miRNA在间充质干细胞成骨分化过程中的作用

间充质干细胞作为种子细胞在组织工程和再生医学领域有极大的应用前景,尤其是在骨组织工程中的应用受到了广泛关注。间充质干细胞的成骨分化机制复杂,受到多方面因素的影响,不同种类的mi RNA可分别参与抑制或促进间充质干细胞的成骨分化,在其分化过程中具有核心作用。本文对不同作用的mi RNA进行归类和总结,期待为未来的研究提供思路。     

细胞培养技术教学模式的探索与思考

细胞生物学是一门实验性很强的学科,是理论知识和实践操作密切相关的学科。大部分医学研究生在研究生阶段要掌握细胞生物学理论知识,并进行一系列细胞生物学课题研究。因此掌握最基本的细胞培养技术就显得尤为重要。作为细胞培养室的技术指导老师,在几年教学中,我不断优化和总结教学内容和教学模式,目的是培养学生实事求是的科学态度,使学生尽快养成良好的实验习惯、掌握细胞培养的基本技能。     

基于骨髓基质干细胞的组织工程化软骨在非软骨形成部位的构建稳定性

骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)因其来源广泛、增殖能力强大、大规模扩增后不易丧失分化潜能等突出优势,成为软骨组织工程种子细胞的最佳选择.     

基于人胚胎干细胞健康安全评价体系的构建

食品、药品、医疗器械和材料、生物制剂以及环境的质量和健康安全是政府和民众十分关注的热点问题。目前国际标准的健康安全评价检测方法以微生物、动物及其细胞作为载体,不能准确反映人类的生物学特征,预测人体心、肝等靶器官毒性及发育毒性的准确率偏低,在技术层面严重制约了人类健康安全的评价和监控。如何建立准确反映人类生物学特征的健康安全评价体系是关系国民健康安全的重大科学问题［1］。 人类胚胎干细胞（human embryonic stem cells, hESCs）可真实反映人类生物学特征,并利用其无限增殖和定向分化的特点,可达到检测载体的高度标准化,hESCs技术的发展为体外健康安全评价体系的升级提供了有力支持。 由北京大学牵头,联合浙江大学、中国医学科学院整形外科医院和军事医学科学院,与新加坡国立大学合作,我们完成了科技部国际科技合作一期项目“基于人胚胎干细胞健康安全评价新载体的构建”,并就相关研究成果作为科研工作综述进行发表［2］。在此基础上,合作团队顺利完成了二期项目“创建人胚胎干细胞健康安全预测新体系”,取得了系列成果,现综述如下。     

糖皮质激素促间充质干细胞的成骨效应

背景：糖皮质激素是有效的免疫抑制和抗炎症药物而广泛应用于临床,然而长期服用后也会引起一些不良反应如骨质疏松症。糖皮质激素通过促进成骨细胞与骨细胞的凋亡,同时抑制间充质干细胞向成骨细胞分化,导致成骨细胞数量减少;然而在一定的条件下,糖皮质激素又能够促进间充质干细胞表达成骨细胞标志基因诱导其向成骨方向分化。目的：对以地塞米松为代表的糖皮质激素在间充质干细胞成骨分化中发挥的作用以及可能的分子机制进行综述。方法：由第一作者检索PubMed数据库1978至2012年有关地塞米松和间充质干细胞成骨分化的文献,英文关键词“Mesenchymal stem cell, dexamethasone, osteogenesis, osteoporosis, Runx2, BMP,Noggin, GILZ, glucocorticoid receptor”以不同的组合方式查找,排除重复性的研究,最终保留55篇进行归纳综述。结果与结论：地塞米松能够调节Runx2,Noggin以及亮氨酸拉链蛋白等基因调控间充质干细胞成骨分化。当糖皮质激素作用于间充质干细胞时,可能由糖皮质激素受体介导其生理作用,也可能在糖皮质激素与其受体结合之前就受到11β-羟甾类脱氢酶的调节。另外,生理剂量（10^-88mol／L）的地塞米松能促进问充质干细胞成骨分化,药理剂量（≥10^-7mol／L）有抑制作用。     

悬滴培养法维持瘢痕疙瘩成纤维细胞表面标志CD105的表达及其功能

目的 探讨悬滴培养法对维持体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞表面标志的作用,并初步研究CD105调节细胞功能的作用。方法 以耳部瘢痕疙瘩标本3例培养成纤维细胞,将第5代细胞分别常规贴壁培养和悬滴培养1周,对同一患者来源常规培养的第4代(P4)、第5代(P5)以及悬滴培养的第5代细胞(P5HD),采用多色流式细胞仪检测表面标志CD105、CD90、CD73和CD44的表达;并采用Real-time PCR的方法,检测上述表面标志,以及瘢痕疙瘩成纤维细胞相关功能基因CTGF、Col IA1和Col IA2的m RNA表达。结果 流式检测显示CD105+和CD73+CD90+CD105+细胞比例在P4和P5HD组均高于P5组,统计学分析显示有显著性差异,但P4和P5HD组之间无差异;而CD73+、CD90+和CD44+各组细胞比例无差异。Real-time PCR结果显示,各组细胞CD105的m RNA表达与流式结果一致;且各组CTGF和Col IA1表达差异与CD105一致。结论 悬滴培养法有助于维持体外瘢痕疙瘩成纤维细胞CD105,及其与纤维化和胶原合成相应功能基因的表达,从而保持细胞的生物学功能,但机制有待于进一步的研究。     

人间充质干细胞表面标记分子的研究进展

间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cell,MSC）可作为理想的种子细胞参与组织器官的修复过程。但由于不同分离方法得到的间充质干细胞的纯度不同,极大地影响了治疗效果的稳定性。因此,利用其表面标记分子进行鉴定分选,成为当前干细胞领域研究的热点。本文就人MSC 表面标记分子的分类、功能、应用以及稳定性等方面进行综述。     

特定序列寡核苷酸对人骨髓间充质干细胞增殖能力的影响

目的：比较不同种类特定序列寡核苷酸（Oligonucleotide,ODN）对人骨髓间充质干细胞（human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs）增殖能力的影响。方法：密度梯度离心法分离培养hBMSCs,传至第3代进行成骨、成脂及成软骨诱导,鉴定其多向分化能力;将hBMSCs以不同密度接种（3.0×103/cm2、6.0×103/cm2、1.2×104/cm2、2.4×104/cm2）,采用CCK-8连续检测7d,确立最佳铺板密度;依据ODN种类（MT01、FC003、Sa05f）和终浓度（0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、4.0mg/L）分为12个实验组和1个对照组（加等量PBS）,采用CCK-8连续检测3d,明确不同种类及浓度的ODN对hBMSCs增殖能力的影响。结果：分离培养的hBMSCs具有成骨、成脂和成软骨的多向分化能力;以6.0×103/cm2的接种密度铺板可获得良好的细胞生长曲线;hBMSCs在加入每种不同浓度的ODN后,与对照组相比,终浓度为0.5mg/L的ODN FC003在第1天检测到光密度值显著升高（P〈0.01）;终浓度为1.0mg/L和4.0mg/L的ODN Sa05f在第1天检测到光密度值均显著降低（分别为P〈0.01,P〈0.05）;终浓度为2.0mg/L的ODN MT01在连续3d内的光密度值均明显升高,差异具有统计学意义（第1天P〈0.01,第2,3天P〈0.05）。结论：终浓度为2.0mg/L的ODN MT01可显著促进hBMSCs的增殖。     

止血带压迫对大鼠坐骨神经轴浆运输的影响

目的 评价止血带压迫对大鼠坐骨神经轴浆运输的影响.方法 雄性SD大鼠24只,12周龄,体重250～300 g,采用抛硬币法,将大鼠随机分为4组(n=6):止血带压迫1 h组(A组)、2 h组(B组)、4 h组(C组)和12 h组(D组).在股骨中上1/3处,结扎弹性止血带,A组持续压迫1 h;其余各组每持续压迫1 h后松开止血带10 min,直至累计压迫总时间到达预定时间.取压迫处坐骨神经,采用免疫组化法测定止血带压迫部位近心端和远心端类胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的表达水平.对压迫时间与IGF-1表达间进行直线回归分析.结果 与A组比较,其他3组止血带压迫部位远心端IGF-1表达差异无统计学意义(P＞0.05),止血带压迫部位近心端IGF-1表达上调,且呈时间依赖性(P＜0.01).压迫时间(X)与止血带压迫部位近心端IGF-1表达(Y)间的直线回归方程为Y=0.422X+0.887,而与止血带压迫部位远心端IGF-1表达不呈直线关系.结论 止血带压迫可抑制大鼠坐骨神经的轴浆运输,且呈时间依赖性.

Abstract：

Objective To investigate the effect of tourniquet compression on axonal transport in sciatic nerve of rats.Methods Twenty-four 12-week old male SD rats weighing 250-300 g were randomly divided into 4groups according to the duration of tourniquet compression(n=6 each):1,2,4 and 12 h.The tourniquet was applied to the middle 1/3 of thigh.In each animal whether the left or right thigh was compressed was determined by a flip of coin.The tourniquet was released for 10 min after every hour of compression.A 3-cm segment of sciatic nerve was removed at the end of tourniquet compression(1.5 cm proximal and 1.5 cm distal to the site of compression).Immuno-histochemistry was used to measure the expression of insulin-like growth factor-1(IGF-1)in the sciatic nerve.The ratio of average optic density of the compressed sciatic nerve to that of control was used to estimate the degree of IGF-1 accumulation.The regression equation of the interaction between the duration of compression and accumulation of IGF-1 was analyzed.Results There was significant accumulation of IGF-1 in the sciatic nerve proximal to the compressed site.The accumulation increased with the duration of compression.There was no significant accumulation of IGF-1 in the sciatic nerve distal to the compressed site.The regression equation of the interaction between the duration of compression(X)and accumulation of IGF-1(Y)was Y=0.422X+0.887.Conclusion Tourniquet compression of sciatic nerve can inhibit axonal transport.The accumulation increases with the duration of compression.