一种简单γδT细胞扩增培养方法及其抗肿瘤生物学功能研究

目的 :建立一种特异快速地诱导扩增人外周血γδT细胞的方法 ,并比较了γδT细胞 ,NK和LAK细胞的抗肿瘤的生物学特性。方法 :收集用不同单抗分别包被粘附的细胞 ,然后通过MACS细胞分选仪的分选 ,获取的细胞进行细胞增殖动力学、细胞表型、细胞杀伤活性的测定以及单抗阻断效应的分析。结果 :经MACS分离得到的γδT细胞 ,培养 2周后细胞数扩增 6 0 0～ 80 0倍 ,CD3,CD8和γδ细胞表达阳性率分别是 72 .2 9% ,5 8.0 2 %和 6 5 .98%。γδT细胞对NK敏感细胞K5 6 2以及NK不敏感细胞Raji和XG 7这 3种不同靶细胞均有较高的杀伤率 ,分别为 35 .98% ,5 2 .2 7%和 6 9.0 8% ;NK细胞对此 3种细胞的杀伤率分别是 45 2 1% ,12 .34%和 11.94% ;LAK细胞的杀伤率分别为 44 .0 1% ,2 9.2 7%和 2 5 .6 8%。γδT细胞对经MHC Ⅰ类单抗阻断前后的K5 6 2 ,Raji和XG 73种靶细胞的杀伤率无明显改变。结论 :γδT细胞、NK细胞和LAK细胞都具有一定的非特异性杀伤肿瘤细胞的作用 ;γδT细胞对MHC Ⅰ类单抗阻断后的肿瘤细胞的杀伤无明显变化。提示γδT细胞较NK细胞和LAK细胞有更广泛的抗瘤谱     

MHCII类反式激活蛋白调控肿瘤细胞HLA分子的表达

为研究肿瘤细胞MHCII类分子表达及对IFN γ诱导HLA分子表达的反应性与CIITA表达的关系 ,本文采用Westernblot、免疫组化和流式细胞术检测肿瘤细胞HLA分子表达 ,以RT PCR检测肿瘤细胞CIITA基因表达。肿瘤细胞HLAII类分子表达与CIITA表达一致 ;组成性或诱导性表达CIITA的肿瘤细胞 ,经IFN γ作用后其HLAI、II类分子表达增高 ;IFN γ诱导后仍不表达CIITA的肿瘤细胞 ,其对IFN γ促HLA表达的作用不反应。提示 ,某些肿瘤细胞对IFN γ不能诱导HLA分子表达与CIITA诱导性表达缺陷有关。表面CIITA参与调控肿瘤细胞HLAI、II类分子表达。     

子宫内膜异位症患者γδ＋T细胞及NK细胞的功能分析

目的 分析子宫内膜异位症患者γδ＋T细胞和天然杀作细胞（NK）功能的变化,以及探讨患者腹腔液对正常人γδ＋T细胞细胞和自然杀伤细胞（NK）功能的影响。方法 采用免疫荧光细胞检测及细胞毒活性检测法,分析22例子宫内膜异位症患者外周血、腹腔液中γδ＋T细胞细胞及NK细胞的表型与功能。结果 子宫内膜异位症（疾病组）患者外周血、腹腔液中CD56^ 细胞与正常对照组相比较无明显差异,而疾病组腹腔液中的γδ＋T细胞及NK细胞的功能低于外周血及正常对照组。疾病组的腹腔液对正常人外周血γδ＋T细胞及NK细胞的功能具有负调节作用。结论 子宫内膜异位症患者的γδ＋T细胞及NK细胞的功能低下,处于被抑制状态,提示患者的腹腔液中,可能在γδ＋T细胞细胞及NK细胞的功能抑制因子。     

肿瘤细胞HLA分子的表达及IFN—γ的调控作用

目的 研究肿瘤细胞表达HLA分子及IFN－γ的调控作用。检测TIL细胞中T细胞亚群的变化,并与PBMC比较。方法 采用FACS检测细胞表达的CD抗原,采用ABC免疫组化染色检测肿瘤细胞HLA－Ⅰ,Ⅱ类分子的表达。以IFN－γ诱导建系的卵巢癌细胞表达HLA分子。结果 明细胞癌患者TIL细胞中的T细胞明显多于大肠癌患者。肿瘤患者PBMC中的T细胞数少于正常对照;肿瘤组织HLA－Ⅰ类抗原的表达明显低于正常组织,HLA－Ⅱ类抗原泊表达高于正常组织。与正常组织相比较,大肠癌患者比肾细胞癌患者HLAⅠ类抗原的表达更低。IFN－γ可诱导建系卵巢癌细胞表达HLA－Ⅰ类抗原,但不能诱导HLA－Ⅱ类抗原的表达。结论 肿瘤组织HLA表达的变化与肿瘤组织中TIL的数有关;IFN－γ能选择性地诱导卵巢癌细胞表达HLA－Ⅰ类分子,在抗肿瘤免疫中具有重要的意义。     

MHC-I类分子在诱导异体肾癌特异性 CTL中的作用

目的探讨MHC-I类分子匹配的异体人肾癌细胞诱导肾癌细胞特异性CTL的作用。方法用经照射的HLA-I类分子匹配的异体人肾癌细胞作为刺激细胞,诱导外周血CTL,并分析其表型及杀伤效应。结果11例肾癌患者外周血淋巴细胞经HLA匹配的肾癌细胞刺激后,诱导的CTL细胞主要以TCRαβ＋、CD8＋为主,具有明显的杀伤效应。结论用MHC-I类分子匹配的异体肾癌细胞可诱导肿瘤特异性、并具有明显杀伤活性的的CTL。     

14C放射酶分析西那普利药动学及生物利用度

目的研究抑平舒(国产)与西那普利药动学及生物等效性。方法14名志愿者分别单剂量口服2.5mg抑平舒与西那普利,采用以14C-HL为ACE底物的放射酶分析法测定血药对ACE的抑制率及两者的药动学参数,并以AUC0→∞与Cmax/AU0→∞为指标,用t检验法分析两种制剂的生物等效性。结果两者的药-时曲线可用二室模型拟合,两者的Cmax(ng·ml-1)分别为82.4与83.5;tmax(h)分别为2.3与2.3;AUc0→∞(ng·ml1·h)分别为1759.0与2162.9;1max(％)分别为97.11与97.49。两者AU0→∞与Cmax/AUC0→∞无显著性差异(P＞0.05)。结论抑平舒与西那普利为生物等效制剂,抑平舒的相对生物利用度为81.3％。     

系统性红斑狼疮患者外周血γδT细胞受体V区基因取用的初步研究

目的 探讨系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者外周血中γδＴ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖ区基因限制性取用。方法 应用ＰＣＲ特异性扩增、Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及ＤＩＧ杂交等方法检测在ＳＬＥ患者的正常人外周血中ＴＣＲγ链、δ链Ｖ区基因的表达。结果 与正常对照相比,发现ＳＬＥ患者在Ｖγ基因、Ｖδ基因均表现出限制性取用在７例ＳＬＥ患者中均未检测到ＶγⅡ、Ｖδ４、Ｖδ６。结论 提示ＳＬＥ患者ＴＣＲγδ链基因组的变可能造成     

转导CⅡTA基因的肿瘤细胞克隆及生物学特性的研究

目的 研究转导ＣⅡＴＡ基因肿瘤细胞的生物学特性改变。 方法 以ＲＴ－ＰＣＲ和流式细胞术分别检测克隆转导ＣⅡＴＡ基因的肿瘤细胞中ＣⅡＴＡ基因的表达。在光镜和电镜下观察细胞形态和结构变化。结果 转导ＣⅡＴＡ基因后,肿瘤细胞中ＣⅡＴＡ基因得以有效表达,肿瘤细胞形态和细胞内的超微结构发生改变,细胞生长受限,ＩＦＮ－γ可诱导转导ＣⅡＴＡ基因的肿瘤细胞死亡。 结论 转导ＣⅡＴＡ基因能改变肿瘤细胞的生物学特性,     

MHC—Ⅰ类分子在肿瘤浸润性淋巴细胞识别人黑色素瘤细胞中的…

应用人白细胞抗原－Ａ２阳笥黑色素瘤病人的瘤块中分离得到的肿瘤浸润性淋巴细胞，进行ＨＬＡ－Ａ２限制性ＴＩＬ抗人黑色素瘤细胞作用的研究。在实验中发现，ＴＩＬ对自身和同种本的ＨＬＡ－Ａ＾＋２黑色素瘤细胞具有杀伤作用，而对ＨＬＡ－Ａ＾－２黑色素瘤细胞及ＨＬＡ－Ａ＾＋２非黑色素瘤细胞无作用。     

趋化因子与肿瘤转移

大量临床研究表明,在人体常见肿瘤如乳腺癌、肺癌、膀胱癌、大肠癌和黑色素瘤中趋化因子受体的表达通常出现上调。在肿瘤转移至重要器官以及区域淋巴结的过程中,趋化因子及其相应的配体扮演了重要角色。CXC21-CXCR4轴有助于肿瘤细胞转移至远处器官,而CCL12-CCR7轴则促使肿瘤细胞转移至淋巴结,这两个受体-配体对通常是介导肿瘤细胞转移的关键物质。因此,趋化因子抑制物在肿瘤治疗中有应用前景。