应用细胞片层技术构建组织工程骨**

背景：传统的骨组织工程学在收获和转移细胞方面仍存在诸多不足,细胞片层技术是收获种子细胞和对种子细胞进行转移的一项新技术。 目的：应用细胞片层技术与传统骨组织工程相结合的方法构建组织工程骨。 方法：密度梯度离心法分离培养犬骨髓间充质干细胞,诱导其向成骨细胞分化。将诱导后的骨髓间充质干细胞接种至温度反应性培养皿中,先37 ℃饱和湿度培养,然后降温至20 ℃制备细胞片层;将犬脱钙骨基质/富血小板血浆/骨髓间充质干细胞细胞片层/骨髓间充质干细胞复合体植入犬左侧背阔肌下,术后4,8,12周,观察成骨情况。 结果与结论：当温度降至20 ℃时,骨髓间充质干细胞从温度反应性培养皿上完全脱落,形成细胞片层,将其覆盖于犬脱钙骨基质/富血小板血浆/骨髓间充质干细胞后植入犬背阔肌下,其成骨效果明显好于不加细胞片层对照侧。说明应用细胞片层技术与传统的骨组织工程方法相结合可构建出较理想的组织工程骨。     

我国北方成年人下颌骨骨密度的测量研究

Objective To measure the bone mineral density(BMD)of mandible and investigate the relationship between mandible and the whole body skeleton BMD.Methods Healthy volunteers were recruited in north China,which were divided into 6 groups by age:≥20,≥30,≥40,≥50,≥60 and ≥70 years older,10 male and 10 female in each group.Dual-energy X-ray absoptiometery(DXA)was used to measure the BMD of the lumbar spine,the mentum of mandible and the mandibular angle.The results were analyzed statistically.Results The mineral density(MD )of the mentum was(1.310 9 ±0.035 5)g/cm2,the left mandibular angle(1.048 9 ± 0.013 7)g/cm2,the right mandibular angle (1.0547 ±0.014 1)g/cm2,the lumbar spine(L2-L4)(1.121 1±0.017 2)g/cm2.There was a significant difference in mandibular angle and lumbar MD between men and women(P＜0.05).The MD of mandibular angle and lumbar spine decreased significantly after 50 years of age.Conclusions The normal BMD of the mandibular mentum,mandibular angles and lumbar spine is obtained.The BMD of the mandibular angles is closely related to that of the lumbar spine.Mandible can be an appropriate measurement site in the evaluation of skeleton BMD status for the forecast of osteoporosis.     

犬骨髓基质干细胞向成骨细胞诱导分化及细胞片层的制备

目的分离培养犬骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）并向成骨细胞诱导分化,制备骨髓基质干细胞的细胞片层。方法密度梯度离心法分离犬骨髓基质干细胞,接种于DMEM成骨诱导培养基,向成骨细胞诱导分化,利用温度反应性培养皿的温度感应性,制备细胞片层。观察犬BMSCs、成骨细胞诱导分化及细胞片层形态学特点与生物学特性。结果分离培养出犬BMSCs,成功地向成骨细胞实现诱导分化,并观察到钙结节。利用温度反应性培养皿的温度感应性,收获了完整的细胞片层。结论细胞片层技术与传统的骨组织工程方法相结合,将有望构建出含板层骨结构的大块组织工程骨。     

细胞片层技术的研究进展

组织工程的发展表现出了巨大的潜力,然而传统的组织工程方法限制了组织工程学的发展。新的细胞片层技术应用温度反应性培养皿收获细胞,避免了传统方法的不足之处。该方法不使用蛋白水解,仅简单地改变温度反应性培养皿的温度,便可收获完整的细胞片层。应用细胞片层进行组织重建的方式主要有将片层直接植入受区位点、通过同型或异型细胞片层的叠加构建三维结构的组织以及细胞片层结合支架的方法构建三维结构的组织。细胞片层技术与传统的组织工程学方法结合将会促进组织工程学的发展。     

犬同种异体脱钙骨基质复合细胞片层的体外培养与观察(英文)

背景:如何构建具有类似天然骨结构组织工程骨的问题是组织工程学发展的一个难题.细胞片层技术的出现,为其提供了新的途径.目的:观察细胞片层与脱钙骨基质的生物相容性及其在脱钙骨基质上的生长情况.设计、时间及地点:体外观察性实验,于2009-06/2009-09在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成.材料:利用温度感应培养基制备犬骨髓基质细胞片层;脱脂、脱钙、脱非胶原蛋白方法制备犬脱钙骨基质.方法:将温度感应技术制备刮取的细胞片层铺盖于脱钙骨基质表面,用含体积分数为10%胎牛血清及成骨诱导剂的DMEM培养液浸没培养.主要观察指标:扫描电镜下观察脱钙骨基质的结构及细胞片层在脱钙骨基质上的附着、生长情况.计算脱钙骨基质孔隙率和孔径大小.结果:扫描电镜下观察可见脱钙骨基质呈三维立体网孔结构.材料孔隙率约为.75%.平均孔隙直径为(250.11±98.89)μm,成正态性分布.扫描电镜下观察细胞片层在脱钙骨基质上的附着、生长状况良好,增殖迅速.结论:细胞片层与脱钙骨基质有较好的生物相容性,脱钙骨基质/细胞片层复合体能够应用于组织工程骨,为构建类似骨结构组织工程骨起到促进作用.     

犬骨髓间充质干细胞片层的体外培养与制备**★

背景：传统的组织工程方法在收获和转移细胞方面存在诸多不足，且难以形成致密的组织，明显限制了组织工程学的发展。 目的：探讨犬骨髓间充质干细胞片层的体外培养与制备方法。 方法：实验犬麻醉后抽取骨髓，采用密度梯度离心法体外分离骨髓间充质干细胞。取传至第4代细胞，按1×109 L-1密度接种于直径3.5 cm的温度反应性培养皿中，置于37 ℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度培养箱内培养，待细胞增殖融合时再将培养皿的温度降至20 ℃培养20 min，倒置显微镜下观察细胞形态学变化及细胞片层形成情况。 结果与结论：犬骨髓间充质干细胞原代培养24 h呈椭圆形或多角形，72 h多数细胞伸展贴壁，7 d时形成细胞集落，12 d时细胞呈长梭形，完全融合，细胞界限不清。温度反应性培养皿中的骨髓间充质干细胞在降温至20 ℃时，细胞形态发生变化，呈短梭形，且逐步从培养皿底分离，形成含细胞外基质的完整的细胞片层。证实密度梯度离心法可成功分离培养犬骨髓间充质干细胞，通过改变应用温度反应性培养皿的温度，能获取完整的细胞片层。     

我国北方成年人下颌骨骨密度的测量研究

Objective To measure the bone mineral density(BMD)of mandible and investigate the relationship between mandible and the whole body skeleton BMD.Methods Healthy volunteers were recruited in north China,which were divided into 6 groups by age:≥20,≥30,≥40,≥50,≥60 and ≥70 years older,10 male and 10 female in each group.Dual-energy X-ray absoptiometery(DXA)was used to measure the BMD of the lumbar spine,the mentum of mandible and the mandibular angle.The results were analyzed statistically.Results The mineral density(MD )of the mentum was(1.310 9 ±0.035 5)g/cm2,the left mandibular angle(1.048 9 ± 0.013 7)g/cm2,the right mandibular angle (1.0547 ±0.014 1)g/cm2,the lumbar spine(L2-L4)(1.121 1±0.017 2)g/cm2.There was a significant difference in mandibular angle and lumbar MD between men and women(P＜0.05).The MD of mandibular angle and lumbar spine decreased significantly after 50 years of age.Conclusions The normal BMD of the mandibular mentum,mandibular angles and lumbar spine is obtained.The BMD of the mandibular angles is closely related to that of the lumbar spine.Mandible can be an appropriate measurement site in the evaluation of skeleton BMD status for the forecast of osteoporosis.     

犬骨髓基质干细胞片层制备及向成骨细胞的分化

背景: 目前传统的胰酶消化法和单细胞悬液转移细胞的方法存在诸多缺点,限制了骨组织工程学的发展.目的: 培养骨髓基质干细胞并向成骨细胞诱导分化,制备细胞片层.方法: 密度梯度离心法分离犬骨髓基质干细胞,接种于DMEM成骨诱导培养基,向成骨细胞诱导分化,采用细胞片层技术,利用温度反应性培养基的温度变化,收获完整的细胞片层.结果与结论: 刚接种至培养皿的原代细胞在培养瓶底散在分布,呈圆形,胞体透亮,折光性好,12 d时细胞呈长梭形,完全融合,呈旋涡状生长;成骨诱导后的骨髓基质干细胞大部分变为方形、多角形和鳞片形,21-28 d形成明显的圆形或卵圆形钙化结节;温度反应性培养皿中的间充质干细胞降温至临界温度32℃以下时,细胞便逐步从培养皿底分离,形成完整的骨髓基质干细胞片层.实验结果证实密度梯度离心法可成功分离培养犬骨髓基质干细胞并向成骨细胞诱导分化,应用细胞片层技术可获取完整的骨髓基质干细胞片层.     

应用细胞片层技术构建组织工程骨

背景：传统的骨组织工程学在收获和转移细胞方面仍存在诸多不足,细胞片层技术是收获种子细胞和对种子细胞进行转移的一项新技术。 目的：应用细胞片层技术与传统骨组织工程相结合的方法构建组织工程骨。 方法：密度梯度离心法分离培养犬骨髓间充质干细胞,诱导其向成骨细胞分化。将诱导后的骨髓间充质干细胞接种至温度反应性培养皿中,先37 ℃饱和湿度培养,然后降温至20 ℃制备细胞片层;将犬脱钙骨基质/富血小板血浆/骨髓间充质干细胞细胞片层/骨髓间充质干细胞复合体植入犬左侧背阔肌下,术后4,8,12周,观察成骨情况。 结果与结论：当温度降至20 ℃时,骨髓间充质干细胞从温度反应性培养皿上完全脱落,形成细胞片层,将其覆盖于犬脱钙骨基质/富血小板血浆/骨髓间充质干细胞后植入犬背阔肌下,其成骨效果明显好于不加细胞片层对照侧。说明应用细胞片层技术与传统的骨组织工程方法相结合可构建出较理想的组织工程骨。