氨茶碱对大鼠气道平滑肌细胞分泌基质金属蛋白酶的影响

目的: 探讨氨茶碱对体外培养的大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)分泌基质金属蛋白酶(MMPs)的影响及其与ASMC增殖抑制的关系 .方法: 分离大鼠气道平滑肌细胞,在含有100 mL/L胎牛血清的DMEM中培养,第4～6代细胞用于实验,细胞用不同浓度氨茶碱(0,50,100,200 mg/L)诱导培养12～72 h;采用细胞计数法观察并比较不同浓度氨茶碱对培养细胞的增殖抑制作用; Western blot和明胶酶谱法检测细胞MMP2,MMP9的活性及表达 . 结果: ① 100和200 mg/L浓度氨茶碱对体外培养大鼠ASMC增生较对照组有明显的抑制作用(P <0.05);②当氨茶碱浓度＞50 mg/L时,Western blot法检测到MMP2和MMP9表达显著降低(P <0.05),且呈剂量依赖效应;③明胶酶谱也显示,浓度＞50 mg/L的氨茶碱作用48 h后,明胶酶活性较对照组显著降低,也呈剂量依赖效应 .结论: 氨茶碱通过剂量依赖效应抑制大鼠ASMC分泌MMP2和MMP9,从而阻止气道平滑肌细胞增生和气道重塑.     

抗前列腺癌多肽融合蛋白在大肠杆菌中的原核表达

目的: 探讨抗前列腺癌多肽融合蛋白在大肠杆菌中的原核表达,为抗前列腺癌新药的研究奠定基础. 方法:通过BH3, K237, DG2结构域和能被PSA特异性水解的短肽序列设计多肽药物的氨基酸序列,并依据大肠杆菌的偏爱密码子反翻译成基因序列. 分段合成寡聚脱氧核糖核酸,经磷酸化、退火后,先后克隆至表达载体pGEX-4T-2的BamH I和EcoR I之间. 将经双酶切鉴定获得的阳性重组子进行DNA测序. 用IPTG诱导重组菌株表达并进行SDS-PAGE分析. 结果:pGEX 4T-2-APP216酶切鉴定可见约216 bp电泳条带,与设计长度相符. 测序结果证实pGEX 4T-2-APP216的基因序列与设计完全一致. SDS-PAGE分析表明该基因在原核细胞中获得高效融合表达,所得到蛋白分子质量与预测相符. 融合蛋白表达量约占菌体总蛋白的30%. 结论:通过抗前列腺癌多肽序列在大肠杆菌中的高效表达,为前列腺癌的治疗提供新的思路和方法.     

肿瘤的酶-前药疗法

药物在肿瘤部位的低浓度及系统毒性仍是干扰肿瘤治疗的因素之一.酶-前药疗法将酶的高效性与前药的低毒性相结合,开辟了肿瘤治疗的新领域.现综述酶-前药疗法的分类、原理、应用现状及前景.     

免疫抑制小鼠侵袭性肺烟曲霉菌病动物模型的建立及病理分析

目的:建立侵袭性肺烟曲霉菌病动物模型,探讨免 疫抑制宿主曲霉菌病致病机制.方法:以甲基强的松龙为免 疫抑制剂,造成小鼠免疫抑制,对腹腔巨噬细胞和脾细胞进行 计数.双侧鼻孔滴注烟曲霉菌孢子引起侵袭性肺烟曲霉菌病, 不同时间点处死小鼠,进行组织培养及病理分析.结果:糖皮 质激素注射后小鼠免疫细胞数量急剧下降,腹腔巨噬细胞数 量明显减少[(6.33±1.76)×106vs(3.18±0.57)×106, P<0.01],脾细胞和外周血淋巴细胞数量下降(P<0.01);病 理切片可见免疫抑制小鼠感染烟曲霉菌后肺组织大量烟曲 霉菌聚积,组织坏死,形成肺脓肿.结论:成功建立了免疫抑 制小鼠侵袭性肺烟曲霉菌病动物模型,为研究免疫抑制宿主 易于感染烟曲霉菌的致病机制以及疾病的发生发展奠定基 础.     

芪丹通脉片对实验性动脉粥样硬化大鼠动脉壁ICAM-1、VCAM-1基因表达的影响

目的: 观察芪丹通脉片(QDTMT)对实验性动脉粥样硬化(AS)大鼠动脉壁匀浆中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响,探讨QDTMT的抗AS机制. 方法: 将健康雄性SD大鼠72只按体质量随机分为6组,每组12只:模型组(model)、空白对照组(control)、阳性对照辛伐他汀组(simvastatin)、QDTMT低剂量组(QDTMTL)、QDTMT中剂量组(QDTMTM)、QDTMT高剂量组(QDTMTH). 采用高脂饮食配合口服维生素D3建立大鼠AS模型,各组动物ig给药. 采用半定量RT-PCR的方法检测各组动物动脉壁匀浆中ICAM-1和VCAM-1基因的表达,分析造模及各药物组ICAM-1和VCAM-1基因表达的变化. 结果: 与空白对照组相比,模型组ICAM-1和VCAM-1基因的表达明显增加(P<0.01);与模型组相比,辛伐他汀组及各中药组均能减少ICAM-1和VCAM-1基因的表达(P<0.01-0.05),且QDTMTH的作用明显优于QDTMTL(P<0.05). 结论: QDTMT能下调实验性AS大鼠动脉壁ICAM-1和VCAM-1基因的表达,这可能是QDTMT抗AS的机制之一.     

肾病患者尿液红细胞荧光定位方法及应用

目的：建立免疫荧光方法对尿中红细胞膜上进行荧光定位，以区别肾性与非肾性血尿．方法：以荧光标记兔抗人免疫球蛋白为抗体，采用直接免疫荧光染色法检测肾病患176例，非肾病患163例，观察尿中红细胞膜上的荧光着色程度，从而建立红细胞荧光定位检查方法，用于肾病的鉴别诊断，同时做尿沉渣形态学对比检查．结果：用荧光标记的兔抗人Ig抗体(抗IgA，IgG，IgE及IgM抗体)分别对肾病组患176例尿中红细胞上4种Ig抗体染色检查，总阳性率为97．2％(171／176)；形态学检查总阳性率为64．2％(113／176)；对非肾病患163例尿中红细胞上Ig染色检查，总阳性率为1．2％(2／163)．结论：直接免疫荧光染色法是在尿沉渣检查的基础上发展的一种新的染色法，免疫荧光染色方法特异性强，对鉴别肾性与非肾性血尿具有较高的应用价值。     

聚合酶链反应快速检测加德纳菌的方法和应用

目的 建立聚合酶链反应快速检测加德纳菌方法,用于细菌性阴道病的诊断和治疗。方法 根据加德纳菌基因序列中IIS-23srRNA基因区设计并合成特异性引物,应用聚合酶链反应扩增阴道或宫颈分泌物中的加德纳菌,并与革兰染色和分离培养进行对照检测。结果 经对阴道加德纳菌和5种常见的阴道感染病原体检测,证实所用引物具有较高的特异性;敏感性实验结果10^2可扩增出明显的区带;在50例宫颈分泌物标本中,革兰染色阳性检出率为18%（9/50）、分离培养阳性检出率为16%（8/50）,聚合酶链反应阳性率为28%（14/50）。结论 采用聚合酶链反应检测阴道分泌物中的加德钠菌,用于细菌性阴道病的快速诊断,有可能成为细菌性阴道病实验室诊断的主要检测方法。     

芪丹通脉片对动脉粥样硬化大鼠血清NO含量及动脉壁eNOS基因表达的影响

目的: 观察芪丹通脉片(QDTMT)对实验性动脉粥样硬化(AS)大鼠血清一氧化氮(NO)含量和动脉壁匀浆中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的影响,探讨QDTMT的抗AS机制. 方法: 将健康雄性SD大鼠72只随机分为6组,每组12只:模型组(model)、空白对照组(control)、阳性对照辛伐他汀组(simvastatin)、QDTMT低剂量组(QDTMT-L)、QDTMT中剂量组(QDTMT-M)、QDTMT高剂量组(QDTMT-H). 采用高脂饮食配合灌胃给予维生素D3建立大鼠AS模型,各组动物灌胃给药. 采用萘胺重氮分光光度法测定血清NO含量,采用半定量RT-PCR方法检测各组动物动脉壁匀浆中eNOS基因的表达,分析造模及各药物组血清NO含量及eNOS基因表达的变化. 结果: 与空白对照组相比,模型组和各用药组血清NO含量均明显增加(P<0.01);模型组eNOS基因的表达较空白对照组明显减少(P<0.01),与模型组相比,辛伐他汀组及各中药组均能增加eNOS基因的表达(P<0.01),且QDTMT各剂量组之间存在量效关系. 结论: QDTMT能增加AS大鼠动脉壁eNOS基因的表达,这可能是QDTMT抗AS的机制之一.     

中药芪丹通脉片对动脉粥样硬化大鼠主动脉内皮细胞及PAI-1表达影响

目的:探讨中药芪丹通脉片对动脉粥样硬化大鼠主动脉内皮细胞及PAI-1的影响.方法:将72只SD雄性大鼠随机分为6个实验组,其中一组为阴性对照组,给以普通饮食,一组为模型组,给予维生素D3,高脂和高胆固醇饮食,其余4组在给予高脂、高胆固醇饮食建立动脉粥样硬化大鼠模型同时给予芪丹通脉片低剂量组[0.36g/(kg·d)]、中剂量组[1.08g/(kg·d)]、高剂量组[3.24g/(kg·d)]、阳性对照新伐他丁组[4 mg/(kg·d)](n=12).16 wk后电镜观察大鼠主动脉内皮细胞损伤情况,并通过逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测PAI-1表达.结果:模型组内皮细胞损伤最严重、PAI-1表达明显高于对照组(P＜0.05);给予芪丹通脉片大鼠内皮细胞损伤减轻、PAI-1表达显著降低,中药高剂量组结果接近辛伐他丁组.结论:动脉粥样硬化大鼠主动脉内皮细胞损伤严重,其PAI-1表达增强,使用芪丹通脉片可明显改善内皮损伤程度,同时降低PAI-1表达,且其低、中、高浓度组PAI-1表达依次减少(P＜0.05).     

Survivin及其剪接变异体在脑胶质瘤中的表达

目的 探讨凋亡蛋白抑制因子Survivin及其剪接变异体Survivin-Δex3、Survivin-2B在脑胶质瘤发生发展中的作用.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Survivin及其剪接变异体Survivin-Δex3、Survivin-2B mRNA在62例脑胶质瘤和10例正常脑组织标本中的表达水平.结果 Survivin、Survivin-Δex3及Survivin-2B mRNA在脑胶质瘤中表达阳性率分别为67.7%、30.6%和17.7%,三者在正常脑组织中均无表达;Survivin和Survivin-Δex3 mRNA表达阳性率在脑胶质瘤及正常脑组织之间分别具有极显著差异(P=0.000<0.01)和显著差异(P=0.010<0.05);Survivin mRNA表达阳性率在低恶性度和高恶性度脑胶质瘤之间以及脑胶质瘤不同病理级别间分别具有极显著差异(P=0.002<0.01,P=0.004<0.01).结论 Survivin在脑胶质瘤发生发展过程中具有重要作用,其剪接变异体Survivin-Δex3、Survivin-2B也发挥一定作用;Survivin可作为脑胶质瘤生物治疗的一个良好分子靶点.