用协同凝集试验诊断新型隐球菌脑膜炎

用CoA法检测21份临床诊断为隐球菌脑膜炎患者脑脊液中的隐球菌抗原,并与培养法、墨汁染色法和免疫荧光法比较,其阳性率分别为75.7％与57.1％、57.1％42.9％,以CoA法阳性率最高。将脑脊液用未经抗体致敏的SPA菌进行预处理以克服假阳性,是一种具有实用价值的诊断方法。     

118例婴幼儿夏季急性腹泻细菌病原学检测

<正> 婴幼儿急性腹泻是儿科门诊的常见病之一。我国及全世界均广泛存在和流行。在温带地区具有季节性。腹泻所涉及的病原很多,在不同季节和不同年龄其主要病原显然不同。为     

反义c-myc寡核苷酸抑制大鼠胸腺淋巴细胞增殖

目的:观察反义c-myc寡核苷酸对大鼠胸腺淋巴细胞增殖的抑制作用。方法:Ficoll密度梯度离心法分离大鼠胸腺淋巴细胞。利用Iipofectin将正义、反义及错配c-myc寡核苷酸导入大鼠胸腺淋巴细胞,-TdR掺入法及MTS法检测淋巴细胞增殖,RT-PCR检测c-mycmRNA的表达。结果:反义c-myc寡核苷酸可抑制大鼠胸腺淋巴细胞的增殖,但此抑制作用无浓度依赖性,反义c-myc寡核苷酸可降低胸腺淋巴细胞c-mycmRNA的表达。结论:反义c-myc寡核苷酸可抑制大鼠胸腺淋巴细胞的增殖。     

杀菌/通透性增强蛋白N端cDNA的克隆和表达

目的　克隆杀菌 /通透性增强蛋白 (BPI) N端 c DNA,构建原核和真核表达载体 ,分别在大肠杆菌和 CHO细胞中表达 BPI蛋白 .方法　提取正常人外周血多形核粒细胞 (PMN)总 RNA,经套式 RT- PCR法扩增出 BPI N端 c DNA片段 ,将其克隆入 p GEM- T easy载体中并进行酶切鉴定和序列测定 .然后亚克隆入 p GEX- 4T- 1质粒 ,转化大肠杆菌 ,进行诱导表达 ,表达产物用 Western blot法鉴定 .同时将该基因片断克隆入 pc DNA3质粒 ,通过脂质体转染 CHO细胞 ,免疫荧光法鉴定 BPI的表达 .结果　获得 BPI N端长度为 72 6 bp的基因片断 .序列分析证实该片断中有 4个点突变 ,但均不在活性中心 .在大肠杆菌中的表达产物为相对分子质量 5 1× 10 3的GST- BPI融合蛋白 ,Western blot反应中在 5 1× 10 3处有显色区带 .G418筛选出的阳性 CHO细胞在免疫荧光反应中产生荧光反应 .结论　我们成功的在大肠杆菌和 CHO细胞中表达了 BPI2 5蛋白 ,为进一步研究 BPI生物学功能奠定了基础     

聚合酶链反应检测单纯疱疹病毒感染

0　引言　单纯疱疹病毒 (HSV)有两个血清型 :HSV- 1和HSV- 2 ,流行于全世界 .近年来 ,HSV在性传播疾病 (STD)和妇幼保健、优生优育方面已受到高度重视 .目前 HSV感染的检验诊断技术有病毒培养、免疫荧光 (IF)、酶联免疫吸附试验(EL ISA)以及 PCR等 .我们依据 HSV基因的特异性保守区设计三条引物 ,建立了分型检测 HSV基因的 PCR方法 .1　材料和方法　 P1为上游通用型引物 ,P2为 HSV - 1特异性引物 ,P3为 HSV- 2特异性引物 ,由上海生工公司合成 .序列分别为 :P15′- ATG GTG AAC ATC GAC ATG TAC GG- 3′P2 5′-…     

重组结核分枝杆菌Rv2389c蛋白的纯化及其生物学功能的初步研究

目的：纯化晕组的结核分枝杆菌促进复活因子（resuscitation-promoting factor，Rpf）Rv2389c蛋白，并研究其对结核分枝杆菌、卡介苗（BCG）和藤黄微球菌的生长有无促进作用？方法：用亲和层析柱纯化重组的结核分枝杆菌Rv2389c蛋白，并将其加到一定浊度的结核分枝杆菌、BCG和藤黄微球菌培养液中，每隔一定时间测定菌液OD600值。结果：经过纯化，得到了去掉谷胱苷肽转移酶（GST）标签的重组Rv2389c蛋白，浓度为306.9μg／ml，且发现Rv2389c蛋白对结核分杆菌、BCG和藤茧微球菌的牛长都有一定的促进作用。结论：成功纯化了重组结核分枝杆菌Rv2389c蛋白，并证实它具有生物学活性，能促进结核分枝杆菌、BCG和藤黄微球菌的生长，为进一步研究其机制奠定了基础。     

3TAT-DRBD融合蛋白的原核表达及其siRNA结合活性与穿膜功能的鉴定

目的： 构建3TAT-DRBD重组载体,表达和纯化融合蛋白,并对其siRNA结合活性和穿膜功能进行初步验证。 方法： 采用基因合成技术获取靶基因 3TAT-DRBD, 并克隆到原核表达载体pET-44b中;用IPTG诱导融合蛋白表达,镍亲和凝胶层析柱纯化融合蛋白,凝血酶切除标签,Western blotting鉴定。凝胶迁移阻滞实验验证DRBD和siRNA的结合能力,激光共聚焦显微镜观察TAT的穿膜能力。 结果： 限制性酶切和基因测序表明重组质粒pET-44b-3TAT-DRBD构建成功;IPTG诱导后3TAT-DRBD融合蛋白（含Nus标签和S标签）在大肠杆菌中高效表达,可溶性蛋白占菌体总蛋白约80%;成功切除融合标签并纯化了无标签的融合蛋白,经Western blotting鉴定其相对分子质量约为17 000;凝胶迁移阻滞实验证明,融合蛋白3TAT-DRBD 能有效结合靶向survivin基因的siRNA（survivin-siRNA）;激光共聚焦显微镜下可见,在TAT的介导下survivin-siRNA穿透胞膜进入前列腺癌PC3细胞的效率明显增高。 结论： 成功表达并纯化了具有siRNA结合活性与穿膜功能的3TAT-DRBD融合蛋白,为进一步3TAT-DRBD的功能研究及临床应用奠定了基础。     

耐多药结核分枝杆菌双组份系统反应调节子表达的研究

目的 检测MTB耐多药菌株和敏感菌株的TCS反应调节子的表达水平,以筛选出与MTB耐药相关的TCS。方法将7H9肉汤培养至对数生长期的MTB进行总RNA的提取和纯度鉴定;然后进行反转录,利用SYBR Green I实时荧光定量PCR方法检测MTB的TCS反应调节子表达水平,以筛查出在耐多药菌株和敏感株中差异表达的TCS反应调节子。检测1NH、SM和LFA压力下这些差异表达的TCS反应调节子的表达水平。结果 与敏感菌株相比,在耐多药菌株中Rv0491、Rv3133c、Rv3143和Rv3246c分别上调表达1.03、7.11、3.48和1.37倍,差异有统计学意义（t或t'=5.623、-4.196、-3.559、-3.016,P＜0.01）。而其余反应调节子的表达在耐多药菌株和敏感菌株之间差异均无统计学意义。在抗生素压力下,Rv1027c、Rv3246c和Rv3143的表达明显升高,Rv0491和Rv3133c则变化不明显。结论Rv3246c和Rv3143的差异表达可能是MTB耐药的重要机制之一,可为新型抗结核药物的研制提供理论依据。     

西安地区一株TT病毒的基因克隆及序列分析

目的 对TTV阳性扩增产物进行克隆及测序，以了解西安地区TTV基因及基因结构的特点。方法 采用巢式PCR从转氨酶活性异常增高的患者血清中，得到TTV阳性扩增产物，将其插入pGEM-T easy载体，进行克隆及序列分析。结果 获得1个pGEM-TTV重组载体。序列分析表明，插入片段为196bp。该序列与AF065400株等对应位置的核苷酸同源性分别为：AF065400（中国株）94．9％、AF351132（中国株）98．0％和NC－002076（日本株）99．0％。结论 西安地区TTV阳性扩增序列与报道的AF065400株、AF351132株和NC－002076株的序列具有高度的同源性，属同个基因型别。     

乙醇对结核分枝杆菌Mr 38 000 蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的促进作用

目的：探讨乙醇促进结核分枝杆菌Mr 38000蛋白的可溶性表达，并获得可溶性的Mr 38000重组蛋白．方法：采用聚合酶链反应(PCR)从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Mr 38000蛋白的编码基因，用限制性内切酶消化后插入载体pGEx-4T-2中，将重组质粒转化大肠杆菌BL21。在乙醇添加剂存在下，经IPTG诱导，表达GST-38融合蛋白；聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分析融合蛋白的相对分子质量及表达形式，免疫印迹法鉴定融合蛋白的活性．结果：经PCR扩增后证实为Mr 38000蛋白的基因，成功构建了具有正确基因序列的重组表达载体，在大肠杆菌BL21中诱导表达融合蛋白约占菌体总蛋白的18％．在乙醇存在下，可溶性目的蛋白的表达量约是无乙醇时的5倍．结论：在原核表达中乙醇作为一种添加剂可以促进结核分枝杆菌Mr 38000蛋白在大肠杆菌BL21中的可溶性表达．