丙型肝炎病毒核酸定量检测方法的研究及评价

ＨＣＶＲＮＡ是丙型肝炎病毒感染最直接和可靠的标志，本文就目前几种ＨＣＶＲＮＡ定量检测方法及其临床应用与前景作一综述。     

丙型肝炎患者外周血单个核细胞HCV免疫组化和电镜研究

目的：探讨丙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMCs）内丙型肝炎病毒抗原（HCVAg）表达和HCV颗粒感染状况及意义。方法：采用抗HCV核心区及NS3区单克隆抗体，对35例慢性丙肝患者PBMCs进行免疫组化检测和电镜观察。结果：慢性丙肝患者PBMCs的HCVAg阳性率为82.9%(29/35），其中82.8%（24/29）的病例电镜下发现了病毒颗粒，占全组病例的68.6%(24/35)。同时发现部分细胞超微结构呈现一系列凋亡性改变。结论：HCV可感染PBMCs并在其中复制，这可能是导致患者HCV持续感染的原因之一。     

黄芩素对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用研究

目的:研究黄芩素对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用。方法:以H22肝癌细胞接种于正常小鼠左前肢腋窝皮下复制肝癌H22荷瘤模型。实验分为模型对照、环磷酰胺(30mg·kg-1)和黄芩素高、中、低剂量(80、40、20mg·kg-1)组。灌胃给药,每天1次,连续15d。末次给药后处死小鼠,剥离完整的肿瘤组织称重,并计算肿瘤抑制率;流式细胞仪分析细胞周期分布和凋亡率;按试剂盒说明书测定肿瘤组织中半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3的活性;RT-PCR测定瘤组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达水平。结果:高、中剂量黄芩素可显著抑制模型小鼠体内肿瘤生长(P<0.01或P<0.05),抑制率分别为61.63%和44.65%;可显著提高G0/G1期细胞百分比(P<0.05),并减少S期细胞(P<0.01或P<0.05)。与模型对照组比较,黄芩素高、中、低剂量组细胞凋亡率显著提高(P<0.01或P<0.05)。高、中剂量黄芩素可显著增强肿瘤组织中Capcase-3活性(P<0.01或P<0.05),抑制Bcl-2mRNA表达(P<0.01或P<0.05);高剂量黄芩素可显著提高肿瘤组织中BaxmRNA表达(P<0.05)。结论:黄芩素可促进肝癌H22荷瘤小鼠肿瘤细胞的凋亡,其机制可能与增强Capcase-3活性、提高Bax表达,并抑制Bcl-2表达有关。     

原发性肝癌患者外周血中甲胎蛋白mRNA的意义

目的由于ＰＣＲ技术的应用,血循环中癌细胞的检测近有很大进展．本文用ＲＴＰＣＲ检测肝癌（ＨＣＣ）和其他慢性肝病患者外周血中ＡＦＰｍＲＮＡ,藉以反映ＨＣＣ细胞的存在,并与其他血清标记物比较．方法ＨＣＣ患者２２例,肝硬变和慢性乙型肝炎患者各１０例,健康成人受试者（对照）５例．取患者和对照的外周血,分离单核细胞,提取总ＲＮＡ并作电泳鉴定,用合成的两对引物进行巢式ＲＴＰＣＲ扩增ＡＦＰｍＲＮＡ,同时分析血清ＡＦＰ和乙肝标记物．结果ＡＦＰｍＲＮＡ在１３例ＨＣＣ（５９１％）,２例肝硬变（２００％）患者外周血中测到,其余标本均为阴性．ＡＦＰｍＲＮＡ阳性的１３例患者肿瘤均大于５ｃｍ,为晚期患者．在该１３例患者中仅有６例（４６１％）在血清中测到ＡＦＰ,但有１２例（９２３％）ＨＢｓＡｇ,抗ＨＢｅ,抗ＨＢｃ全阳性,而ＡＦＰｍＲＮＡ阴性的５例该３标记物全阴性．结论ＲＴＰＣＲ扩增ＡＦＰｍＲＮＡ是检测ＨＣＣ和肝硬变患者循环肝癌细胞的敏感方法．患者外周血中的ＡＦＰｍＲＮＡ有可能作为肿瘤转移和复发的标记对ＨＣＣ诊断、随访观察和疗效评定有较大临床意义．     

血清HBV-DNA定量PCR检测对干扰素治疗的指导意义

目的 探讨有限稀释定量ＰＣＲ检测血清ＨＢＶ－ＤＮＡ对干扰素抗病毒治疗的指导意义。方法 利用有限稀释定量ＰＣＲ技术分别检测３８例ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ双阳性患者α－２ｂ干扰素治疗前后血清ＨＢＶ－ＤＮＡ含量。结果 ３８例患者干扰素治疗１２周ＨＢＶ－ＤＮＡ阴转７例（１８．４％）;治疗２４周阴转１１例（２８．９％）。其中病毒滴度〉２５０ｐｇ／ｍＬ者阴转１１．１％（１／９）;病毒滴度２５ｆｇ￣２５０ｐｇ／ｍ     

端粒酶在原发性肝癌中的表达

1材料和方法 1.1材料手术切除PHC 38例,男26例,女12例,年龄32岁～71岁,平均47.4岁,术前均未放疗,标本均于离体后数小时内采集,液氮速冻后,转至-80℃冰箱贮存备用,所有病例均经病理证实.     

肝细胞癌患者外周血AFP-mRNA的临床价值

目的 寻求早期诊断肝细胞癌微量转移的方法。方法 建立巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对44例原发性肝细胞癌(PHCC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中甲胎蛋白信息核糖核酸(AFP-mRNA)进行了检测,并与慢性肝病患者和正常人进行对照。结果 44例PHCC中有27例检出AFP-mRAN,阳性率61．4％;10例肝硬化中2例阳性,占20％;肝炎及正常对照组均为阴性。结论 采用巢式RT-PCR法检测PHCC患者PBMC中AFP-mRNA是早期发现肝细胞癌微量转移的重要方法。     

丁型肝炎病毒HDAg抗原的基因克隆、表达及细胞内定位

目的克隆并表达HDAg基因,确定HDAg蛋白在细胞内定位。方法常规分子克隆、错配PCR、Western blot、RT-PCR及免疫细胞化学等。结果通过RT-PCR及错配PCR方法从1例HBV/HDV重叠感染患者血清中成功克隆出HDAg基因,生物信息学分析证实其来源于我国流行的基因I型河南株。将HDAg基因克隆于真核载体转染肝细胞,证实两种不同形式的HDAg主要定位在细胞核。结论 HDAg定位于细胞核可能是其发挥相应生物学作用的基础。     

HBV P基因YMDD变异的检测及临床应用的初步研究

目的采用错配PCR扩增方法进行HBVP基因YMDD变异的检测，对其临床意义进行初步的研究。方法应用分子克隆方法，构建YMDD、YVDD和YIDD变异的阳性质粒，并对该方法进行敏感性及特异性试验。对65例未经抗病毒治疗的乙型肝炎患者检测YMDD变异情况。结果经PCR方法、酶切鉴定及直接测序鉴定出YMDD、YVDD和YIDD质粒构建成功，且该方法具有较好的敏感性和特异性。65例未经拉米夫定治疗的乙型肝炎患者存在YMDD变异，出现变异6例，阳性率为9．07％；其中YIDD和YI／YMDD各1例，YVDD3例，YV／YMDD1例。结论本检测方法简便、实用，在未经抗病毒治疗的患者中可存在YMDD变异，其与野生株一样是自然存在的，抗病毒药物压力不是导致HBV YMDD变异的唯一因素。     

肿瘤特异性生长因子测定在肝癌诊断中的应用及与AFP的比较

恶性肿瘤特异性生长因子(tumorspecificgrowthfactor，TSGF)是近年来研究发现的一种与恶性肿瘤血管增殖有关的因子。在肿瘤的发生中起重要作用[1]。因此，TSGF可作为一种肿瘤标记物而为临床应用。为了解肝癌、肝硬化病人血清中TSGF水平及与肝癌标记物AFP的相关性，我们检测了肝癌和肝硬化患者血清中TSGF的水平。现报告如下： 1 材料与方法 1.1 检测对象 　　病例选自我院1999年4月至2000年3月间住院患者211例，其中肝癌患者83例，男56例，女27例，中位年龄51.3岁；肝硬化患者128例，男97例，女31例，中位年龄58.4岁。均经病理、CT、B超等方法确诊。对照组34例，男22例，女12例，中位年龄49.5岁，无肝病体征。各项肝炎指标均为阴性。AFP值≤25μg／L。