反义基因治疗乙型肝炎研究近况

反义技术为乙型肝炎治疗提供了新策略，其中反义RNA与核酶最具代表性，HBV的S与C区似乎是反义RNA抗HBV的最佳靶区，核酶库的构建、核酶的改造及多聚体核酶的设计促进了核酶抗HBV的研究进展。HBV感染动物模型研究有助于推动反义基因治疗乙型肝炎向临床的过渡。     

左旋咪唑涂布剂联合潘生丁、乙肝疫苗治疗HBV携带者80例临床疗效分析

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)携带者的治疗方法.方法:应用左旋咪唑涂布剂联合潘生丁,乙肝疫苗治疗HBV携带者中HBeAg、抗HBc-IgM、HBV-DNA均阳性者80例(原入组为90例,后脱失10例),治疗Ⅰ组12例,治疗Ⅱ组68例,并设对照组90例,观察至6～18个月.结果:治疗6个月时治疗Ⅰ组:HBeAg、抗HBc-IgM、HBV-DNA阴转率58.33%、66.67%、58.33%;治疗Ⅱ组分别为38.24%、41.18%、41.18%;对照组HBeAg阴转2.22%.治疗12个月时治疗Ⅰ组HBeAg、抗HBc-IgM、HBV-DNA阴转分别累计为83.33%、91.67%、83.33%;治疗Ⅱ组阴转分别累计达47.06%、63.24%、60.29%;对照组HBeAg阴转5.56%.治疗18个月时HBeAg、抗HBc-IgM、HBV-DNA阴转累计分别为:治疗Ⅰ组均为100%;治疗Ⅱ组为54.41%、75%、66.18%;对照组HBeAg阴转为7.78%,均有非常显著性差异.结论:左旋咪唑涂布剂联合潘生丁、乙肝疫苗联合治疗HBV携带者安全有效,用药方法简便,费用低廉,易于接受.     

大剂量青霉素致急性肾衰竭

患者女性,50岁,农民,因乏力、食欲不振7年,近日加重,伴腹胀、双下肢浮肿半月,尿少3d于2004年7月28日入院。患者于1997年无诱因出现乏力、食欲不振,查肝功能异常,HBsAg(+),诊断为乙型肝炎后肝硬化。     

蛋白芯片检测肿瘤标志物的临床应用

 早期诊断与早期治疗是防治肿瘤与降低死亡率的最有效方法。寻找具有早期诊断价值的肿瘤标志物（TM）长期以来为人们所关注。生物芯片具有可并行检测多种肿瘤标志物的特点；为探讨其在临床肿瘤中检测上的价值。本文应用上海数康生物有限公司新开发的HD-2001A型生物芯片检测仪和深圳威康生物蛋白芯片试剂对168例健康体检者和211例已知的各期各种肿瘤患者进行检测。追踪观察了36例肿瘤患者手术前后血清中的肿瘤标志物，现将结果报告如下。     

丙肝病毒(HCV)及乙肝病毒(HBV)双表达载体的构建及表达

目的 :为探索HCV/HBV高效联合基因免疫策略 ,构建具有 2套独立表达单元的HCV/HBV真核表达载体。方法 :分别将与HCV核心区基因互补的cDNA和HBV核心区基因克隆于具有 2套独立表达单元的真核表达载体pRSC的巨细胞病毒启动子和RSV启动子下游 ,称为pRSC HBV/HCV ,转染SP2 / 0细胞 ,通过免疫荧光和Western印迹法观测蛋白的表达 ,免疫Balb/c小鼠 ,用酶联免疫小鼠体液免疫应答。结果 :pRSC HBV/HCV转染SP2 / 0细胞可见HBcAg及HCV核蛋白染色阳性荧光细胞 ,SDS Page电泳显示在 14kD及 2 1kD处均可见蛋白条带 ,与HBcAg及HCV核蛋白的的理论预期值一致 ,Western印迹分析显示在 14kD及 2 1kD处可见特异性的蛋白条带。 5只免疫鼠中全部出现抗 HCV及抗 HBV抗体 ,而对照组全阴性。结论 :pRSC HBV/HCV可分别表达HBcAg及HCV核蛋白 ,免疫Balb/c小鼠后可诱导其体液免疫应答 ,为进一步开展HCV/HBV联合基因免疫奠定了实验基础。     

S基因显性阴性突变体干扰乙肝病毒颗粒组装的研究

目的　探讨S基因突变对HBV病毒颗粒组装的影响。方法　构建野生型S基因、S基因突变的真核表达载体pcDNA3 S和pcDNA3 mS及S基因突变的全长HBV基因组表达载体pHBV mS ,用pHBV mS与pcDNA3 S共转染HepG2细胞 ,pHBV mS与pcDNA3共转染HepG2细胞 ,以adwR9与pcDNA3共转染为对照 ;pcDNA3 mS和adwR9共转染HepG2细胞 ,以adwR9和pcDNA3共转染为对照 ,用荧光定量PCR检测胞内和上清中病毒量 ,用ELISA方法检测上清中S抗原。结果　pHBV mS与pcDNA3共转染组上清中病毒量较对照组低而胞内病毒量二者相同。pHBV mS与pcDNA3 S共转染组上清、胞内病毒量与对照组相同。pcDNA3 mS和adwR9共转染HepG2细胞其上清中病毒量较对照组低而胞内病毒量两者相同。上清中S抗原实验组较对照组低。结论　S突变体干扰HBV病毒颗粒的组装 ,导致的HBV病毒颗粒分泌下降。     

基因重组HBV联合表达反义RNA和显性阴性突变体抗HBV作用及HBV包装细胞系的构建

目的探讨HBV作为基因治疗载体的可能性并检验其联合表达反义RNA和显性阴性突变体抗HBV的作用.方法在表达完整HBV颗粒的质粒上,经基因修饰后联合表达S区反义RNA和核心-p蛋白的融合蛋白,整合于具有HBV复制的2.2.15细胞,形成细胞克隆,ELISA法检测细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg,斑点杂交法检测细胞内HBV核壳中HBV DNA,PCR检测上清液中重组HBV颗粒.HBV全基因经删除包装信号ε区后,插入到G418抗性pCI-neo载体,转染HepG2细胞系,用G418筛选形成细胞克隆,检测表达HBsAg及HBcAg较多者作为HBV包装细胞系,进一步转染表达复制缺损型HBV的质粒,经两种抗生素同时筛选,PCR方法观察上清液中的病毒.结果2.2.15-pMEP4组、2.2.15-CP组、2.2.15-SAS组和2.2.15-CPAS组,对HBsAg平均抑制率分别为2.74%±3.83%、40.08%±2.05%(t=35.5,P＜0.01)、66.54%±4.45%(t=42.3,P＜0.01)和73.68%±5.07%(t=51.9,P＜0.01);对HBeAg平均抑制率分别为4.46%±4.25%、52.86%±1.32%(t=36.2,P＜0.01)、26.36%±1.69%(t=22.3,P＜0.01)和59.28%±2.10%(t=39.0,P＜0.01);对HBV复制的抑制率分别为0、82.0%、59.9%和96.6%.在各治疗组培养上清液中均能检测出重组HBV颗粒.证明包装细胞系具有HBsAg和HBcAg表达,pMEP-CPAS质粒转染G418抗性包装细胞系,在细胞培养上清液中检出重组HBV,未检出野生型HBV.结论在同一载体上联合表达S区反义RNA及核心蛋白与部分P蛋白的融合蛋白,具有较单一机制更强的抗HBV作用;经修饰后的HBV基因组在野生型HBV辅助下,仍能包装并分泌完整的HBV样颗粒.包装细胞系能为复制缺损型HBV提供包装,但效率较低.     

丙型肝炎患者外周血单核细胞内病毒载量与干扰素治疗效果的相关性研究

目的 探讨慢性丙型肝炎患者外周血单核细胞(PBMCs)中病毒载量,观察聚乙二醇干扰素(PEG-IFNa-2a)抗病毒治疗后PBMCs中HCVRNA的变化及其临床意义.方法 采用荧光定量方法检测丙型肝炎患者血清及外周血单核细胞内病毒载量.结果 血清中HCVRNA阳性患者其PBMCs中检出率为83.6%,HCV RNA阴性患者检出率为16.3%;治疗结束及停药6个月时丙氨酸氨基转移酶(ALT)复常率、PBMCs中HCVRNA阴转率均与治疗前比较下降明显(P<0.05),PEG-IFNa-2a对血清及PBMCs中的HCVRNA均有明显的抑制作用,但PBMCs中HCVRNA清除速率较血清明显延迟.结论 PBMCs是HCV在肝外复制的重要场所,是评价HCV活动最理想的标志,可作为临床评价病毒复制程度和抗病毒疗效的参考指标.     

α-2b干扰素治疗慢性乙型肝炎的前瞻性研究

目的:前瞻性评价国产α-2b干扰素治疗CHB的疗效.方法:32例CHB患者,每次α-2b干扰素6 MU、皮下注射、3次/wk,疗程为3 mo,停药后随访6 mo.16例患者于治疗前后进行了肝活检.结果:治疗结束时,完全应答1例(3.1%),部分应答12例(37.5%),无应答19例(59.4%),总应答率为40.6%(13/32).随访结束时,总应答率为50.0%(16/32).结论:α-干扰素具有后续抗HBV作用.部分抗病毒无效的患者仍可从α-干扰素的治疗中获益.     

实时荧光定量聚合酶链反应技术检测乙型肝炎病毒YMDD变异的临床应用及意义

目的检测慢性乙型肝炎（CHB）患者在使用拉米夫定过程中，乙型肝炎病毒YMDD变异的发生情况并分析与YMDD变异发生的相关因素。方法110例慢性乙肝患者作为拉米夫定治疗组，30例CHB患者作为对照组。采用实时荧光PCR方法分别检测两组患者在用药期间HBV-YMDD变异的发生情况，同时检测治疗组在用药前后的HBV-DNA水平。结果治疗组在48周时的变异率为22．7％，明显高于对照组3．3％及24周时的变异率3．6％（P均〈0．05）；治疗前HBV-DNA水平较高组（47例）患者用药48周时的变异率（31．9％）明显高于HBV—DNA水平较低组（29例）患者的变异率（10．3％）（P〈0．05）；治疗组中未变异的85例患者在48周时的HBV—DNA阴转率（74．1％）明显高于变异的25例患者HBV—DNA阴转率（16．0％）（P〈0．05）。结论拉米夫定可导致HBV-YMDD变异的产生，且变异的发生率随着用药时间的延长而增加；HBV-YMDD变异的发生同HBV—DNA水平关系密切。