值显著高于正常大肠粘膜组;大肠癌组中PCNA-LI为(50.2±13.2)%,显著高于正常大肠粘膜组(12.6±3.1)%和大肠腺瘤组(33.2±7.9)%;大肠癌组中Survivin阳性的PCNA-LI为(61.3±9.3)%,显著高于Survivin阴性的PCNA-LI(36.4±6.6)%。结论:Survivin和PCNA的高表达在大肠癌的发生、发展中起重要作用,PCNA可反映大肠癌的增殖状况,两者可作为判断其预后的参考指标。     

大肠癌组织中survivin基因表达谱的改变

目的 研究大肠癌组织中凋亡抑制因子survivin表达水平的变化,探讨survivin在大肠癌发生中的作用.方法 收集60例临床大肠癌和20例正常大肠组织标本,用半定量RT-PCR和westem blot方法检测大肠癌及正常大肠组织中survivin的表达浓度,比较表达差异.结果 大肠癌组织中survivin基因mRNA表达总阳性率为58.3%(35/60),显著高于正常大肠组织0%(0/25),P<0.01;Westem blot验证结果表明大肠癌标本组织中survivin蛋白检测表达为阳性,其中正常大肠组织5例中仅有1例survivin微弱表达,进一步证实了survivin蛋白在大肠癌中表达增高.结论 Survivin的过表达同大肠癌的发生相关.     

蒸馏水与稀释碘伏对结肠癌细胞SW480体外增殖的比较研究

目的研究蒸馏水与稀释碘伏对人结肠癌细胞SW480体外增殖的抑制作用。方法体外培养人结肠癌细胞株SW480,分别用蒸馏水与不同浓度稀释碘伏（0.05%,0.025%,0.01%）处理,MTT（噻唑蓝）法检测蒸馏水与稀释碘伏对SW480细胞的生长影响作用,并进行分析评价。结果 0.01%碘伏处理细胞1 min即可表现出明显的细胞毒性作用,效果远远高于单纯使用蒸馏水的杀伤作用。结论稀释碘伏在体外对人结肠癌细胞SW480的杀伤作用明显高于单纯使用蒸馏水,可望为临床手术中控制腹腔结肠癌细胞种植转移提供临床依据。     

MicroRNA的生物学作用及临床意义

MicroRNA是一类调控性的小片段RNA,通过降解靶基因mRNA或者转录后抑制靶基因表达而发挥作用。目前已证实microRNA参与调节生长发育、细胞增殖、凋亡等多种生理过程,并与心血管疾病、免疫系统疾病、糖尿病、肿瘤等多种病理过程密切相关。本文就microRNA重要的生物学功能及其在疾病发生中的作用进行综述。     

p16基因mRNA及其编码蛋白在宫颈癌中的表达

目的 :探讨宫颈癌中 p1 6m RNA及其编码蛋白的表达水平与肿瘤发生、发展和预后的相关性。方法 :用原位杂交法和免疫组化染色法分别对宫颈癌、CIN、正常宫颈组织中的 p1 6m RNA及其蛋白进行检测。结果 :p1 6m RNA和蛋白在正常宫颈、CIN、宫颈癌组织中均有表达 ,且表达阳性率逐渐降低 ,分别为 90 %和 1 0 0 % ,60 %和 60 % ;42 .5 %和 47.5 %。p1 6m RNA及其蛋白表达与宫颈癌病理分级、临床分期、淋巴结转移有关。结论 :p1 6m RNA及其蛋白的表达与宫颈癌发生、发展有关 ,p1 6基因不仅为细胞周期的固有调控者 ,亦可能在其它方面影响细胞生物学行为     

人胎盘TRAIL基因cDNA的克隆和鉴定

目的:利用基因工程技术克隆TRAIL基因全长cDNA,并构建其原核表达载体.方法:从人胎盘中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增了TRAIL,将其连接于克隆载体pMD18-T中,并通过酶切及测序鉴定载体构建的正确性.结果:应用RT-PCR技术和BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切成功获得1049 bp的目的片段,测序分析结果表明该基因序列与报道的TRAIL基因片段的序列完全相同.结论:成功克隆了TRAIL基因的cDNA全长,为其在肿瘤生物治疗中的应用奠定了基础.     

生物化学实验教学中PBL教学模式的应用探索

生物化学实验课是培养学生创新思维和科研能力的重要手段,选择合理的教学方法可以有效提高学生的综合素质.通过在生物化学实验教学中引入PBL教学模式,探索生物化学实验课教学更有效的教学方法,为提高教学质量,培养创新型医学人才寻找一条有效的教学途径.     

17-AAG联合顺铂对人胃癌SGC-7901细胞株增殖和凋亡作用的影响

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-AAG联合顺铂对人胃癌细胞SGC-7901的抑制效应.方法体外培养SGC-7901,采用四氮唑盐比色法测定不同浓度、不同时间17-AAG、顺铂单药和联合处理后SGC-7901的生长抑制情况;采用流式细胞术检测不同浓度17-AAG和顺铂单药、联合处理后对SGC-7901细胞的细胞周期变化及凋亡率变化.结果 2种药物单用均对SGC-7901细胞有明显的生长抑制作用,2种药物联合后呈协同作用,呈时间、剂量依赖性.流式细胞仪细胞周期分析显示,17-AAG和顺铂单药处理24 h后,17-AAG阻滞SGC-7901细胞于G2/M期,顺铂阻滞SGC-7901细胞于S期.并都具有诱导SGC-7901细胞凋亡的作用,其联合用药可显著增加SGC-7901的凋亡率.结论 17-AAG和顺铂均可明显抑制SGC-7901的增值、诱导细胞凋亡,联合用药有一定的协同效应,呈剂量依赖关系.     

生物素化抗AIB1单克隆抗体的初步应用

目的探讨生物素化抗AIB1单抗在肿瘤细胞AIB1检测中的应用。方法用生物素N-羟基丁二酰亚胺酯（BNHS）对纯化抗体1A2E1进行标记,获得了Biotin-1A2E1,通过免疫荧光化学法应用该生物素化单克隆抗体检测肿瘤细胞中AIB1蛋白的表达情况。结果应用所制备的生物素化抗体检测靶细胞中AIB1蛋白,免疫荧光结果显示敏感性高,特异性强。结论可成功应用该抗体检测肿瘤细胞AIB1蛋白,为肿瘤的诊断、治疗提供新的研究思路。