抗CEA单抗-天花粉蛋白偶联物的研制及活性鉴定

应用SPDP化学偶联法,将天花粉蛋白通过二硫键交联与抗CEA单抗制备成免疫毒素,经Sepbadex G-150凝胶过滤和Blue Sepharose-4B离子梯度交换层析纯化,电泳鉴定显示这一免疫毒素纯度高,偶联蛋白克分子比合理。应用间接免疫荧光染色技术和ELISA法测定结果证明,其与CEA人结肠癌细胞(LoVo)具有特异结合反应,仍保留大部份原抗体活性。具有较好的导向性。体外毒性试验结果表明,免疫毒素对靶细胞(LoVo)有选择性的杀伤作用,50％细胞毒剂量(I.C50)为10~(-9)范围,比单用天花粉蛋白和天花粉蛋白与正常小鼠IgG-偶联物对靶细胞杀伤能力分别增强约150倍和2000倍,而对实验对照细胞(Hela)杀伤无增强作用。     

丝裂霉素C-CEA单抗偶联物对人结肠癌导向治疗的实验研究

丝裂霉素C-癌胚抗原单抗偶联物对人结肠癌有选择性杀伤作用。体外细胞毒试验证实,丝裂霉素C-癌胚抗原单抗偶联物比丝裂霉素C-正常γ球蛋白偶联物,癌胚抗原单抗,丝裂霉素C(游离)的细胞毒性都高。对植入性裸鼠人结肠癌模型疗效较好,潜伏期开始治疗的结肠癌抑瘤率为76.9％(P<0.01),生长期开始治疗的结肠癌抑瘤率为52.6％(p<0.05);治疗后瘤细胞密度明显减小(P<0.01),核分裂指数有非常显著差异(P<0.01),瘤细胞坏死程度明显增高。     

转染MHCII类基因对卵巢癌细胞株免疫特性的影响

建立稳定表达CIITA基因的人卵巢癌细胞株HO CIITA ,分析转染CIITA基因对T细胞体外抗肿瘤免疫应答的影响。以CIITA基因逆转录病毒 (pLXSN/CIITA )转染并筛选获得HO CIITA。用FACS和RT PCR分析HLA以及抗原加工递呈基因表达水平。以磁珠法分离得到正常人外周血CD4 +/CD8+T细胞 ,分别进行混合淋巴细胞反应及细胞因子测定 (ELISA和RT PCR )。结果显示 ,转染CIITA基因后 ,使HO细胞HLAII类分子和LMP7基因表达增高 ,而Ii基因表达由阳性转为阴性 ,未检测到TAP1表达 ;HO和HO CIITA细胞刺激CD4 +T细胞分泌IL 4含量两者有显著差异。刺激 4 8h后达到顶峰 ,前者分泌量约为后者的 1/2 ,但分泌IFN γ无差异 ,RT PCR与ELISA两种测定结果一致。表明转染CIITA基因可增加肿瘤细胞表面MHCII类分子的表达 ,该作用与IFN γ具有协同效应 ;并能诱导CD4 +T细胞表达IL 4。     

猪IL-10在软骨细胞中的表达

为了构建猪IL 10真核表达载体并在猪软骨细胞中表达。将目的基因酶切连入真核表达载体pcDNA3 1,以FuGENE 6介导转入猪软骨细胞中表达 ,RT PCR检测IL 10在软骨细胞中mRNA表达水平 ,ELISA检测细胞培养上清中IL 10蛋白含量。观察其对效应细胞PBMC分泌IFN γ和软骨细胞MHCII类分子表达的影响。结果显示 ,成功构建了猪IL 10真核表达载体 ,并转入软骨细胞 ,检测到细胞内IL 10mRNA转录 ,细胞培养 2 4、 4 8和 72h后 ,经ELISA检测上清中IL 10蛋白含量分别为 196 1 9、 2 92 5 9和 2 95 3 4pg/ml,能明显抑制经PHA刺激的PBMC分泌IFN γ (抑制率达 6 8 1% )和软骨细胞MHCII类分子的表达。猪IL 10真核表达载体的成功构建并在软骨细胞中表达 ,发挥其免疫调节功能 ,为研究IL 10诱导软骨细胞体内同种异体移植耐受奠定了基础。     

抗CD94单抗与NK细胞、γδ^＋T细胞及CTL功能的关联

目的：探讨抗CD94单抗与NK细胞、γδ^ T细胞及CTL的相关性。方法,采用荧光检测法,分别分析NK细胞、γδ^ 细胞和CTL上CD94分子的表达,采用^3H TdR掺入法和MTT释放法,分析抗94单抗对这3种细胞的杀伤活性和细胞增殖的影响。结果NK细胞和γδ^ T细胞上CD94分子的表达,明显高于PBL和CTL。抗CD94单抗能激活NK细胞、γδ^ T细胞和CTL的增殖,并能提高γδ^ T细胞和CTL的杀伤活性。结论CD94分子在NK细胞和γδ^ T细胞表面呈高表达。抗CD94单抗对NK细胞、γδ^ T细胞及CTL的增殖具有上调节作用,对它们的杀伤活性具有正向调节作用。     

外周血GPC3与PEG10mRNA检测对肝细胞癌转移的诊断价值

目的研究外周血磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC-3）与遗传印迹基因（PEG10）mRNA检测对肝细胞癌（HCC）转移的诊断价值。方法30例HCC患者分为HCC转移组（n=18）和HCC未转移组（n=12）,另选取11例肝硬化患者作为对照。以SYBR Green I作为荧光信号,采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQRT—PCR）检测三组患者外周血GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA表达,应用ROC曲线和诊断性能专用指标评价两者预测诊断及排除诊断的价值。结果HCC转移组GPC-3mRNA和PEG10 mRNA表达显著高于HCC未转移组和肝硬化组（P〈0．05）;HCC未转移组与肝硬化组GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA的表达比较差异无统计学意义。单项检测GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA的诊断灵敏度分别为66．7％和72．2％,特异度均为91．7％,ROC曲线下面积（AUC）为0．748和0．812;两基因检测平行试验的灵敏度为90．7％,特异度为84．0％,阴性似然比为0．11,诊断准确率为83．3％;系列试验的灵敏度为60．5％,特异度为98．7％,阳性似然比为45．5,诊断准确率为73．3％。结论检测外周血GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA对估计肝癌有无血行播散和肝外转移有一定的价值,且PEG10 mRNA优于GPC-3 mRNA。两者联合系列试验有助于HCC外周血转移的预测诊断。     

∧14C放射酶分析西那普利药动学及生物利用度

目的研究抑平舒(国产)与西那普利药动学及生物等效性。方法14名志愿者分别单剂量口服2.5mg抑平舒与西那普利，采用以14C-HL为ACE底物的放射酶分析法测定血药对ACE的抑制率及两者的药动学参数，并以AUC     

树突状细胞在免疫耐受中的作用

树突状细胞 (dendriticcell,DC )在诱导和维持外周耐受及免疫调节中发挥着重要作用。综述了关于DC调节免疫耐受的机制 ,并介绍了若干DC亚群在诱导免疫耐受中的不同作用     

肿瘤相关线粒体蛋白12对肝癌细胞凋亡的抑制作用

目的： 探讨肿瘤相关线粒体蛋白12 （TAMP12）对肿瘤细胞凋亡的抑制作用。方法: （1）构建重组逆转录病毒表达载体并转染包装细胞PA317,将获得的病毒颗粒感染TAMP12低表达的肝癌细胞株HepG2。应用RT-PCR检测TAMP12 mRNA表达变化;激光扫描共聚焦显微镜（CLSM）观察双色荧光标记蛋白的亚细胞定位和定量表达。（2）应用Hoechst 33258染色和FACS检测5－氟尿嘧啶（5-FU）处理后对诱导HepG2细胞凋亡的影响。结果:（1）CLSM检测显示TAMP12主要表达于HepG2细胞线粒体中。转染细胞中TAMP12基因和蛋白呈稳定高表达。（2）5-FU诱导细胞发生凋亡后,转染细胞的核形态较为完整,但对照细胞的染色质发生凝聚、边缘化、核固缩;且FACS检测显示转染细胞的凋亡率显著低于对照细胞（P<0.05或P<0.01）。结论: TAMP12具有抑制肝癌细胞凋亡的作用。     

黄芪“干粉”对一些免疫反应的影响

本文报告黄芪“干粉”在体外能抑制小鼠胸腺细胞自发渗入~3H-TdR,在1毫克/毫升时已显著。锥兰排斥法证阴,此抑制作用不是由于细胞死亡而造成的。“干粉”溶液超滤实验表明它的抑制活性存在