阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶cDNA克隆和序列分析

目的近年研究表明Rab11鸟苷三磷酸酶在调节各种真核细胞的膜转运通道中发挥着重要作用。但是,对于原生动物毛滴虫膜转运系统的研究仍甚少。本研究旨在克隆和分析阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶基因,以便进一步探讨其功能。方法使用SMARTcDNA文库构建试剂盒构建阴道毛滴虫cDNA表达文库,用生物信息学进行TvRab11同源分析,鉴定TvRab11基因,用PCR方法扩增基因组DNA,TA克隆TvRab11cDNA、测序及序列分析。结果在分离出的cDNA克隆中发现一个Rab11鸟苷三磷酸酶同源基因。该cDNA序列长710bp,读码框含636bp,推测蛋白质序列具211个氨基酸。序列分析表明该基因系Rab11亚家族的同源基因,其推测肽链与拟南芥Rab11c的同源性最高(一致性60%,相似性79%),与人类Rab11b次之(一致性58%,相似性78%)。该氨基酸序列拥有Rab鸟苷三磷酸酶家族的所有保守结构域和特异性Rab结构域(RabF1-5)。进化树分析也表明该基因系Rab11的同源基因。序列分析还显示该基因的基因组DNA序列与cDNA序列完全一致,提示该基因无内含子。结论分析表明该基因是阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶同源基因,其功能有待进一步研究。     

一种简便的非同位素原位杂交方法

介绍一种简便的原位杂交方法，该方法操作简便、易行，在检测多拷贝基因组时具有一定的敏感性，同时兼有组织形态保持较好，背景干净的优点，比较适合于临床病毒病原体的检测。     

复方中药"克瘤宁"对人食管癌的抗癌作用及其机理研究

目的:探讨复方中药“克瘤宁”对人食管癌的抗癌作用及其机理。方法:①应用光镜、透射电镜,观察复方中药“克瘤宁”诱导人食管癌细胞株EC109细胞凋亡的作用;②用“克瘤宁”对移植人食管癌8d后的裸鼠进行治疗,实验共分五组:“克瘤宁”高浓度组(2.4g/kg)、中浓度组(1.2g/kg)、低浓度组(0.6g/kg)、阳性对照组(平阳霉素15mg/kg)和阴性对照组(生理盐水)。“克瘤宁”灌胃给药,每天一次,连续给药36次,平阳霉素腹腔注射给药,每3d一次,共给药12次。实验重复二次。结果:①经“克瘤宁”处理的EC109细胞出现典型的细胞凋亡特征;②克瘤宁高、中、低三剂量在裸鼠体内对食管癌的抑瘤率分别为:66.36%~76.85%(P<0.01)、54.21%~55.56%(P<0.01)、38.32%~39.81%(P<0.01),阳性对照平阳霉素在裸鼠体内对食管癌的抑瘤率为51.40%~56.48%(P<0.01)。结论:①“克瘤宁”有诱导人食管癌细胞产生凋亡的作用,这可能是“克瘤宁”抗食管癌作用的重要机理;②在裸鼠可耐受的剂量下,“克瘤宁”对裸鼠移植的人食管癌有明显抗癌作用,且随着剂量增加,其抗癌疗效增加。     

人食管鳞状细胞癌裸小鼠移植瘤模型建立及其应用研究

将人食管癌手术标本直接移植于裸小鼠，建立了人食管鳞状细胞癌裸小鼠移植瘤（Eca910709），其光镜和电镜形态与原发瘤相似。移植瘤中检测到人Alu序列，证明其来源于人体。应用Eca910709，用平阳霉素（BLMA5）对其进行治疗，按15mg／kg腹腔注射给药，经重复实验，抑瘤率为58％-70％（P＜0．01），说明BLMA5对Eca910709有明显的抑瘤作用。经三个疗程治疗，Eca910709即对BLMA5产生耐药，表现在抑瘤从70％（P＜0．01）递减为34％（P＜0．05）和6％（P＞0.05）。给药剂量增加至30mg/kg，BLMA5对已耐药的Eca910709再次显示一定的抑瘤作用（抑瘤率为44％，P＜0．01）。     

珍香胶囊对人食管癌的抗癌作用及8其机制研究

目的 :探讨珍香胶囊对人食管癌的抗癌作用及其机制。 方法 :应用光镜、透射电镜和流式细胞仪 ,观察珍香胶囊诱导体外培养的人食管癌细胞株EC10 9细胞凋亡的作用 ;应用人食管癌裸鼠移植瘤模型 ,观察珍香胶囊的抗癌作用。结果 :在体外 ,经珍香胶囊处理的EC10 9细胞出现典型的细胞凋亡特征。在体内 ,珍香胶囊 3个剂量 [4 80 0mg/(kg·bw)、2 40 0mg/(kg·bw)、12 0 0mg/(kg·bw) ]对裸鼠移植的人食管癌的抑瘤率分别为 70 .80 %～ 75 .0 0 % (P <0 .0 1)、5 8.33 %～ 6 4.71% (P <0 .0 1)、37.0 4%～ 45 .10 % (P <0 .0 1) ,阳性对照平阳霉毒 (15mg/(kg·bw) )对裸鼠移植的人食管癌的抑瘤率为 5 1.33 %～ 6 0 .78% (P<0 .0 1)。结论 :珍香胶囊在体外有诱导人食管癌细胞产生凋亡的作用 ,这可能是珍香胶囊抗食管癌作用的重要机制。在裸鼠可耐受的剂量下 ,珍香胶囊对裸鼠移植的人食管癌有明显抗癌作用 ,且随着剂量增加 ,其抗癌疗效增加     

中药华泰八宝丹抗癌作用的研究

华泰八宝丹是一种纯中药制剂，用不同剂量对移植性肉瘤S-180Ehrlich腹水癌和恶性淋巴瘤腹水型LI的小鼠进行治疗，按体表面积计算给成人剂量的10倍、5倍和2.5倍，灌胃给药，经重复实验结果：肉瘤S-180抑瘤率三剂量分别为46%、61%、70%；小鼠生命延长率；Ehrlich腹水癌小鼠高剂量为40%，恶性淋巴瘤腹水型LI中、高剂量为35%和51%，对照阳性药物抑瘤率或生命延长率在25%-48%之间，以上数据经统计学处理，有显著意义或非常显著意义。说明本药有一定抑瘤作用，在小鼠可耐受的剂量下，剂量增加抑瘤效果增加。     

新生鼠卵巢FOXO3a表达水平与卵母细胞凋亡的相关性初步研究

目的:探讨新生大鼠卵巢中FOXO3a(forkhead box groupO)转录因子表达水平与卵母细胞凋亡的相关性。方法:取出生后2d、3d、8d、15d龄大鼠的卵巢,用免疫组化方法观察FOXO3a、caspase-3在卵巢组织中的定位及表达水平,且用TUNEL技术检测卵巢内卵母细胞的凋亡变化。结果:FOXO3a在新生大鼠部分卵母细胞巢内的卵母细胞核内高表达,而在卵泡发育启动后,FOXO3a则从卵母细胞的核内逐渐转移至胞浆。而在次级和成熟卵泡的卵母细胞内,FOXO3a仅出现在胞浆内。≤8d龄大鼠卵巢的部分卵母细胞核内或胞核、胞浆内可检测到caspase-3表达,2d、3d龄大鼠部分卵母细胞核内高表达。TUNEL染色与caspase-3结果相似,2d龄大鼠卵巢的卵母细胞阳性率最高。结论:生后2d大鼠卵巢的卵母细胞存在一个凋亡高峰期;在原始卵泡形成前,FOXO3a在部分卵母细胞核内高表达,并与卵母细胞的凋亡率呈一致性。     

Foxo3a转录因子参与卵母细胞的凋亡

目的 进一步探讨新生大鼠卵巢中Foxo3a（forkhead box group O）转录因子参与卵母细胞凋亡的调节机制。方法 取出生后1、2、3和4d龄大鼠的卵巢,用免疫组化方法观察Foxo3a、Bim和FasL在卵巢组织中的表达水平以及细胞定位,并且应用TdT介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）技术检测卵巢内卵母细胞的凋亡变化。结果 免疫组化显示Bim和FasL都在新生大鼠部分卵母细胞巢和原始卵泡的卵母细胞核内和胞浆高表达,且阳性率曲线都在2d达到高峰,随后逐渐降低,与TUNEL和Foxo3a的阳性率变化曲线一致。然而Bim和FasL的阳性率都低于Foxo3a的阳性率。结论 Foxo3a可能同时诱导Bim和FasL的表达从而调节卵母细胞的凋亡。     

能量限制下SIRT1高表达对大鼠卵巢生殖寿命的影响

目的观察能量限制后成年大鼠卵巢SIRT1高表达对卵巢功能和寿命的影响。方法 24只10周龄雌性SD大鼠,随机分为35%能量限制组和对照组。对照组不给予特殊处理自由取食,能量限制组予对照组食量的65%,每日调整饲料量,每周称体重。HE染色卵巢组织形态学观察及卵泡分类计数,免疫组织化学法观察SIRT1蛋白定位,Western blot检测SIRT1蛋白表达。结果能量限制组大鼠摄入能量少,体重的增长速度要低于对照组(P0.05),腹部脂肪明显少于对照组(P0.01);卵巢外观形态与对照组无异,原始卵泡数明显多于对照组(P0.01),窦状卵泡少于对照组(P0.01);SIRT1蛋白表达定位于卵母细胞的胞核,弱表达于胞浆,免疫印迹检测显示能量限制诱导大鼠卵巢组织SIRT1高表达,灰度值扫描与对照组有显著性差异(P0.05)。结论内源性SIRT1高表达可能是抑制原始卵泡的转化和发育,能量限制诱导SIRT1高表达可能对于延长卵巢的生殖寿命及提高卵巢的储备有积极作用。