表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的基因疫苗的免疫学特性

目的测定表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的两种重组质粒AZ-pcDNA3-EF和EZ-pcDNA3-AF在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力。方法50只BALB/c小鼠随机分为5组(每组10只),将表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的两种重组质粒AZ-pcDNA3-EF和EZ-pcDNA3-AF分别免疫小鼠3次,每次间隔2周,同时设卡介苗(BCG)免疫组、空载体质粒免疫组和生理盐水对照组。最后一次免疫结束后,每组取5只小鼠血清,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测特异性抗体的滴度,并分离小鼠的脾淋巴细胞,并在体外用结核分枝杆菌(MTB)培养滤液蛋白(cu lture filtrate prote in,CFP)刺激,测定脾淋巴细胞增殖指数和γ干扰素(IFN-γ)水平。用1 m l含1×105克隆形成单位(CFU)的MTB毒株H37Rv经尾静脉感染其余每组5只BALB/c小鼠,4周后计数脾脏细菌负荷数。结果质粒AZ-pcDNA3-EF和EZ-pcDNA3-AF免疫小鼠血清的特异性抗体滴度分别为1∶1 000和1∶1 500。其脾淋巴细胞刺激指数分别为2.2和2.4,而生理盐水对照组和空载体质粒免疫组的刺激指数只有0.9和1.1;脾淋巴细胞悬液中诱发的IFN-γ分别为(5.48±0.38)ng/m l和(5.76±0.51)ng/m l,显著高于生理盐水对照组和空载体质粒免疫组(P<0.05),但与BCG免疫组的(5.55±0.31)ng/m l比较差异无统计学意义。结核毒株攻击后,与空载体质粒免疫组相比,质粒AZ-pcDNA3-EF和EZ-pcDNA3-AF免疫的BALB/c小鼠其抗MTB在脾脏中增殖有显著作用,3组脾脏细菌负荷对数值(lg,CFU/g)分别为6.08±0.25、4.63±0.11、4.50±0.32,但不及BCG免疫组的4.09±0.27。结论表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的基因疫苗在小鼠体内诱导的IFN-γ水平与BCG相当,其保护力有待进一步提高。     

肺癌四项血清学指标在肺癌患者中的表达与临床应用价值

目的 探讨肺癌四项在肺癌患者中的表达及其应用价值。方法 选取2018年8月至2020年1月安徽医科大学第四附属医院收治的100例初诊确诊为肺癌的患者为观察组,选取同时期来院就诊的85例肺部良性病变患者为对照组,比较两组血清中SCC、NSE、CYFRA21-1、CEA表达水平,同时分析观察组不同病理类型、分期上述指标的差异,分析肺癌血清四项单独及联合检测在肺癌诊断中的价值。结果 观察组血清SCC、NSE、CYFRA21-1、CEA水平均高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。肺鳞癌患者血清CYFRA21-1、SCC水平较肺腺癌及小细胞肺癌明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）;小细胞肺癌患者血清NSE水平较肺腺癌及肺鳞癌明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。肺腺癌患者血清CEA水平较肺鳞癌及小细胞肺癌明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。Ⅰ~Ⅱ期肺癌患者血清CYFRA21-1、NSE水平明显低于Ⅲ~Ⅳ期肺癌患者,差异有统计学意义（P<0.05）。而CEA、SCC水平在不同分期肺癌患者中无明显差异（P>0.05）。血清SCC、NSE、CYFRA21-1、CEA单独检测的灵敏度分别为60.0%、57.0%、37.0%和59%,而4种指标联合检测的灵敏度达75.0%;受试者工作特征曲线分析发现,4种指标联合诊断的曲线下面积为0.843。结论 肺癌血清四项指标在肺癌患者中的表达水平明显升高,四项指标联合检测对早期肺癌具有较高的诊断价值。     

结核分枝杆菌mpt64基因重组穿梭表达载体的构建与鉴定

目的在分枝杆菌系统中表达结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64。方法用PCR法扩增mpt64基因,构建表达载体穿梭质粒pDE22-mpt64。在母牛分枝杆菌中表达MPT64蛋白,间接免疫荧光和Western-blot鉴定、离子亲和层析法纯化目的蛋白。结果大肠—分枝杆菌穿梭质粒pDE22-mpt64可以在母牛分枝杆菌中复制并表达26kDa蛋白。蛋白印迹实验证实可与抗His单克隆抗体特异结合。结论成功构建了结核分枝杆菌mpt64基因重组穿梭表达质粒,为进一步研究该蛋白奠定了的基础。     

糖尿病神经病变发病机制的研究进展

越来越多的证据表明,氧化应激是导致糖尿病并发症发生的最根本原因。糖尿病神经病变是糖尿病最常见的并发症之一,急性和慢性高血糖都会引起大量活性氧(ROS)的产生及天然抗氧化机制的破坏,进而激活多元醇途径、糖基化终末产物(AGE)途径、蛋白激酶C(PKC)途径和己糖胺途径,促进糖尿病神经病变的发展。     

分枝杆菌胞壁融合表达Ag85B-ESAT-6穿梭质粒的构建

目的:构建E.coli.-BCG(Bacille Calmette-Guerin)穿梭载体，在母牛分枝杆菌细胞壁融合表达结核分枝杆菌(MTB)的分泌蛋白Ag85B-ESAT-6．方法：用聚合酶链反应(PCR)]从MTB毒株H37Rv基因中扩增出结核分枝杆菌19000抗原(19-ss)胞壁区及其上游调控元件基因，克隆入E.coli.-BCG穿梭载体pOLYG中，构建表达蛋白能嵌入细胞壁中的E.coli.-BCG穿梭载体．用间接免疫荧光染色法观察该载体携带所构建的结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B和ESAT-6基因在母牛分枝杆菌宿主中的融合表达．     

川崎病患儿急性期血清可溶性CD40配体的表达及对冠状动脉病变的诊断价值

目的探讨川崎病患儿急性期血清可溶性CD40配体(soluble CD40 ligand, sCD40L)的表达及对冠状动脉病变(coronary artery lesion, CAL)的诊断价值。方法本研究采用病例对照研究方法。选取徐州医科大学附属徐州儿童医院2021年8月至2022年8月收治的川崎病患儿127例(川崎病组), 根据冠状动脉受累程度分为CAL组和无CAL组, 选取同期于本院进行查体的健康儿童30名为健康对照组, 另选取本院同期收治的急性上呼吸道感染发热患儿30例为发热对照组。比较有无CAL组川崎病患儿与发热对照组和健康对照组血清sCD40L水平, 不同冠状动脉扩张程度CAL患儿血清sCD40L水平, 分析川崎病患儿血清sCD40L与各实验室指标的相关性和川崎病患儿并发CAL的影响因素, 评价血清sCD40L用于川崎病并发CAL的筛查效果。呈正态分布的计量资料以xˉ±s表示, 两组间比较采用独立样本t检验;多组间比较采用单因素方差分析, 两两比较采用LSD法并做Bonferroni校正。非正态分布的计量资料以M(Q₁, Q₃)表...     

定量检测破伤风类毒素酶联免疫吸附法的建立及初步应用

目的：建立定量检测破伤风类毒素（TT）抗原的双抗体夹心ELISA法,并探索其初步应用。方法：以TT抗毒素为包被抗体,大鼠抗TT多抗为检测抗体,采用相应酶标抗体检测TT抗原含量,建立双抗体夹心ELISA法,并进行方法学验证。结果：TT含量在0～0.062 5 Lf/ml范围内线性关系良好（r>0.99）。该方法与白喉类毒素、百日咳类毒素、百日咳丝状血凝素及百日咳黏附素无明显交叉反应,重复性好,特异性较强,精密度及准确度验证均符合常规质控要求。该法准确检测范围为0.000 625～0.040 000 Lf/ml,定量限度为0.000 625 Lf/ml。采用该方法对TT抗原进行吸附率检测,分别采用该法和絮状单位测定法测定6批TT的絮状含量,2种检测方法高度相关（r=0.94）。结论：建立的定量检测TT的双抗体夹心ELISA法为破伤风疫苗生产过程中TT质量控制提供了有效技术手段。     

空肠弯曲菌粘附蛋白PEB1原核表达、纯化及多克隆抗体制备

【目的】克隆、表达空肠弯曲菌表面蛋白PEB1,并制备针对该蛋白的多克隆抗体。【方法】采用PCR方法从空肠弯曲菌Penner19标准株基因组中扩增出PEB1蛋白基因,用限制性内切酶消化后插入到pUC-19克隆载体中,测序正确后,再亚克隆到融合表达载体pPro-EXHTb中,转化大肠杆菌DH5α,目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的PEB1蛋白,并经Western-blotting证实。然后,在非变性条件下用Ni-NTA亲和色谱柱纯化目的蛋白。用纯化的PEB1蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,用ELISA法检测抗体效价。【结果】在非变性条件下用Ni2＋-NTA亲和色谱柱纯化PEB1融合蛋白,纯化获得的蛋白纯度大于90%。用该融合蛋白免疫小鼠后,得到抗PEB1抗体,效价达1：2×105。【结论】成功构建了空肠弯曲菌PEB1基因原核表达载体,并获得了高纯度的PEB1蛋白及其高效价多抗,对进一步制备肠粘膜高亲和力的过敏原重组BCG打下了坚实的基础。     

结核风湿症误诊为风湿性关节炎10例

1　临床资料1.1　一般资料　本组均为住院患者 ,男 6例 ,女 4例 ;年龄 15～ 31岁。均以游走性关节红、肿、热、痛及功能障碍为主要表现 ,其中 8例有皮肤多形性红斑及结节性红斑。 10例均无结核病确诊史。1.2　辅助检查　入院后均行红细胞沉降率、抗链球菌溶血素 O、类风湿因子、结核菌素试验及胸部 X线摄片检查。结果 :类风湿因子全部阴性 ,抗链球菌溶血素 O<5 0 0 U,结核菌素试验 (2 +～ 3+ ) ,X线胸片提示肺部钙化灶 6例 ,陈旧性结核性胸膜炎 2例 ,肺结核 1例。1.3　误诊情况及结果　入院前均误诊为风湿性关节炎 ,误诊时间半年至 5年不…