骨髓间充质干细胞移植后在肝损伤大鼠体内的分布及其治疗作用

目的探讨同种异体骨髓间充质干细胞（MSCs）移植后在大鼠体内的分布及其对肝损伤的治疗作用。方法应用2-乙酰氨基芴（2-AAF）建立大鼠急性肝损伤模型,经门静脉注射进行同种异体骨髓MSCs移植后不同时间,通过4,6-二醚基-2-苯基吲哚盐酸化合物（DAPI）标记、免疫组化Y染色体性别决定区（SRY）检测等方法观察移植细胞分布,并通过肝组织病理改变和丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）和血清白蛋白（ALB）的变化观察MSC移植对肝损伤的治疗作用。结果2-AAF可导致大鼠肝组织弥漫性损伤,移植后1w和3w肝组织病变减轻。移植后1W受体鼠肝、肺及脾脏中均可见DAPI阳性细胞,移植后3w仅在肝损伤大鼠肝内发现DAPI阳性细胞组成的细胞簇,形态与肝实质细胞相近;SRY蛋白检测结果与之一致。干细胞移植后1W,移植组大鼠血清A岍较移植前显著降低,但仍高于对照组;血清AST较移植前显著降低,且与对照组无显著差异;血清ALB较移植前增高,但仍显著低于对照组。干细胞移植后3w,ALT、AST以及ALB均与对照组无显著差异。结论2-AAF可造成大鼠肝组织弥漫性损伤,肝损伤环境有助于经门静脉移植的骨髓MSCs的定植,MSCs移植对大鼠肝损伤具有治疗作用。     

乙型肝炎病毒前S1抗原与HBVDNA复制的关系及临床意义

目的探讨HBV感染者血清中HBVM、HBVDNA、HBeAg与HBVPreS1-Ag的关系,为临床诊治提供有益的参考。方法采用ELISA法和荧光定量聚合酶链反应技术分别检测了288份血清中的HBVPreS1-Ag、HBeAg和HBVDNA水平。结果在HBV感染者血清中HBVPreS1-Ag与HBVDNA具有良好的平等关系,其阴/阳符合率均大于86.1%,两者之间无显著性差异（P〉0.05）.HBV DNA和HBVPreS1-Ag阳性率均高于HBeAg,具有统计学差异（P〈0.05）。结论HBVPreS1-Ag与HBVDNA检出阳性率高度相关,HBVPreS1-Ag比HBeAg更能精确地反映HBV在人体内的感染和复制情况,动态监测HBVPreS1-Ag的变化对临床判断HBV治疗效果有重要价值。     

乙型肝炎病毒聚合酶片段的表达及其在血清学检测中的应用

目的建立乙型肝炎患者血清HBV病毒聚合酶抗体(抗-HBp)的ELISA检测方法。方法构建HBV反转录酶/DNA聚合酶(HBV-Pol)基因原核表达载体pQE30-Pol,表达并纯化目的蛋白,用间接ELISA法检测274例乙型肝炎患者及50例正常人血清中的抗-HBp抗体,并与HBV-DNA实时荧光定量检测结果比较。结果成功将HBV-Pol基因插入原核表达载体pQE30,并在大肠埃希菌M15中获得了高效表达,表达产物以包涵体形式存在。以纯化的重组蛋白建立间接ELISA检测方法,在检测的274例乙型肝炎患者中,HBsAg+/HBeAg+/抗HBc+,HBsAg+/抗HBe+/抗HBc+,HBsAg+/抗HBc+患者血清中的抗-HBp抗体阳性率分别为97.8%、57.9%和13.2%,平均阳性率58.8%,而正常人血清抗-HBp均为阴性。运用此法测得的血清抗-HBp阳性率和实时定量PCR检测结果无统计学差异(P=0.359)。结论成功表达了HBV-Pol片段并且建立了血清抗-HBp抗体的检测方法,为进一步研究乙型肝炎患者血清HBV-Pol抗体的血清学意义奠定了基础。     

分子杂交化学发光法检测血清中乙型肝炎病毒DNA

目的：用非放射性的异羟基洋地黄毒甙（地高辛，Dig)标记探针与靶DNA杂交，结合化学发光检测系统检测乙肝患者血清中HBV DNA。方法：应用灵曼公司生产的Dig DNA标记检测试验盒。将Dig标记的HBV DNA探针与点印迹在尼龙膜或硝酸纤维素膜上的靶DNA杂交，杂交后的膜与Dig－AP抗体保温，然后用化学发光底物CSPD与之作用，导致在波长477nm处发光，感光于X光底片上。结果：待检的129份血清标本，用此法检测HBV DNA阳性率达58．4％，敏感性2.0pg-0.5pg。为了比较，329份血清标本用显色法测定，阳性率45．0％，敏感性5.0pg-1.0pg。对照组呈阴性结果。结论：Dig标记探针分子杂交化学发光法具有较高特异性，敏感性和简便等优点，可用于血清中HBV DNA的检测。     

干扰素α-2b联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎疗效观察

目的 观察干扰素联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者的疗效.方法 90例慢性乙型肝炎患者随机分为两组:42例干扰素α-2b联合拉米夫定治疗组,48例单用拉米夫定对照组:观察比较两组患者治疗后HBVDNA水平,乙型肝炎病毒血清标志物及肝功能变化.结果 治疗结束时,联合治疗组患者血清中HBVDNA阴性率和肝功能复常率明显高于单用拉米夫定治疗组,联合治疗组完全应答率40.5%,优于单用拉米夫定治疗组22.9%(P＜0.01);随访24周联合治疗组的上述指标仍高于拉米夫定对照组(P＜0.05).结论 干扰素α-2b联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎,可提高HBeAg/抗HBe血清转换率及综合应答率,并可防止或减少YMDD变异的发生.     

415例HBV感染的不同血清学指标组合的HBVDNA的检测

了解ＨＢＶ感染的不同血清学指标组合的相应的ＨＢＶＤＮＡ阳性情况 ,以指导临床。对 4 15份不同肝病临床类型的血清同时行ＥＬＩＳＡ方法测定ＨＢＶ标志及普通ＰＣＲ法检测ＨＢＶＤＮＡ。结果表明 ,ＨＢｓＡｇ阳性组ＨＢＶＤＮＡ阳性率为 77.8% ( 2 70 /34 7) ,ＨＢｓＡｇ阴性组ＨＢＶＤＮＡ阳性率为 19.1% ( 13/68) ,两者差异显著 (Ｐ <0 .0 0 1)。其中 153例ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗 ＨＢｃ阳性血清 ,ＨＢＶＤＮＡ全部阳性 ,阳性率为 10 0 %。ＨＢｓＡｇ阳性、抗 ＨＢｅ和抗 ＨＢｃ阳性组血清ＨＢＶＤＮＡ阳性率为 66.9% ( 79/118)…     

乙型肝炎病毒P基因变异的检测及其意义

目的采用错配PCR扩增方法进行乙型肝炎病毒(HBV)P基因YMDD变异的检测,并对其临床意义进行初步研究.方法应用分子克隆方法,构建YMDD、YVDD、YIDD变异的阳性质粒,并进行敏感性及特异性试验.对44例经拉米夫定治疗1年、HBVDNA持续阳性的乙型肝炎患者检测YMDD变异情况.结果经PCR方法、酶切鉴定及直接测序鉴定出YMDD、YVDD和YIDD质粒构建成功,且该方法具有较好的敏感性和特异性.44例拉米夫定治疗1年、HBVDNA持续阳性的乙型肝炎患者存在YMDD变异,半年出现变异5例,变异率为11.36%;1年出现变异7例,变异率为15.91%.结论本检测方法简便、实用,抗病毒药物压力是导致HBVYMDD变异的重要因素.     

TSGF、AFP、SF联合检测对原发性肝癌诊断意义的评价

用血清甲胎蛋白 (ＡＦＰ)诊断原发性肝癌 (ＰＨＣ)的实验室标志物仍有 30 %左右的ＰＨＣ患者ＡＦＰ呈阴性或低浓度 ,影响了临床的早期诊断。近年来发现恶性肿瘤特异性生长因子 (ＴＳＧＦ)对多种肿瘤的诊断具有临床意义。本文对ＰＨＣ、良性肝病患者和健康人血清中的ＴＳＧＦ、ＡＦＰ及血清铁蛋白(ＳＦ)进行测定 ,探讨其对ＰＨＣ的临床诊断价值。现报告如下 :1　检测对象和方法1 1　检测对象　临床和病理活检确诊的成人ＰＨＣ患者 5 1例、良性肝病 19例 (包括肝硬化 11例 ,慢性肝炎 8例 )、正常对照组 30例。1 2　方法　患者入院后 1周内抽取…     

肝细胞癌p53基因的突变与表达

目的：对HCC患者的肝组织和外周血单核细胞（PBMC）进行突变p53基因、p53蛋白和HBX的检测并作比较,以助评估它们与HCC发生的关系。方法：从HCC患者肝组织和PBMC中提取DNA,用PCR/SSCP和PCR/RFLP法分析p53基因突变。HCC中HBx与p53蛋白表达用免疫组化法检测。结果：HCC标本35.8%（5/14)显示p53基因第7外显子突变发生在249密码子。同样的PBMC标本中亦测到p53基因第7外显子有突变。免疫组化分析HCC肝组织中p53蛋白检出率为28.6%,而HBx在大多数标本中均有表达。结论：在HCC,p53基因突变热点在第7外显子,p53基因突变率与p53蛋白检出率均约30%～40%,HBx较善遍地存在于所测的HCC标本中。这提示p53蛋白与HBx蛋白相互作用可能是HCC发病机制中的重要一步。