牙龈卟啉单胞菌prtH基因分布与多态性研究

目的　分析牙龈卟啉单胞菌 (P .gingivalis)prtH基因的遗传多态性 ,从而了解细菌变异与其对牙周致病作用的相关性。方法　以PCR技术从牙周炎患者口腔中分离的P .gingivalis进行prtH基因扩增 ;采用斑点杂交法 ,以生物素标记prtH基因为探针 ,与以引物B进行PCR扩增为阳性的P .gingivalis基因组DNA杂交 ;对PCR产物进行AluⅠ限制性酶切和DNA测序分析。结果　以prtH基因A、B引物对 14 0株临床分离株进行PCR扩增 ,分别在 76例 (引物A)和 117例 (引物B)出现阳性扩增产物 ,阳性率分别为 5 4 .2 %、84 %。对 34例引物B扩增阳性的P .gingivalisDNA进行点杂交检测 ,阳性吻合率为 82 .4 %。与GenBank中菌株ATCC332 77(U15 2 82 )和W83(L2 74 83)的prtH基因序列相比 ,5株P .gingivalisPCR扩增产物的测序存在着缺失和点突变。结论　在慢性牙周炎患者临床P .gingivalis分离菌株中存在着prtH基因的遗传多态性 ,本实验建立了具有高度敏感性和特异性的PCR检测方法     

进入疯牛病和变异型克雅氏病消除阶段的动物及人类朊病毒病监测

目的 朊病毒病又称可传播性海绵状脑病,是一类侵袭人类及多种动物中枢神经系统的传染性退行性脑病。1986年,在英国的农场最先发现疯牛病,随后大面积暴发,在1992年达到高峰,而由食用疯牛病病牛之后出现的变异型克雅氏病出现于1995年,并在2000年达到高峰。由于严格禁令、彻底的扑杀以及主动的监测,虽然疯牛病和变异型克雅氏病在过去的三年里还未完全清零,但短期内大规模反弹的可能性非常之小。人类朊病毒病的全球监测始于1993年的部分欧洲国家,很快扩展到绝大部分欧洲国家、北美、大洋洲和东北亚,包括我国自2006年正式启动全国克雅氏病监测。这些监测体系的建立都为防止再次出现灾难性的公共卫生问题奠定了基础。     

盐酸丁咯地尔原料中有机溶剂残留量测定

本参照《中国药典》2000年版,通过方法学试验,建立了异丙醇、甲苯残留量的测定方法。     

JNK/FOXO3信号通路介导黄连素促人肺腺癌PC-9细胞凋亡的研究

  目的  探讨黄连素（berberine,Ber）诱导肺腺癌PC-9细胞凋亡及c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）/转录因子叉头蛋白3（forkhead box protein O3,FOXO3）信号通路的作用机制。  方法  实验采用完全随机化的分组方法,分为对照组、Ber组（30、60 μM）,分别检测各组PC-9细胞活力值、凋亡率、ROS含量、caspase 3活性、线粒体膜电位,以及JNK/FOXO3通路和凋亡相关蛋白含量的变化。SP600125特异性抑制JNK（磷酸化）激活后,Ber（0、60 μM）处理细胞24 h,重复上述检测。  结果  Ber有效抑制PC-9细胞活力,促进细胞凋亡（P < 0.05）,显著降低PC-9细胞线粒体膜电位,增加ROS含量和caspase 3活性（P < 0.05）,并呈浓度依赖效应;Western blot检测结果显示Ber上调p-JNK、FOXO3和Bax的含量（P < 0.05）,下调p-FOXO3和Bcl-2的含量（P < 0.05）;SP600125特异性抑制JNK激活后,拮抗Ber下调p-FOXO3含量及其促PC-9细胞凋亡作用（P < 0.05）。  结论  Ber可有效抑制肺腺癌PC-9细胞活力、促进细胞凋亡和氧化应激损伤,作用机制可能与上调p-JNK、FOXO3含量和抑制FOXO3磷酸化有关。      

甲状旁腺功能减退症一例

患者女29岁,手足搐搦、癫痫样发作,间歇发作约十年,情绪不稳定,查体：面肌扣击痛（Chvostek征）阳性（＋＋）,束臂加压实验（Trousseau征）阳性。患者智力正常,情绪不甚稳定。否认家族内存在类似病例。育有一女。     

医护情况差异对散发型克-雅病患者生存期影响的研究

目的了解我国散发型克-雅病患者的医疗护理情况及其与生存时间的关系。方法采用回顾性分析2021年1月1日至2022年12月31日期间经我国克-雅病监测网络诊断的150例散发型克-雅病患者, 对家属进行电话随访获得患者确诊后的护理、治疗情况及生存情况。通过寿命表法估算生存率, Kaplan-Meier法计算中位生存时间、95%CI, log-rank法比较不同组间生存时间差异以及通过COX比例风险回归模型多因素分析关于患者生存时间的影响因素。结果 150例散发型克-雅病患者中位生存时间为6个月(95%CI:4.621～7.379), 2、6、12、18个月的累积生存率分别为62%、39%、22%、9%;单因素分析结果显示, 首发症状有无皮质性失明、是否进行呼吸支持(氧疗)、是否进行辅助药物治疗以及是否进行管饲(鼻饲), 组间生存时间差异比较P<0.1;多因素COX回归分析结果显示, 未进行辅助药物治疗的患者死亡风险是有辅助药物治疗患者的1.429倍(95.0%CI:1.014～2.014), 未使用管饲(鼻饲)患者的死亡风险是使用管饲(鼻饲)患者的1.479倍(95.0%CI:1.0...     

人朊病毒多肽抗体的制备及应用

目的 利用人工合成人朊病毒蛋白（ＰｒＰ）多肽制备特异性抗ＰｒＰ抗体,以期用于朊病毒相关疾病的临床诊断。方法 根据ＰｒＰ基因编码的氨基酸序列合成多肽,与载体偶联合免疫动物,所制备的抗血清用ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定。结果 ＥＬＩＳＡ检测表明所制备的抗血清可同多种ＰｒＰ发生一反应;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果显示抗血清可与正常组织ＰｒＰ＾ｃ和病理组织的ＰｒＰ＾ｓｃ反应;用蛋白酶Ｋ处理,可     

单纯保乳术与肿瘤整形保乳术的临床应用研究

目的 评估单纯保乳术与肿瘤整形保乳术在乳腺癌治疗中的效果,为患者提供更优治疗方案。方法 收集2021年1月至2022年9月在湘南学院附属医院乳腺甲状腺胸外科接受治疗的乳腺癌患者,按手术方法将其分为单纯保乳术组（n=42例）和肿瘤整形保乳术组（n=42例）,记录随访数据,比较两组患者在术后并发症、美容效果及局部复发率方面的差异。结果 两组患者在局部复发率及血肿、术口感染、皮瓣部分坏死等并发症上无显著差异（P>0.05）。肿瘤整形保乳术组在美容效果上显著优于单纯保乳术组（P<0.05）。结论 肿瘤整形保乳术在美容效果上优于单纯保乳术。     

Prion蛋白SOD活性研究进展

PrP^c的生理功能至今仍未完全清楚,但目前认为PrP^c在神经信号传导、参与铜代谢、抗氧化活性、细胞黏附和识别、脂类摄取以及形成记忆中起着重要的作用,其抗氧化功能主要表现为SOD样活性,并且在体内参与了抗氧化应激功能。目前从动物实验、细胞水平、分子水平均证明PrP^c具有SOD活性,其SOD活性是铜依赖性的且与构象有密切的联系,其八肽重复区、疏水区以及C端的GPI锚都对其SOD活性有不同程度的影响,特别是其八肽重复区的影响最为明显。PrP^c与SOD活性可能为今后对于正常prion蛋白的了解和朊病毒病的致病机制以及预防和治疗这类疾病带来新的方法。     

血清MMP9蛋白ELISA检测方法的建立及在肝癌患者血清检测中的初步应用

目的建立基质金属蛋白酶9（MMP9）的双抗体夹心ELISA检测方法，探讨血清中MMP9在正常人及肝癌患者中的差异。方法从人肝组织中经过反转录扩增出MMP9基因721—1156bp区段，插入到原核表达质粒pQE30中，在大肠埃希菌M15中诱导蛋白表达。以纯化的融合蛋白HIS—MMP9为抗原免疫实验用兔及豚鼠，得到的MMP9抗血清经过纯化后，建立双抗体夹心ELISA法。对227份正常及193份肝癌患者血清中的MMP9进行检测。结果SDS—PAGE显示所表达的HIS—MMP9融合蛋白相对分子质量约为17000；以原核表达蛋白为抗原制备的MMP9抗血清可有效地识别重组MMP9和中性粒细胞和HepG2细胞内源性MMP9蛋白；利用建立的MMP9 ELISA检测技术发现肝细胞癌患者血清中MMP9的含量高于正常人群，差异具有统计学意义，P〈0．001。结论建立的双抗体夹心ELISA方法可用于血清MMP9的检测，为建立以MMP9为检测指标的肝细胞癌患者转移复发筛查方法提供了科学基础。