一贯煎对CCl4诱导肝纤维化大鼠肝细胞凋亡及其调控基因表达的影响

目的:研究一贯煎对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝细胞凋亡及其调控基因表达的影响。方法:用50%CCl4橄榄油溶液(1 ml/kg)大鼠腹腔注射造模,每周2次,共9w。于造模3w和6w末,随机抽取正常及模型大鼠处死作动态观察。从第7w始模型大鼠随机分为模型对照组和药物干预组,药物干预组给予一贯煎灌胃,共计3w。9w末检测肝组织Fas、Bax、Bcl-xL、细胞色素(Cyt)C、Caspase-12、Caspase-3蛋白表达和肝细胞凋亡情况。结果:①与正常组大鼠比较,3w、6w及9w时模型大鼠肝组织Fas、Bax和Caspase-12蛋白表达逐渐升高(P<0.05,P<0.01)。与9w模型组比较,一贯煎组Fas、Bax和Caspase-12蛋白表达显著降低(P<0.01),而Cyt C和Bcl-xl蛋白表达在各组之间无显著差异(P>0.05)。②与正常组比较,造模3w时肝组织Caspase-3蛋白表达达到高峰(P<0.01),肝细胞凋亡数量亦达到高峰;6w、9w模型组大鼠Caspase-3蛋白表达和肝细胞凋亡较3w有降低的趋势。与9w模型组大鼠比较,一贯煎组大鼠Caspase-3蛋白表达显著降低,肝细胞凋亡显著减少。结论:一贯煎抑制CCl4诱导大鼠肝纤维化肝细胞凋亡的作用机制可能与干预Fas和内质网凋亡通路有关。     

Lieber-DeCarli酒精性肝损伤模型的复制

目的复制经典的酒精性肝损伤动物模型,为防治酒精性肝损伤的实验研究提供理想的研究工具。方法根据Lieber-DeCarli酒精液体饲料配方配制含酒精和不含酒精而热卡相同的液体饲料。23只大鼠随机分正常对照组(n=5)、无酒精液体饲料组(n=9)、酒精液体饲料组(n=9)。正常对照组大鼠给予常规饲料,无酒精液体饲料组与酒精液体饲料组分别定量给予相应液体饲料自动饮服。8周后,观察大鼠肝组织病理形态、肝细胞超微结构的变化,血清丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartateaminotransferase,AST)以及肝组织γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltransferase,γ-GT)活性、甘油三酯(triglyceride,TG)含量,以及脂质过氧化损伤相关指标的变化。结果酒精液体饲料组大鼠血清ALT、AST活性,肝组织TG含量以及脂质过氧化产物较正常对照组和无酒精液体饲料组有较大幅度的升高,同时抗氧化物质减少;酒精液体饲料组肝细胞肿胀、脂肪变性等病理改变严重。结论自行配制Lieber-DeCarli液体饲料可成功复制出早期酒精性肝损伤病理改变的大鼠模型。     

慢性乙型肝炎肝纤维化的综合治疗

肝纤维化是各种病因导致的慢性肝炎向肝硬化发展的必然病理过程,在国际疾病分类（ICD-10）中可作为一种病名（K74．001）,但主要是一种组织病理学概念。肝纤维化的实质是肝组织内细胞外基质（extracellular matrix,ECM）成分过度增生与异常沉积,导致肝脏结构或（和）功能异常的病理变化,结构上表现为肝窦毛细血管化与肝小叶内以及汇管区纤维化;     

基于均匀设计的祛湿化瘀方防治脂肪肝不同作用环节的主效应中药剖析

目的:以对实验性脂肪肝有显著防治作用的祛湿化瘀方为切入点,探索中药复方多途径、多环节药理作用的相应物质基础的研究方法。方法:采用CCl4复合高脂低蛋白饮食诱导的大鼠脂肪肝模型,运用"均匀设计法",根据复方中的5味中药(茵陈、栀子、虎杖、田基黄、姜黄),选用U11(1110)表进行组方设计所得10种组合进行干预,分别以肝甘油三酯(triglyceride,TG)、血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、丙二醛(malonyl-dialdehyde,MDA)为不同病理环节的考察指标,根据回归方程获得针对上述不同指标所提示的最佳效应中药或某种配伍组合,并根据其提示的效应中药或组合,重新分组实验进行验证。结果回归方程显示,降低肝脏TG的最佳效应组合是茵陈0.07g、田基黄0.05g、栀子0.17g、姜黄0.03g,降低ALT的最佳效应组合是茵陈0.33g、虎杖0.25g、田基黄0.25g、姜黄0.17g。而针对MDA未获得回归方程。验证实验证实了上述"筛选"结果的可靠性。结论:①均匀设计是可靠的剖析某一病理环节主效应中药或配伍组合的分析方法;②在整体实验水平,针对某一指标环节的最佳效应中药仍以中药配伍组合方式出现,也说明了中药配伍复方针对复杂病理变化的科学性。     

祛湿化瘀方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠组织蛋白酶B和肿瘤坏死因子α表达的影响

目的：研究祛湿化瘀方防治大鼠非酒精性脂肪肝的作用机制。方法：除正常对照组5只外,Wistar雄性大鼠30只运用四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）皮下注射联合高脂低蛋白饮食建立非酒精性脂肪肝模型。自造模2周后,随机分为模型组、祛湿化瘀方组和甘乐（复方二氯醋酸二异丙胺）组,每组10只,分别予祛湿化瘀方和甘乐10ml／kg灌胃。用药2周后取材,检测血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）活性和肿瘤坏死因子Q（tumor necrosis factor—α,TNF—α）含量、肝组织甘油三酯（triglyceride,TG）和游离脂肪酸（free fatty acid,FFA）含量;并分析其指标间的相关性。蛋白印迹法检测肝组织组织蛋白酶B（cathepsin B,Ctsb）、磷酸化kB抑制蛋白（phospho-inhibitor kappa B,P—IkB）和TNF—α蛋白表达。免疫组织化学染色检测肝组织中Ctsb表达。结果：祛湿化瘀方可显著降低模型大鼠肝组织TG（P〈0．05）、FFA（P〈0．01）含量和血清ALT活性（P〈0．05）,而对照药物甘乐只显示有降低ALT活性（P〈0．05）作用;模型组肝组织Ctsb、p-IKB、TNF-α蛋白表达均高于正常对照组,同时血清TNF-α水平显著上升;而祛湿化瘀方组的上述蛋白表达则低于模型组。肝组织TG与FFA含量、血清ALT活性呈正相关;血清TNF-α与肝组织FFA含量、血清ALT活性呈正相关。结论：祛湿化瘀方抑制肝脏脂肪沉积和炎症作用可能与其抑制FFA以减轻其下游“FFA—Ctsb—TNF—α”肝脂毒性通路有关。     

冬虫夏草菌丝提取物降低二甲基亚硝胺大鼠肝硬化门静脉高压效应的组织学基础

目的：探讨冬虫夏草菌丝提取物（Cordyceps myceliaextract,CME）对二甲基亚硝胺（di methylnitrosamine,DMN）大鼠肝硬化门静脉高压的防治效应及其作用机制。方法：50只Wistar大鼠采用10μg/kg DMN腹腔注射持续4周的方法制备大鼠肝硬化模型,并取15只大鼠作为正常对照组。造模即日起CME预防组大鼠（n=15）予0.74g/（kg.d）CME灌胃（按冬虫夏草菌丝生药质量计算）,1次/d,预防用药持续4周;CME治疗组大鼠（n=10）于造模成功后开始给药,用药4周。分别于造模后3d、2周、4周和造膜终止后2周、4周进行动态效应观察,肠系膜前静脉分支插管法检测门静脉压力（pressure of portal vein,Ppv）;放射免疫法测定血清透明质酸（hyaluronic acid,HA）含量,免疫组织化学法检测肝窦壁CD44、第Ⅷ因子相关抗原血管假性血友病因子（von Willebrand factor,v WF）、α-平滑肌肌动蛋白（alpha-smooth muscle actin,α-SMA）、层黏连蛋白（laminin,LM）、Ⅳ型胶原（collagen typeⅣ,ColⅣ）和Ⅰ型胶原（collagen typeⅠ,ColⅠ）表达。结果：预防用药4周后,与模型组比较,CME组大鼠门静脉管径显著缩小,门静脉压力显著降低（P〈0.05）,血清HA含量显著下降（P〈0.05）,v WF、α-SMA、ColⅣ、LM、ColⅠ染色减弱（P〈0.05）,CD44染色增强（P〈0.05）。治疗用药2周时,与模型组比较,CME组大鼠门静脉直径显著缩小,门静脉压力显著降低（P〈0.05）,血清HA含量显著下降（P〈0.05）。治疗用药4周时CME组大鼠门静脉管径与门静脉压力恢复至同期正常对照组大鼠水平。治疗用药2、4周时,与模型组比较,CME组大鼠肝窦壁CD44染色面积增加（P〈0.05）,LM、α-SMA、v WF和ColⅠ染色减弱（P〈0.05）,肝窦壁ColⅣ染色无显著变化。结论：CME对DMN致大鼠肝硬化门静脉高压具有良好的干预和治疗作用。CME抗肝窦壁损伤、保护肝窦内皮细胞、抑制肝星状细胞活化,抑制肝窦毛细血     

健脾活血方对酒精复合内毒素脂多糖诱导的肝损伤大鼠库普弗细胞活化信号通路的干预

目的:观察健脾活血方对酒精复合内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的肝损伤大鼠库普弗细胞活化信号通路的影响。方法:采用Lieber-Decarli酒精饮料饲养6周诱导的酒精性肝损伤模型,分设正常组,无酒精饮料组,酒精饮料组和酒精饮料加健脾活血方组,造模第3周起灌胃给药或蒸馏水至第6周末,各组再以LPS 10 mg/kg一次性灌胃,3.5 h后取材。检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)活性和肝组织甘油三酯(triglyceride,TG)含量;HE染色观察大鼠肝组织病理改变;CD68免疫组化观察库普弗细胞活化状态;ELISA法检测门脉血浆肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量;Western-blotting方法检测肝组织TNF-α、磷酸化的IκB(phosphorylation-IκB,P-IκB)、Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、CD68蛋白表达。结果:经健脾活血方干预后,大鼠肝脏组织病理损伤减轻,肝组织TG含量以及血清ALT活性和门脉血浆TNF-α含量下降;同时,大鼠肝脏TNF-α、P-IκB、TLR4和CD68蛋白表达明显减轻。结论:健脾活血方对酒精复合LPS诱导的肝损伤大鼠CD68、TLR4、P-IκB和TNF-α具明显抑制作用。     

从痰瘀角度论治非酒精性脂肪性肝病

通过中医古今文献研究和现代临床总结,探讨痰瘀与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发生发展的关系,提出饮食不节是促成NAFLD的始发因素,脾虚失运是形成NAFLD的关键,痰瘀互结、蓄积于肝是NAFLD的病机核心,痰瘀同治是NAFLD的基本治法。     

健脾活血方抗酒精性肝损伤脂质过氧化主效应中药分析

目的:探索具有显著抗酒精性肝损伤作用的中药复方健脾活血方抗脂质过氧化的主效应中药,并分析相关作用机制.方法:采用均匀设计法及Lieber-DeCarli乙醇液体饲料诱导的大鼠乙醇性肝损伤模型,以肝组织丙二醛(MDA)含量作为效应指标筛选主效应中药,并再次以该模型验证其药效;进一步检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及血清铁离子(Fe2+)含量以分析主效应中药抗脂质过氧化的机制.结果:含8味中药的健脾活血方中“抗脂质过氧化”主效应药物组合为:葛根、泽泻、五味子、姜黄(剂量比为250∶50∶17∶50),验证及药理分析实验显示:与模型组相比,抗脂质过氧化主效应中药组肝组织MDA,NOS,iNOS及血清Fe2+含量显著降低,SOD,GSH-Px活性显著升高.结论:健脾活血方8味中药中对大鼠乙醇性肝损伤模型“抗脂质过氧化”的主效应中药组合为“葛根+泽泻+五味子+姜黄”,其药理机制在于抑制促氧化物质NOS,iNOS及血清Fe2+产生,增加抗氧化自由基清除酶SOD,GSH-Px活性.     

内毒素诱导的库普弗细胞活化对肝细胞损伤的影响及姜黄素的干预作用

目的观察脂多糖(LPS)激活库普弗细胞(KC)后对肝细胞损伤的影响及姜黄素的干预作用。方法①分离大鼠KC,培养48h后分别添加不同浓度的姜黄素培养3h,检测乳酸脱氢酶(LDH)分析药物毒性剂量;②取无细胞毒性的3种浓度姜黄素(10mmol/L～30mmol/L)分别温育KC,另设正常组和模型对照组,1h后加LPS(浓度0.1mg/L)作用2h,然后取上清以ELISA法测定TNF-α含量;③将上述各组KC换液洗涤后,继续培养12h,然后取其培养液分别作用于分离培养24h的肝细胞,检测各时间点(作用后3h,6h,12h,24h)肝细胞上清的ALT、LDH活性。结果①姜黄素低于30mmol浓度对KC无细胞毒性;②姜黄素能显著抑制LPS刺激后KC的TNF-α的分泌量,量效关系显著,其中30mmol组接近正常水平;③经LPS作用的KC培养液对正常肝细胞有明显的损伤作用,而经姜黄素保护的各组培养液,对肝细胞的损伤作用明显减轻,呈显著的浓度依赖性。结论姜黄素可以通过抑制LPS诱导的KC活化而减轻肝细胞损伤。