一氧化氮与血液细胞的凋亡和分化

一氧化氮是一种有广泛作用的生物活性介质,在细胞凋亡和分化中有着重要作用。本文就近年关于一氧化氮诱导、抑制血液细胞凋亡机制及其影响因素,一氧化氮与血液细胞的分化等作一综述。     

人GLIPR-2基因的克隆及在原核中可溶性表达

目的构建pQE80L-GLIPR-2载体,并检测融合蛋白RGS·His-GLIPR-2在原核中的表达水平。方法采用RTPCR方法,将克隆人GLIPR-2(glioma pathogenesis related-2,GLIPR-2)基因全长编码区的cDNA连接到原核表达载体pQE80L中,经IPTG诱导原核表达,通过Western blot检测融合蛋白RGS·His-GLIPR-2的表达水平。超声破壁后,通过SDS-PAGE电泳分析表达产物的表达形式。结果成功构建pQE80L-GLIPR-2载体;经IPTG的诱导,GLIPR-2可与RGS·His以融合蛋白的形式高效表达。经Western blot鉴定,pQE80L-GLIPR-2在原核内表达产物相对分子质量为18000,与预期融合蛋白大小一致。对表达产物可溶性分析表明,表达蛋白在上清液中和包涵体中均有表达。结论成功构建的重组质粒能够在大肠杆菌中高效表达可溶性目的蛋白,为进一步研究GLIPR-2基因的功能和意义奠定了基础。     

人TLR2和TLR4胞外区cDNA的克隆

目的 从脂多糖诱导的外周血单个核细胞克隆人Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)胞外区cDNA.方法 用不同浓度脂多糖在不同时间刺激单个核细胞后提取总RNA,RT-PCR方法半定量测定TLR2和TLR4的表达,应用pUCm-T载体克隆胞外区cDNA,双酶切以及DNA测序进行鉴定.结果 单个核细胞在四种浓度脂多糖刺激3 h,6 h和12 h后.TLR2和TLR4表达并不相同.15 μg/mL脂多糖作用6 h TLR2表达最高,10 μg/mL脂多糖作用3 hTLR4表达最高.经RT-PCR扩增TLR2和TLR4胞外区cDNA分别为1 700 bp和1 900 bp,T载体克隆、酶切鉴定及测序分析后证实,目的 片段与GenBank中序列一致.结论 脂多糖的诱导对外周血单个核细胞TLR2和TLR4表达有显著影响,并且成功克隆了胞外区cDNA.     

微流控免疫芯片快速检测法的建立及其检测TSH和T4的效果

目的 在已制备的微流控芯片系统上建立基于顺磁微球的免疫检测方法,并将此方法用于检测促甲状腺激素（TSH）和甲状腺素（T4）。方法 采用数字激光刻蚀技术制备微流控芯片,以luminol-H2O2为发光体系,用双抗夹心法测定TSH,用免疫竞争法测定T4。结果 该检测系统可以在25min内完成检测,所需的标本和抗体试剂量为10山,TSH检测范围为0～50μIU／ml,批内CV平均为4．9％,批间CV平均为4．9％,平均回收率为93．74％;T4检测范围为9．375～300ng／ml,批内CV平均为4．9％,批间CV平均为4．7％,平均回收率为91．27％。结论 本方法检测TSH和T4具有操作简便、节约时间、节省试剂、稳定性好、准确度高的优点。     

TBHBA为色原的丙氨酸氨基转移酶分析方法的建立及评价

目的建立一种高灵敏度、可见光比色的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定新方法,评价其临床应用价值。方法以2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸(TBHBA)为色原,在500 nm处测定红色醌类化合物的吸光度,与血清中的ALT活性呈正比,并与IFCC推荐的速率法测定ALT的结果进行比较。结果该方法线性范围为3.0~1 000.0 U/L,其高值、临界值和低值的不精密度分别为3.82%,4.17%,0.32%。结论该方法灵敏度高、可用可见光检测,为研制结构更为简单的检测仪器奠定了基础。     

GITR抗体介导增强NK细胞杀伤活性的实验研究

目的探讨糖皮质激素诱导的TNF受体家族相关受体（glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor family related receptor．GITR）抗体通过调节Treg细胞和NK细胞的功能对L615白血病细胞增殖的影响．了解NK细胞对白血病细胞的杀伤活性。方法通过不同的给药方式将L615白血病小鼠设立为4个实验组．提取实验分组后的小鼠脾脏中NK细胞作为效应细胞．以L615白血病细胞作为靶细胞．在体外观察了NK细胞的杀伤活性变化情况．并运用RT-PCR进一步观察了体现NK细胞杀伤活性的几个相关指标的变化。结果GITR抗体可以明显增强小鼠脾脏中NK细胞的杀伤活性．表现为同NK细胞活性密切相关的3个指标穿孔素（Perforin）、γ干扰素（IFN-γ）、Fas的表达量明显增加。结论GITR抗体能够通过Treg细胞的调节增强NK细胞的杀伤活性,进而有效的抑制L615自血病细胞。     

适度运动对人体肠道菌群结构的影响

目的 适度运动有益于身心健康.本研究从肠道菌群结构的角度来探讨运动对人体健康的影响.方法 招募运动组和少动组志愿者人群,利用16S rDNA高通量测序技术分析志愿者肠道菌群结构.结果 高通量测序共获得61 888个OTUs,其中已注释的OTUs有61 149个.PCoA分析显示,运动组和少动组之间肠道菌群结构存在显著差异.运动组中毛螺菌科(Lachnospiraceae)和拟杆菌科(Bacteroidaceae)的丰度显著高于少动组(P=2.5627×10-7,P =0.000 178 4),普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)和韦荣氏球菌科(Veillonellaceae)的丰度显著低于少动组(P=0.000 003 46,P=0.000017 41).有3株可培养的菌株在运动组中丰度显著增加,分别为瘤胃球菌属的Ruminococcus_sp.5_1_39BFAA,双歧杆菌属的Bifidobacterium_adolescentis以及丁酸产盐菌属的Anaerostipes_hadrus.在运动组中显著增加的肠道菌,如拟杆菌科,双歧杆菌属的Bifidobacterium_adolescentis以及Anaerostipes_hadrus,能够代谢产生丰富的SCFAs,对肠粘膜免疫系统动态平衡的维持具有重要意义.结论 运动可能通过肠道菌群结构的改变及其与肠黏膜系统的相互作用对人体产生积极影响.     

血清铁与蛋白在肾病综合征成年患者中的关系

目的探讨肾病综合征（Ns）成年患者血清铁（SI）与血清总蛋白（TP）、清蛋白（Alb）、球蛋白（Glb）、超敏C-反应蛋白（hs—CRP）以及清蛋白／球蛋白比值（A／G）之间的关系。方法健康对照组和肾病综合征组中的SI、TP和Alb分别用比色法、双缩脲法和溴甲酚紫法进行检测,用免疫比浊法检测hs—CRP,Glb=TP—Alb,A／G=Alb／Glb。结果NS组中SI与TP（r=0．439,P〈0．001）、Alb（r=0．448,P〈0．001）、hs—CRP（r=0．39,P〈0．01）以及A／G（r=0．372,P〈0．001）具有相关性,差异有统计学意义,而与Glb则无相关性,差异无统计学意义（P〉0．05）;健康对照组中,血清铁与血清TP、Alb、Glb、hs-CRP、A／G间均不存在相关关系,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论NS患者中血清铁的水平与TP、Alb、hs—CRP和A／G之间具有密切的关系。     

同步检测两种输血传播病原体的蛋白微阵列的研究

目的建立一种基于多元蛋白微阵列的免疫检测方法,用于筛查人血清中艾滋病毒、丙型肝炎病毒。方法将HIV/HCV抗原喷印到活化的玻片表面,抗原与活化基团共价结合后与血清中的特异性抗体反应,用激光芯片扫描系统对蛋白微阵列进行扫描成像。所获得的图像用软件进行分析,并自动判定并生成待测样本的定性结果。结果蛋白微阵列法检测HIV、HCV两种定值血清检测限分别为：12ng/ml、5ng/ml。运用该系统检测HIV、HCV两种抗体参比品,各检测项目的符合率分别为87.5%、93.75%。结论多元蛋白微阵列法特异性强,灵敏度、准确度、精密度较高,具有应用和推广价值。     

鹌鹑空肠弯曲菌对理化及部分药物抵抗力的观察

目的探讨空肠弯曲菌对理化及部分药物的抵抗力。方法分别用紫外线、热力、微波、多种化学消毒剂处理培养的空肠弯曲菌,观察其对部分药物的敏感性。结果鹌鹑空肠弯曲菌对紫外线、热力和微波等物理因子均很敏感,在24种化学消毒剂中除对低浓度甲醛、呋喃西林、间苯二酚、迭氮钠、硫柳汞和碳酸氢钠有一定的耐受力外,大多数均能在1min内杀死该菌;本菌对多数抗菌药物敏感,其中以头孢噻肟、呋喃妥因、妥布霉素、强力霉素、呋喃妥因、痢特灵、红霉素、卡那霉素和氯霉素等为最。结论鹌鹑空肠弯曲菌对理、化、生因子的抵抗力较弱,常规消毒方法及常用抗菌药物均能有效杀灭该菌。