抗凝血酶基因13389G缺失导致的I型抗凝血酶缺乏症

目的：对一先天性I型抗凝血酶缺乏症家系进行基因突变的检测。方法：用PCR法对先证者抗凝血酶基因的7个外显子及其侧翼内含子序列进行 扩增，PCR产物纯化后直接测序，检测其基因突变。结果：先证者表现为抗凝血酶基因外显子6区13389G缺失，引起移码突变。结论：该突变是先天性抗凝血酶缺乏症的一个新的突变位点，可以导致血栓形成。     

中国浙江义乌人群RhD真阴性和RhDel表型的分子机制研究

本研究探讨中国浙江义乌人群RhD阴性表型的分子机理。在献血人群中用盐水凝集试验筛选RhD阴性样本,并对这些阴性样本进一步通过抗人球蛋白试验和吸收放散技术鉴定真阴性和RhDel表型。然后,采用PCR—SSP法特异性扩增RhD真阴性和Rhdel样本的RHD基因10个外显子,对扩增阳性的外显子分别进行DNA序列分析。结果发现：在38例初筛RhD阴性的样本中,吸收放散法得到30例RhD真阴性和8例RhDel样本（占盐水法阴性样本的21．1％）。在30例RhD真阴性中,28例样本PCR扩增10个外显子均为阴性,2例样本仅外显子1,2和10为阳性;8例RhDel样本的10个外显子扩增均为阳性,测序发现8个样本均存在1227G〉A变异。结论：中国浙江义乌人群RhD真阴性以RHD基因全缺失为主,也存在一定比例的外显子部分缺失,RhDel表型分子机制均为1227G〉A变异。     

ABO血型新等位基因Ael08的分子生物学研究

目的研究ABO新等位基因Ael08的分子机制。方法利用单克隆抗体检测先证者标本红细胞ABO血型抗原,标准A、B、O红细胞检测血清中的ABO抗体,吸收放散试验检测红细胞上微量抗原;采用PCR技术扩增先证者ABO基因的第5~7外显子序列,PCR产物经双酶切后直接测序分析6和7外显子;扩增产物经TOPO TA克隆到质粒载体中获得单链,对所得克隆作ABO基因第6、7外显子双向测序分析;家系调查采集先证者父亲和哥哥的标本作血型血清学试验和ABO基因第6和7外显子直接测序分析。结果先证者红细胞上表达很弱的A抗原,只有通过吸收放散才能有效检出,同时其血浆中存在较强的抗-B和较弱的抗-A;直接测序分析发现:6号外显子第261位缺失杂合,7号外显子第297位A/G、467C/T、646T/A、681G/A、771C/T、829G/A、804insG/G杂合;克隆测序发现1个为常见的O02等位基因,另1个为1种新的等位基因(已被dRBC NCBI命名为Ael08),与A102比较,Ael08在第804位碱基处插入G,这导致氨基酸第268位后阅读框架发生改变,编码产物比正常A1转移酶多37个氨基酸。家系调查显示:先证者Ael08等位基因从父亲遗传所得。结论发现1个ABO新等位基因Ael08,α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶基因(A基因)第804位碱基处插入G突变导致产生Ael表型。     

一例类孟买型表型的分子机理研究

为了研究1例类孟买型的分子机理,在血清学方法初步鉴定先证者为A类孟买型的基础上,用PCR扩增先证者ABO基因第6、7外显子、FUT1基因（H）和FUT2基因（Se）的编码区序列,PCR产物经割胶纯化后直接测序分析,并应用PCR-SSP和基因扫描方法证实测序所发现的突变.FUT1基因突变通过克隆到质粒载体后测序分析.结果表明：直接测序发现先证者ABO血型基因型为A102A102,FUT1基因第682位A→G错义突变、第547-552位两碱基AG缺失（CAGAGAG→CAGAG）突变.克隆证实1条染色体上FUT1基因为A682G突变,导致M228V氨基酸突变;另一条染色体上第547-552位两碱基AG缺失,导致阅读框架发生移码,提前形成终止密码.FUT2基因为分泌基因Se^357和弱分泌基因Se^357,385杂合（第357位为T/T纯合,385位为A/T杂合）.结论：FUT1基因A682G和547-552 delAG双杂合突变是引起该例先证者表现为类孟买型的分子机理,A682G是一个新的引起类孟买型的FUT1基因突变.     

膀胱移行细胞癌与细胞角蛋白20/19

为了探寻膀胱移行细胞癌 (TCC)患者和正常人群CK2 0的真实表达模式 ,我们采用RT PCR和DNA序列分析方法对2 0 0 2年 3月至 9月收治的 43例初诊TCC患者尿脱落细胞进行检测分析。现报告如下。材料与方法　本组 43例。年龄 2 5～ 72岁 ,平均 60岁。TCC组 2 6例 ,其中G116例 ,G2 7例 ,G3 3例。非TCC组 17例 ;正常健康对照组 17例。年龄 2 4～ 70岁 ,平均 58岁。留取日间尿液 50～ 10 0ml。尿液标本低温高速离心 ,尿脱落细胞提取总RNA ,RNA溶液用随机六聚引物逆转录。参照文献 [1] ,设计针对CKl9和CK2 0cDNA的特异引物 ,表 1为CKl…     

Kidd血型系统研究进展

Kidd(JK)血型是一种重要的红幼儿因型系统,JK抗体结合补体产生溶血会导致严重的迟发性溶血性输血反应和新生儿溶血症,从分子水平了解Kidd血型的基因结构有助于对其正确定型和及早防治新生儿溶血症,近期的研究还表明,JK蛋白多肽链起着尿素转移因子作用,可能与肾单位尿素浓缩功能有关,本文主要对Kidd血型系统的蛋白质,基因结构以及基因分型方法等进行综述。     

人类血小板同种抗原相关的膜糖蛋白基因多态性研究

目的 探讨人类血小板同种抗原(human platelet alloantigen,HPA)-1～17w相关的血小板膜糖蛋白基因多态性.方法 以自行设计的PCR引物特异性扩增HPA-1～17w相关的血小板膜糖蛋白基因片段,PCR产物经酶切纯化后直接进行DNA序列分析,根据序列特征确定HPA基因型和相应膜糖蛋白基因多态性.结果 通过对112名随机汉族个体的糖蛋白基因序列分析,发现13个新的单核昔酸多态性位点和1个微卫星重复序列.其中ITGB3基因上的2个变异位点1333G/A和1960G/A引起膜糖蛋白GPⅢa的V419M和E628K氨基酸改变.结论 膜糖蛋白基因具有多态性位点,可能引起膜糖蛋白结构的改变,同时可能影响现有部分HPA基因分型方法的准确性.

Abstract：

Objective To investigate the polymorphisms of platelet membrane glycoprotein genes related to human platelet alloantigen (HPA)-1 to 17w. Methods The DNA segments of platelet membrane glycoprotein genes related to HPA-1 to 17w were amplified using author' s designed primers. The amplification products were purified and directly sequenced to identify the HPA genotype and glycoprotein gene polymorphisms. Results Thirteen new single nucleotide polymorphisms (SNPs) and a micro-satellite sequence were found in the glycoprotein genes from the 112 random samples, in which two SNPs (1333G/Aand 1960G/A) in ITGB3 gene result in two amino acid change (V419M and E628K) on glycoprotein GPⅢ a.Conclusion New variants in platelet membrane glycoprotein genes were identified, which may lead to structure change of platelet membrane glycoprotein and affect the accuracy of partial HPA genotyping method.     

ABO亚型ABw07一家系的分子生物学研究

目的 研究一个ABO亚型ABw07家系的分子机制.方法 用单克隆抗体检测先证者红细胞ABO血型抗原.标准A、B、O红细胞检测先证者血清中的ABO抗体,采用聚合酶链反应技术扩增先证者ABO基因的第6和7外显子序列,PCR产物经酶切后直接测序分析.同时PCR产物经TOPO TA克隆到质粒载体中获得单链,对所得克隆进行ABO基因双向测序分析.家系调查采集先证者父母和姐姐的标本进行血型血清学实验和ABO基因第6和7外显子直接测序分析.结果 先证者红细胞有A、B抗原,同时血清中存在抗B抗体.直接测序分析发现第261位无缺失,第297位A/G、467C/T、526C/G、657C/T、703G/A、796C/A、803G/C、930G/A、1055C/A、1096A/G杂合,可推断为A102Bw07基因型.克隆测序得到两个等位基因A102和Bw07.与B101相比,Bw07第1055位G→A,导致1个氨基酸改变:第352位氨基酸精氨酸变成谷氨酰胺.家系调查显示先证者Bw07基因从母亲遗传所得,母亲血液标本ABO血型血清学特性和测序分析结果与先证者完全一致.结论 α-1,3-半乳糖基转移酶基因(B基因)第1055位G→A突变导致产生Bw07表型,其血清中可含有抗B抗体.     

α1,3半乳糖基转移酶基因721C>T突变导致B_w亚型

目的　研究红细胞ABO血型系统Bw亚型的分子基础。方法　通过标准血型血清学方法明确鉴定2个家庭3例Bw亚型,PCR扩增Bw 亚型ABO糖基转移酶基因的增强子、启动子和第1～7外显子及侧翼内含子序列,PCR产物经割胶纯化后直接测序。同时将第6和7外显子克隆到pc DNA3.1(- )质粒,转化DH5α后进行序列分析。采用序列特异性引物-聚合酶链反应方法证实测序所发现的突变。结果　直接测序发现3例Bw亚型的基因型为B/ O杂合,其中糖基转移酶基因的第2 6 1位G杂合缺失,第72 1位C/ T杂合。克隆证实一条染色体上为正常的O等位基因,另一条染色体上B等位基因(α1,3半乳糖基转移酶基因)存在第72 1位C>T突变,导致多肽链Arg2 4 1Trp替换。序列特异性引物-聚合酶链反应检测14 0份随机样本未发现此突变。结论　α1,3半乳糖基转移酶基因第7外显子72 1C>T突变可能是Bw亚型分子遗传基础之一。     

浙江汉族人群KIR2DL3基因遗传多态性

目的探讨浙江汉族人群KIR2DL3基因的多态性分布情况。方法采用PCR测序分型方法进行KIR2DL3等位基因分型。首先合成引物特异性扩增KIR2DL3基因的两个片段,然后对KIR2DL3基因第4、5、7、8和9外显子进行测序分析,根据多态性位点格局判断样本的KIR2DL3等位基因情况。结果样本中共检测到两种等位基因,其中KIR2DL3*001等位基因占77%。结论PCR测序分型方法可有效检测KIR2DL3等位基因。