C基因截短突变体抗乙型肝炎病毒作用机制的研究

目的 探讨C基因截短突变体抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用机制。方法 构建C基因截短的真核表达载体pcDNA3-△C及野生型C基因真核表达载体pcDNA3-C，瞬时转染HepG2细胞，用SDSPAGE western blot检测pcDNA3-△C、pcDNA3-C的蛋白表达。pcDNA3-△C与adwR9共转染HepG2细胞，以pcDNA3与adwR9为对照，用荧光定量PCR检测培养上清液及细胞内病毒量，用Native western blot分析C基因截短蛋白干扰核心颗粒形成。结果重组载体pcDNA3-△C、pcDNA3-C均可表达，DcDNA3-△C与adwR9共转染组上清液和细胞内病毒量较对照组降低，pcDNA3-△C和pcDNA3-C共转染组Native western blot条带与pcDNA3和pcDNA3-C共转染组条带相比较明显淡。结论 C基因截短突变体可干扰核心颗粒的形成，导致HBV复制下降。     

阿德福韦酯联合复方鳖甲软肝片治疗乙型肝炎肝硬化的临床观察

目的观察阿德福韦酯联合复方鳖甲软肝片治疗乙型肝炎肝硬化失代偿期的疗效和安全性。方法 78例乙型肝炎肝硬化失代偿期患者随机分为阿德福韦酯与复方鳖甲软肝片联合治疗组及单用阿德福韦酯对照组,观察48周时两组患者肝功能、Child-Pugh分级及血清HBV DNA自基线下降的水平。结果治疗48周后,治疗组肝功能、Child-Pugh分级及血清HBV DNA自基线下降水平与治疗前比较差异均有统计学意义（P〈0.01）;联合治疗组肝纤维化指标及脾门厚度的下降值均优于对照组（P〈0.01）。结论阿德福韦酯联合复方鳖甲软肝片治疗失代偿期乙型肝炎肝硬化明显优于单用阿德福韦酯。     

乙型肝炎患者血中转化生长因子β1

目的分析急性乙型肝炎（ＡＨＢ）和慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）患者血清中有生物活性的ＴＧＦβ１蛋白水平和ＨＢＸ蛋白阳性率．方法ＡＨＢ和ＣＨＢ患者各２４例，用Ｐｒｏｍｅｇａ免疫分析试剂盒检测血清中ＴＧＦβ１浓度，并用自产的抗ＨＢＸ单克隆抗体ＥＬＩＳＡ检测血清中ＨＢＸ蛋白的存在．结果ＡＨＢ组和ＣＨＢ组的ＴＧＦβ１水平（μｇ／Ｌ）分别为２３６±７７和１９７±８９，均明显高于对照组８０±３４，Ｐ＜００１），但两组之间区别不大．血清中ＨＢＸ阳性率ＡＨＢ组为２５０％，ＣＨＢ组达５００％，ＨＢＸ阳性的慢性肝炎患者１５例中有１０例（８３％）ＴＧＦβ１血清水平高于中位值．结论ＡＨＢ和ＣＨＢ患者血清中ＴＧＦβ１水平明显升高，ＣＨＢ组有半数患者血清呈ＨＢＸ蛋白阳性，而这些ＨＢＸ阳性患者中８３％显示有较高的ＴＧＦβ１血清水平     

血清透明质酸Ⅲ型前胶原Ⅳ型胶原及脯氨酸肽酶对肝组织纤维化诊断的意义

探讨肝病患者血清透明质酸（HA）,Ⅲ型前胶原（PCⅢ）,型胶原（CⅣ）及脯氨酸肽酶（PLD）水平与肝纤维化程度的关系。用酶联免疫（ELISA）法及生化比色法检测225例各种肝病患者血清中HA、PCⅢ、CⅣ及PLD水平,并与肝活检病理炎症分级和纤维化分期相比较。四项指标与肝组织炎症坏死及纤维化程度均呈显著相关（P〈0．05）。HA、PCⅢ及CⅣ与肝纤维化相关性高于炎症,PLD与炎症的相关性高于纤维化。血清学指标与肝组织病理病变程度一致,联合检测肝病患者血清HA、PCⅢ、CⅣ及PLD水平,既可反映肝纤维化严重程度,又能了解肝坏死情况,为临床诊断治疗提供参考。     

携带免疫刺激DNA序列的载体及人工合成免疫刺激DNA对HBV核心区基因免疫的影响

为慢性ＨＢＶ感染的防治寻求新的高效基因免疫策略。分别构建携带免疫刺激ＤＮＡ序列及不携带免疫刺激ＤＮＡ的ＨＢＶ核心区基因真核表达载体 ,并人工合成免疫刺激ＤＮＡ寡核苷酸 ,分组免疫Ｂａｌｂ/ｃ小鼠 :( 1)Ｖ ＨＢｃ ＣｐＧＯＤＮ组 ;( 2 )Ｖ ＨＢｃ 非ＣｐＧＯＤＮ对照组 ;( 3)Ｖ ＨＢｃ/ＣｐＧ。观察各组小鼠体液免疫应答及细胞免疫应答。结果表明 ,3组免疫鼠血清ＨＢＶ抗体均阳性 ,体外ＣＴＬ活力检测 3组小鼠脾细胞对转染ｐＲＳＣ ＨＢＶ的ＳＰ2 / 0细胞的细胞毒活性明显高于其他组 (Ｐ <0 .0 5) ,荷瘤试验显示第 3组免疫小鼠注…     

有限稀释定量PCR检测血清HBV DNA的临床应用及意义

本文应用有限稀释PCR技术,以已知浓度的DNA为参比标准,定量检测慢性乙型肝炎(CFIB)患者血清中HBV DNA的浓度,观察其对α-干扰素(IFN)抗病毒治疗效果及预后的意义.现将结果报告如下.     

射频消融治疗肝细胞癌后血清磷脂酰肌醇蛋白聚糖3检测及意义

目的检测肝细胞癌(HCC)患者射频消融治疗前后血清中磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)的浓度,初步研究其在疗效评价中的临床应用价值。方法采用酶联免疫吸附法检测59例HCC患者、35例肝硬化患者、30例健康对照组血清中GPC3的表达,其中30例HCC患者经射频消融治疗,对治疗前与治疗后1d、5d、30d血清中GPC3的浓度进行比较。结果 HCC患者血清GPC3浓度明显高于肝硬化患者和健康对照组人群,3组间比较差异有统计学意义(P<0.01),HCC患者射频消融治疗后不同时间点GPC3含量较治疗前均有显著下降(P<0.01)。结论血清GPC3含量升高有助于HCC的诊断,特异性较好,与甲胎蛋白表达无显著相关性,射频消融治疗后不同阶段GPC3均有不同程度降低,在疗效评估中有一定临床价值。     

RNAi靶向抑制HBV复制和HBeAg表达

目的观察靶向HBVC基因区的RNA干扰对HBV复制的抑制作用。方法选择HBV基因组C区的Nt2021-2049作为靶序列,合成相应的正、反义寡核苷酸,退火后形成双链,克隆入shRNA表达质粒,将得到的质粒与HBV质粒共转染HepG2细胞,观察HepG2细胞中HBV的受抑制情况。结果病毒复制及HBeAg的表达明显受到抑制。结论所选靶区通过RNA干扰可有效抑制HBV复制。     

免疫疗法治疗慢性乙肝病毒感染者疗效观察

目的 探讨抗HBe阳性的HBV慢性感染者前C区变异株的发生率及治疗方法。方法 选择抗HBe阳性的HBV慢性感染者，应用DNA序列分析方法检测其前C区的变异的发生率，然后用免疫疗法(左旋咪唑搽剂 乙肝疫苗 潘生丁)治疗，观察其对HBV前C区变异株患者的疗效，并以HBeAg阳性患者为对照。结果 (1)抗HBe阳性的HBV慢性感染者前C区变异发生率为10／12；10例均为A1896终止变异，其中5例与野生株混合，6例伴BCP变异。(2)本试验的免疫疗法对前C区变异株的疗效(5，7)优于HBeAg阳性者(2，11)的疗效。结论 (1)本研究对象中抗HBe阳性的HBV慢性感染者前C区变异发生率较高；(2)本研究所试用的免疫疗法对前C区变异株的疗效优于对HBeAg阳性者的疗效。但均因例数太少难于肯定，需进行更大样本的研究。     

重组逆转录病毒载体携带乙型肝炎病毒载体的构建与表达

目的 探索利用逆转录病毒载体表达HBV载体的可能性及复制缺损性HBV能否被正确包装。方法 在逆转录病毒载体中插入表达显性阴性突变体的HBV基因复制单元，制备重组逆转录病毒后分别用以感染Hep G2和2．2．15细胞，免疫荧光法检测细胞内HBV核心抗原的表达，PCR检测上清液中重组HBV颗粒。结果 在包装细胞系PA317中能形成较高滴度的重组逆转录病毒，用以感染Hep G2细胞后，可检出核心抗原的表达。感染2．2．15细胞后，在培养上清液中能检测出突变型HBV颗粒。结论 重组逆转录病毒能携带HBV载体在细胞内表达，并在有野生型HBV提供结构蛋白的前提下，发挥HBV载体的功能，可望用于抗HBV基因治疗。