可条件性诱导PLK1稳定敲降的食管癌细胞株的建立

目的： 建立可条件性诱导PLK1-shRNA稳定表达的食管癌细胞株,为深入研究PLK1在食管癌发生发展中的作用及分子机制提供细胞模型。方法：合成PLK1-shRNA寡核苷酸,退火后连接到慢病毒表达载体pLKO-Tet-On并转化至感受态细胞Stbl3,利用菌落PCR和测序分析鉴定阳性重组子。用pLKO-shPLK1-Tet-On重组质粒和包装质粒共转染293T细胞,收集病毒上清,感染食管癌细胞KYSE510,利用嘌呤霉素筛选可诱导PLK1-shRNA稳定表达的细胞株。采用qRT-PCR和Western blot检测强力霉素(Dox)诱导PLK1-shRNA表达的效率。结果：菌落PCR和测序分析结果显示,pLKO-shPLK1-Tet-On重组质粒中PLK1-shRNA的序列及插入位点正确。包装、收获病毒并感染KYSE510细胞后,筛选获得了具有嘌呤霉素抗性的稳定细胞株KYSE510-shPLK1-Tet-On。qRT-PCR和Western blot的检测结果显示,0.1 μg/mL Dox即可显著下调KYSE510-shPLK1-Tet-On细胞中PLK1的表达。结论：成功构建了诱导型PLK1-shRNA慢病毒表达载体,并筛选获得了可条件性诱导PLK1稳定敲降的食管癌细胞株,为进一步探讨PLK1异常表达与食管癌发生发展的关系提供了理想的细胞模型。     

玻璃体腔注射塞来昔布抑制大鼠视网膜新生血管的作用

目的:通过对大鼠氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy,OIR)模型进行玻璃体腔注射塞来昔布,探讨塞来昔布在OIR中对视网膜新生血管的作用及其机制.方法:选取7天龄SD乳鼠96只随机分为6组:Z组:正常组;O组:OIR组;A组:OIR+溶媒对照组;B组:OIR+塞来昔布5μg组;C组:OIR+塞来昔布20μg组;D组:OIR+塞来昔布80μg组.除Z组在正常环境饲养外,其余各组乳鼠均建立OIR模型.乳鼠于生后第12 d出氧箱后给予玻璃体内注射二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)及相应剂量的塞来昔布,于生后第17 d处死,做组织切片HE染色观察视网膜组织形态并计数突破内界膜的血管内皮细胞核数,石蜡切片行免疫组化染色检测VEGF蛋白的表达.结果:HE染色显示,Z组、O组、A组、B组、C组、D组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数分别为0.44±0.18、30.60±5.36、28.05±4.68、19.58±4.58、10.13±1.93、7.58±2.68个;除O组与A组外,各组间差异均有统计学意义(P<0.05),经塞来昔布治疗后,突破内界膜的血管内皮细胞核明显减少,且与剂量正相关;免疫组化结果显示,Z组VEGF蛋白表达呈阴性,表达率为10%,其余各组可见VEGF蛋白的阳性表达,O、A组阳性表达较高,阳性率分别为90%、86%,表现为棕褐色颗粒或团块,均高于B、C、D组,且三组的阳性表达依次减低为68%、42%、30%.结论:塞来昔布能够有效抑制大鼠OIR模型视网膜新生血管的生长,且抑制效果与剂量正相关,其作用可能通过抑制VEGF表达实现.     

人牙周膜干细胞、脐带间充质干细胞对体外培养角膜缘干细胞的影响

目的　比较人牙周膜干细胞（ｈｕｍａｎｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｌｉｇａｍｅｎｔｓｔｅｍｃｅｌｌｓ,ＨＰＤＬＳＣｓ）、人脐带间充质干细胞（ｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｃｏｒｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ,ＨＵＣＭＳＣｓ）作为饲养层培养角膜缘干细胞（ｌｉｍｂａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ,ＬＳＣｓ）的优越性,从而筛选出扩增ＬＳＣｓ的最佳饲养层。方法　体外分离培养ＨＰＤＬＳＣｓ、ＨＵＣＭＳＣｓ,诱导细胞成脂、成骨分化,并检测细胞表面标志物的表达;将兔ＬＳＣｓ与ＨＰＤＬＳＣｓ、ＨＵＣＭＳＣｓ、ＮＩＨ-３Ｔ３共培养和无饲养层单独培养,比较各组克隆形成率,免疫荧光比较各组ＬＳＣｓ克隆团ＡＢＣＢ５、ＩＰＯ１３、ＣＫ３／１２的表达情况。结果　体外培养ＨＰＤＬＳＣｓ、ＨＵＣＭＳＣｓ均可向脂肪、成骨细胞分化,两种细胞均高表达间充质来源的表面标志ＣＤ９０,不表达ＣＤ４５;三组饲养层与兔ＬＳＣｓ共培养均可形成小克隆团, ＨＰＤＬＳＣｓ组、ＨＵＣＭＳＣｓ组、ＮＩＨ-３Ｔ３组、无饲养层组克隆形成率分别为（４．９０±０．９６）％、（４．１０±０．５６）％、（４．６７±０．７６）％、（０．８３±０．３５）％,四组间总体比较差异有统计学意义（Ｆ＝２２．０４７,Ｐ＝０．００）;ＨＰＤＬＳＣｓ组、ＨＵＣＭＳＣｓ组与ＮＩＨ-３Ｔ３组的克隆形成率差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）;ＨＰＤＬＳＣｓ组、ＨＵＣＭＳＣｓ组、ＮＩＨ-３Ｔ３组与无饲养层组间差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。免疫荧光化学检测三种饲养层ＬＳＣｓ标志物ＡＢＣＢ５、ＩＰＯ１３呈高表达,ＣＫ３／１２呈低表达。结论　ＨＰＤＬＳＣｓ、ＨＵＣＭＳＣｓ均可作为替代饲养层用以培养ＬＳＣｓ。     

基质蛋白Fibulin-5在眼眶IgG4相关性疾病中的表达

目的　探讨基质蛋白Ｆｉｂｕｌｉｎ-５与眼眶ＩｇＧ４相关性疾病（ＩｇＧ４-ｒｅｌａｔｅｄｏｃｕｌａｒｄｉｓ-ｅａｓｅ,ＩｇＧ４-ＲＯＤ）纤维化、炎症、硬化的关系。方法　收集２０例（２０眼）眼眶开放性粉碎性骨折清创术中采集的正常泪腺组织标本作为对照组,２０例（２０眼）眼眶ＩｇＧ４-ＲＯＤ患者的泪腺肿物作为ＩｇＧ４-ＲＯＤ组,采用免疫组织化学染色结合图像分析法对基质蛋白Ｆｉｂｕｌｉｎ-５进行半定量分析,采用实时荧光定量ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ-ｂｌｏｔｔｉｎｇ法检测Ｆｉｂｕｌｉｎ-５ｍＲＮＡ及蛋白的相对表达量。结果　ＩｇＧ４-ＲＯＤ组中Ｆｉｂｕｌｉｎ-５ｍＲＮＡ的表达水平为３．６９±１．７２,显著高于对照组（１．６９±０．４５）,两组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。Ｆｉｂｕｌｉｎ-５蛋白与Ｆｉｂ-ｕｌｉｎ-５ｍＲＮＡ表达变化趋势较为一致。ＩｇＧ４-ＲＯＤ组中Ｆｉｂｕｌｉｎ-５蛋白的表达水平为０．５５±０．１２,对照组中Ｆｉｂｕｌｉｎ-５蛋白表达水平为０．１９±０．１１,两组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。免疫组织化学结果显示,ＩｇＧ４-ＲＯＤ组中泪腺细胞排列不规则,染色为黄色、棕黄色的纤维化细胞排列紊乱,对照组中泪腺腺管规则,细胞规则排列,核染蓝色。ＩｇＧ４-ＲＯＤ组Ｆｉｂｕｌｉｎ-５蛋白的阳性表达显著高于对照组。结论　ＩｇＧ４-ＲＯＤ组中Ｆｉｂｕｌｉｎ-５ｍＲＮＡ和蛋白表达较对照组显著升高,Ｆｉｂｕｌｉｎ-５可能促进眼眶ＩｇＧ４-ＲＯＤ的纤维化及硬化。     

不同浓度氢氧化铝对人用狂犬病纯化疫苗效力的影响

目的 探讨不同浓度氢氧化铝对人用狂犬病纯化疫苗效力的影响。方法 将同批人用狂犬病纯化疫苗分成4亚批，第1、2、3亚批分别加入氢氧化铝，最终农度依次为0．70、0．50及0．20mg／ml，第4亚批不加氢氧化铝；分别免疫小白鼠后，进行NIH效力实验，同时分别将4批疫苗放置4℃ 4周、22℃ 4周、37℃ 2周后，进行稳定性实验。结果 各组疫苗在4℃ 4周、22℃ 4周、37℃ 2周效价及ED50均无显著性差异。结论 不同浓度氢氧化铝对人用狂犬病纯化疫苗效力无影响。     

肝外伤后肺栓塞2例分析

我院1989—10／2006—06共收治肝脏损伤后发生肺栓塞2例，分析如下。 1病历摘要 例1：男，45岁。腹部冲击伤，B超或CT检查肝被膜下积血，靠近第二肝门肝实质内有血肿4cm×5cm，少量腹腔积液，无其他脏器损伤，无明显腹膜炎体征，我们在连续严密监测的情况下给予保守治疗，应用止血药物，第五天翻身拍背协助咳痰时，     

食管癌中癌基因MUC4的变化及临床病理意义

目的探讨癌基因MUC4在食管癌中的拷贝数变化及其意义。方法应用FISH方法检测MUC4基因在35例食管癌组织中的拷贝数变化,并与18例癌旁组织做对比研究。结果 MUC4基因在35例食管癌组织均出现高频率(100％)扩增,18例癌旁组织中仅5例出现低频率扩增(27.8％),两者之间差异极显著(P0.05)。 结论MUCA基因扩增可能与食管癌的发生关系密切。     

食管癌组织中cystatin B基因、D10-86 cDNA片段的表达

目的:研究食管癌组织中cystatin B基因、D10-86 cDNA片段的表达及相关性。方法:采用RT-PCR方法检测了41对食管癌组织及配对食管癌旁正常黏膜cystatin B基因、D10-86 cDNA片段的表达。结果:cystatin B基因、D10-86 cDNA片段各在82.9％(34/41)、41.5％(17/41)食管癌组织中的表达水平低于配对的食管癌旁正常黏膜,cystatin B基因的表达下调情况显著高于D10-86 cDNA片段(P<0.05),但2者的表达无相关性(JD>0.05)。结论:cystatin B基因、D10-86 cDNA片段在食管癌中表达下调,可能源于不同的机制。2者可能分别是由不同的机制而导致在食管癌组织中表达下调。     

多色荧光原位杂交技术检测结直肠癌早期染色体改变的研究

目的 分析我国结直肠癌(CRC)及结直肠腺瘤染色体畸变情况,探讨通过多色荧光原位杂交(M-FISH)技术检测染色体变化,用于CRC早期诊断及评估腺瘤恶性变倾向的可行性和有效性.方法 选择7、8、12和20号染色体探针应用M-FISH技术检测161例患者的183份结直肠病变组织,包括65份腺瘤组织、19份癌旁腺瘤组织和99份腺癌组织.分析结直肠腺癌和腺瘤与临床病理参数之间的关系.结果 7、8、12和20号染色体在腺癌组织中有较高的增益畸变率,分别为82.1%(55/67)、70.1%(47/67)、60.9%(56/92)和72.8%(67/92);在癌旁腺瘤组织亦有较高的增益畸变率,分别为76.5%(13/17)、41.2%(7/17)、50%(9/18)和72.2%(13/18);7号和20号染色体增益畸变同时出现在同一个患者的腺癌与腺瘤标本中的频率较高.结论 7、8、12和20号染色体在腺癌及腺瘤组织中均存在较高的染色体数目畸变率;其中7号与20号染色体增益畸变有可能成为CRC早期预警标志.M-FISH技术检测可能有助于CRC的早期诊断.