O─157:H7大肠杆菌的实验室签定及临床意义

O－157大肠杆菌作为一种致病菌被认识是在1982年。这一年美国首次发生了由O－157大肠杆菌引起的食物中毒，此前它一直被看作为非致病菌，而且非常罕见。1982年以后。由其引起的食物中毒在美国频频出现，在英国、加拿大、澳大利亚等发达国家也接连不断发生．1993年美国发生的一次波及700余人的感染性暴发惊动了国会．从此，由其引发的病例纳入了报告系统，至今，美国已记载了此病菌引发的暴发流行60多起．今年以前，日本也已发生8起这类暴发，均因规模不大而未予重视．然而今夏之疫的规模、持续时间、传播范围，都创下了0－157：H7侵扰人类…     

自噬相关基因Beclin-1的克隆及原核表达载体的构建

目的 克隆并构建自噬相关基因Beclin-1原核表达载体.方法 根据Beclin-1编码区DNA序列设计引物,用前列腺癌细胞LNCaP作为模板进行RT-PCR,扩增Beclin-1编码区全基因片段,与pQE-80质粒连接后进行测序鉴定.结果 RT-PCR扩增出Beclin-1目的基因,限制性内切酶证实其已插入表达质粒中,DNA测序证实Beclin-1编码区全基因片段与GenBank公布的相应基因核苷酸序列的同源性为完全一致.结论 成功克隆并构建了自噬相关基因Beclin-1原核表达载体,为研究Beclin-1蛋白的细胞自噬作用奠定了基础.     

血乳酸及乳酸清除率测定对危重病患者预后评估的价值

目的 探讨血乳酸水平及乳酸清除率与危重病患者预后的相关性.方法 采用干化学方法对102例危重病患者进行血乳酸测定和乳酸清除率计算,结合临床资料,分析患者血乳酸浓度及乳酸清除率与疾病预后的关系.结果 血乳酸水平越高,患者预后越差,APACHEⅡ评分和死亡率呈升高趋势(P<0.05).24 h乳酸清除率较低的患者住院病死率高于高清除率患者(P<0.05).结论 血乳酸及乳酸清除率可作为危重病患者病情监测和预后评价的指标.     

芪丹通脉片对动脉粥样硬化大鼠主动脉及单个核细胞CD40表达的影响

目的: 探讨芪丹通脉片对动脉粥样硬化大鼠主动脉和单个核细胞CD40的影响. 方法: 将72只SD雄性大鼠随机分为6个实验组:阴性对照组(n=12)给以普通饮食,模型组(n=12)给予高脂、高胆固醇饮食,其余4组在给予高脂、高胆固醇饮食建立动脉粥样硬化大鼠模型同时分为芪丹通脉片低剂量组[0.36 g/(kg·d)]、中剂量组[1.08 g/(kg·d)]、高剂量组[3.24 g/(kg·d)]和阳性对照辛伐他丁组[4 mg/(kg·d)]. 16 wk后通过RT-PCR检测大鼠主动脉及单个核细胞上CD40表达. 结果: 模型组CD40表达明显高于对照组(P<0.05) ;给予芪丹通脉片大鼠CD40表达显著降低,高浓度组结果接近辛伐他丁组. 结论: 动脉粥样硬化大鼠主动脉及单个核细胞CD40表达增强,使用芪丹通脉片可降低CD40表达,其低、中、高浓度组CD40表达依次减少(P<0.05).     

转染bcl-2基因对心肌细胞低氧/复氧损伤中细胞凋亡的影响

目的:研究转染抗凋亡基因bcl-2对心肌细胞凋亡的影响. 方法:采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,建立模拟心肌缺血/再灌注模型;提取含有人bcl-2基因的逆转录病毒真核表达载体pDOR-SB质粒,用脂质体介导的基因转染法将pDOR-SB质粒转染心肌细胞. 实验分3组:正常对照组、模拟缺血/再灌注组和基因转染组;计算台盼蓝摄取率,测定肌酸磷酸肌酶活性,透射电镜及琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡情况. 结果:在正常对照组未发现细胞凋亡,而在缺血再灌注组细胞凋亡明显增多,台盼蓝摄取率和肌酸磷酸肌酶活性明显增加(P<0.01),转染bcl-2基因组心肌细胞凋亡明显减少. 结论:细胞凋亡参与了心肌缺血/再灌注损伤,转染bcl-2基因可减少缺血/再灌注中的心肌细胞凋亡.     

氨茶碱对大鼠气道平滑肌细胞分泌基质金属蛋白酶的影响

目的: 探讨氨茶碱对体外培养的大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)分泌基质金属蛋白酶(MMPs)的影响及其与ASMC增殖抑制的关系 .方法: 分离大鼠气道平滑肌细胞,在含有100 mL/L胎牛血清的DMEM中培养,第4～6代细胞用于实验,细胞用不同浓度氨茶碱(0,50,100,200 mg/L)诱导培养12～72 h;采用细胞计数法观察并比较不同浓度氨茶碱对培养细胞的增殖抑制作用; Western blot和明胶酶谱法检测细胞MMP2,MMP9的活性及表达 . 结果: ① 100和200 mg/L浓度氨茶碱对体外培养大鼠ASMC增生较对照组有明显的抑制作用(P <0.05);②当氨茶碱浓度＞50 mg/L时,Western blot法检测到MMP2和MMP9表达显著降低(P <0.05),且呈剂量依赖效应;③明胶酶谱也显示,浓度＞50 mg/L的氨茶碱作用48 h后,明胶酶活性较对照组显著降低,也呈剂量依赖效应 .结论: 氨茶碱通过剂量依赖效应抑制大鼠ASMC分泌MMP2和MMP9,从而阻止气道平滑肌细胞增生和气道重塑.     

抗前列腺癌多肽融合蛋白在大肠杆菌中的原核表达

目的: 探讨抗前列腺癌多肽融合蛋白在大肠杆菌中的原核表达,为抗前列腺癌新药的研究奠定基础. 方法:通过BH3, K237, DG2结构域和能被PSA特异性水解的短肽序列设计多肽药物的氨基酸序列,并依据大肠杆菌的偏爱密码子反翻译成基因序列. 分段合成寡聚脱氧核糖核酸,经磷酸化、退火后,先后克隆至表达载体pGEX-4T-2的BamH I和EcoR I之间. 将经双酶切鉴定获得的阳性重组子进行DNA测序. 用IPTG诱导重组菌株表达并进行SDS-PAGE分析. 结果:pGEX 4T-2-APP216酶切鉴定可见约216 bp电泳条带,与设计长度相符. 测序结果证实pGEX 4T-2-APP216的基因序列与设计完全一致. SDS-PAGE分析表明该基因在原核细胞中获得高效融合表达,所得到蛋白分子质量与预测相符. 融合蛋白表达量约占菌体总蛋白的30%. 结论:通过抗前列腺癌多肽序列在大肠杆菌中的高效表达,为前列腺癌的治疗提供新的思路和方法.     

肿瘤的酶-前药疗法

药物在肿瘤部位的低浓度及系统毒性仍是干扰肿瘤治疗的因素之一.酶-前药疗法将酶的高效性与前药的低毒性相结合,开辟了肿瘤治疗的新领域.现综述酶-前药疗法的分类、原理、应用现状及前景.     

免疫磁珠与荧光定量PCR联合检测乳制品中阪崎肠杆菌的实验研究

[目的]建立一种免疫磁珠吸附-荧光定量PCR(IMB-FPCR)快速检测阪崎肠杆菌的方法,探讨在乳制品污染监测及食物中毒快速诊断中的应用。[方法]根据阪崎肠杆菌rpsU-dnaG基因序列设计引物和探针,采用基因重组技术构建用于金黄色色葡萄球菌检测的定量标准品,建立阪崎肠杆菌IMB-FPCR检测方法。[结果]成功构建了阪崎肠杆菌重组质粒标准品和阪崎肠杆菌IMB-FPCR方法。阪崎肠杆菌的免疫磁珠吸附试验显示磁珠对奶粉中的阪崎肠杆菌吸附率达77.7%。通过特异性、敏感性、稳定性和重复性验证,结果表明具有较好的特异性,最低检测限为10cfu/ml的菌细胞,并具有良好的稳定性和重复性。整个检测仅需时1d。[结论]IMB-FPCR简便快速、灵敏度高及特异性强,为准确检测乳制品中阪崎肠杆菌提供了一个新的途径,可广泛应用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等。     

芪丹通脉片对动脉粥样硬化大鼠血清NO含量及动脉壁eNOS基因表达的影响

目的: 观察芪丹通脉片(QDTMT)对实验性动脉粥样硬化(AS)大鼠血清一氧化氮(NO)含量和动脉壁匀浆中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的影响,探讨QDTMT的抗AS机制. 方法: 将健康雄性SD大鼠72只随机分为6组,每组12只:模型组(model)、空白对照组(control)、阳性对照辛伐他汀组(simvastatin)、QDTMT低剂量组(QDTMT-L)、QDTMT中剂量组(QDTMT-M)、QDTMT高剂量组(QDTMT-H). 采用高脂饮食配合灌胃给予维生素D3建立大鼠AS模型,各组动物灌胃给药. 采用萘胺重氮分光光度法测定血清NO含量,采用半定量RT-PCR方法检测各组动物动脉壁匀浆中eNOS基因的表达,分析造模及各药物组血清NO含量及eNOS基因表达的变化. 结果: 与空白对照组相比,模型组和各用药组血清NO含量均明显增加(P<0.01);模型组eNOS基因的表达较空白对照组明显减少(P<0.01),与模型组相比,辛伐他汀组及各中药组均能增加eNOS基因的表达(P<0.01),且QDTMT各剂量组之间存在量效关系. 结论: QDTMT能增加AS大鼠动脉壁eNOS基因的表达,这可能是QDTMT抗AS的机制之一.