非分型流感嗜血杆菌Haps蛋白的分离纯化

目的优化非分型流感嗜血杆菌Haps蛋白质片段的分离纯化方法。方法采用盐析、透析脱盐、超滤浓缩、弱阳离子交换柱Hitrap CM Sepharose Fast Flow层析纯化HapS蛋白,优化Hap。蛋白质片段的洗脱条件,包括pH值和离子强度,测定各洗脱液样品在280nm波长处的光吸收值（D280）,用折线图显示,SDS-PAGE电泳检测分布图中处于峰值的样品,观察目的蛋白条带的出现。结果弱阳离子交换柱Hitrap CM Sepharose Fast Flow层析纯化HapS蛋白,缓冲液l洗脱液的D280分布为基线,缓冲液2洗脱液的D280分布折线图中有峰值出现,但峰有拖尾,SDS-PAGE电泳检测该洗脱峰主要为低分子量的蛋白条带;五种不同离子强度的缓冲液3洗脱液在100mmol／L NaCl离子强度时,D280的分布折线图显示有较高洗脱峰出现,SDS-PAGE电泳检测该洗脱峰有较明显的110000D的目的条带,其余离子强度下均未见明显洗脱峰出现。结论Sepharose CM FF层析柱分离纯化Haps蛋白质片段时,不同pH值的缓冲液对目的蛋白的洗脱没有明显影响,而主要影响杂蛋白的洗脱;100mmol／L NaCl离子强度的缓冲液3洗脱液获得较好的洗脱效果。     

人乳头瘤病毒16L1-E5表达质粒的构建及其蛋白表达

目的构建人乳头瘤病毒16L1-E5的原核表达质粒,并进行表达融合蛋白,为下一步探讨该蛋白是否能作为疫苗的研究作准备。方法以本室已构建好的阳性质粒pET32（＋）／HPV16E5为模板,PCR获得E5基因,经SalI和NotI双酶切插入已构建好的pGEX4T-1／HPV16L1,通过筛选获得正确的阳性克隆pGEX4T-1／HPV16L1-E5。pGEX4T-1／HPV16L1-E5转化入BL21感受态细胞,经IPTG诱导进行目的蛋白的表达,通过测定不同时间、不同IPTG浓度和不同温度时目的蛋白表达情况,获得蛋白表达的最佳条件,SDS-PAGE和Westernblot检测蛋白表达。结果成功构建了质粒pGEX4T-1／HPV16L1-E5,在1mmol／L IPTG、34℃、4h诱导获得最大量的目的蛋白表达。结论成功构建的pGEX4T-1／HPV16L1-E5质粒能表达出目的蛋白,为进一步研究目的蛋白功能打下了坚实的基础。     

全口义齿失败的原因(附140例分析)

我科自1979年1月至1984年12月共收集了由于各种制作上的原因使全口义齿不能使用者140例。这些病例经临床仔细分析研究,找出义齿失败的主要原因,并采取改进或重新制作的措施获得成功,现将140病例分析如下。     

缺失牙和不良修复体引起颞下颌关节紊乱综合征

我科自1981年2月以来共诊治了颞下颌关节紊乱综合征患者396例,其中明显由缺失牙和不良修复体引起的有79例(20％)。在去除不良修复体或缺失牙重新获得符合生理要求的修复体后结合肌肉训练,这些病例的病情得到迅速的改善、痊愈。为了进一步证实二者之间的因果关系,现将有关临床研究报道如下。     

成都地区HLA分型的研究Ⅱ.HLA抗血清的集群及特异性鉴定(摘要)

1980年,我们从初筛的346份抗HLA阳性血清中,选114份强阳性者进行集群分析及特异性鉴定。由于彼时缺乏已知HLA特异性标准细胞,用双盲棋盘分析,通过电子计算机集群及相关分析获得HLA抗血清。在可集群的72份血清中,60份能鉴定特异性,其中19份可作为分型血清。还用1000个已知HLA抗原的淋巴细胞对所筛HLA抗血清作了特异性鉴定,并与集群分析进行比较。     

抗原特异性B淋巴细胞的抗原递呈作用

取经两次卵白蛋白和破伤风类毒素抗原免疫后的B细胞,用T细胞增殖试验和IL2活性检测法,观察经两次抗原免疫后的B细胞的抗原提呈作用,结果显示,此种B细胞对特异性抗原的提呈作用显著增强,抗原免疫后的B细胞对特异抗原提呈时所需的浓度较未免疫B细胞低1000倍以上,但对非特异抗原的提呈作用无显著提高。当分别加入抗鼠IgM抗体和溶酶体酶抑制剂氯奎时,B细胞的抗原提呈作用消失,提示B细胞膜表面IgM在抗原提呈中有重要作用,并揭示B细胞需预先处理抗原,才能将抗原提呈给T细胞。     

SARS相关冠状病毒M蛋白基因重组核酸疫苗的实验研究

目的：构建针对SAILS相关冠状病毒M蛋白基因的重组核酸疫苗，观察其免疫小鼠后肌体的抗体产生情况，探讨其作为抗SAILS病毒疫苗的可能性。方法：通过分子生物学的方法构建SARS相关冠状病毒M蛋白基因真核表达质粒pcDNA3．1／M。经肌注免疫健康BALB／c小鼠，在免疫后的2．4、6周取小鼠血清，用ELISA法检测其中的抗体。结果：接种含M基因的真核表达质粒pcDNA3．1／M的低剂量组和高剂量组的小鼠血清在接种2周后就可检测出SARS-CoV特异性IgG，第4周时，这种特异性IgG水平有升高趋势，第6周时，血清中的抗体含量与4周时无大的差异。高剂量组产生抗体与低剂量组产生抗体无显著差异。pcDNA3．1空载体接种的对照组未检测出特异性抗体（其OD值低于0．18）。结论：构建的真核表达质粒pcDNA3．1／M能诱导小鼠产生了针对SARS的抗体。     

人乳头瘤病毒16L1原核表达质粒的构建

目的：构建人乳头瘤病毒16L1的原核表达质粒，为下一步探讨蛋白的表达以及蛋白的功能研究作准备。方法：以临床HPV16阳性标本为模板，PCR扩增L1的片段，L1片段经EcoRI和SalⅠ双酶切后，插入载体pGEX4T-1，转化JM109感受态细胞，平板筛选获得pGEX4T-1／HPV L1的阳性质粒。通过酶切、测序验证质粒的正确性。结果：构建了原核表达质粒pGEX4T-1／HPV16L1，并通过酶切、测序等方法验证其完全正确。结论：成功构建的pGEX4T-1／HPVL1为今后的蛋白的表达和功能研究打好了坚实的基础，为HPV16的疫苗研究提供了有益的支持。     

免疫毒素IP10-DT390核酸制剂对实验性变态反应性脑脊髓炎的治疗作用

研究重组免疫毒素杀伤活化T细胞后,对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的发生和发展产生的抑制作用。利用含有编码重组免疫毒素IP10-DT390的真核质粒,直接导入动物肌肉,使IP10-DT390在骨骼肌内表达,通过IP10-DT390对活化T细胞的选择性杀伤,探索对EAE的治疗效果。实验结果显示,这种新型免疫毒素核酸制剂可以减轻EAE模型鼠的发病症状、选择性的减少中枢系统自身活化的T淋巴细胞浸润、降低外周血T细胞数量,而对免疫反应的其他成分影响不明显。该免疫毒素核酸制剂可能成为治疗有关自身免疫性疾病的一种新的有效方法。