稳定表达HPV16 E6 siRNA细胞克隆的建立

目的构建针对HPV16 E6基因的逆转录病毒载体,感染HPV16阳性宫颈癌细胞,筛选稳定表达HPV16 E6 siRNA的细胞克隆。方法采用DNA重组技术构建表达靶向HPV16E6基因的pSUPER．retro RNAi逆转录病毒载体,脂质体法将逆转录病毒载体转染人包装细胞PA317,G418筛选稳定产生逆转录病毒的细胞克隆,收集病毒上清,感染靶细胞SiHa,G418筛选出稳定表达HPV16 E6 siRNA细胞克隆,RTPCR检测细胞中E6 mRNA表达,细胞增殖实验检测细胞增殖力。结果获及稳定产生逆转录病毒的细胞克隆,病毒感染靶细胞SiHa后,筛选出稳定表达HPV16 E6 siRNA的细胞克隆,RTPCR示HPV16 E6 mRNA表达受到抑制。细胞增殖实验示克隆细胞增殖率明显下降。结论成功建立稳定表达HPV16 E6 siRNA细胞克隆,特异性的siRNA能抑制细胞生长、HPV16 E6 mRNA表达,HPV16 E6 siRNA可能成为治疗宫颈癌的一种新方法。     

子宫内膜异位症和子宫腺肌病P450arom和COX-2mRNA的表达及意义

目的研究细胞色素芳香化酶P450（P450arom）基因和环氧化酶-2（cox-2）基因在子宫内膜异位症（EMs）和子宫腺肌病（AM）在位和异位内膜中的表达及相关性。方法应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术,检测22例正常子宫内膜、42例EMs及33例AM的在位和异位内膜中P450arom mRNA和COX-2mRNA的表达,并进行相关性分析。结果P450arom mRNA在正常子宫内膜无表达,在EMs和AM的在位和异位内膜中均有表达,与正常子宫内膜比较差异均有显著性（F=28．777,q=4．624～10．282,P〈0．01）。P450arom mRNA在EMs和AM异位内膜中的表达均高于在位内膜,差异有显著性（q=2．964、2．655,P〈0．01、0．05）。COX-2mRNA在正常子宫内膜无表达或弱表达,在EMs和AM的在位和异位内膜中均有表达,与正常子宫内膜比较差异均有显著性（F=21．307,q=2．583～7．905,P〈0．01）;在正常子宫内膜、EMs在位和异位子宫内膜中分泌期表达高于增殖期,差异均有显著性（t=4．401～15．865,P〈0．05）;在AM表达不随月经周期变化。COX-2mRNA在EMs和AM异位内膜中的表达均高于在位内膜,差异均有显著性（q=2．623、5．908,P〈0．05）。P450arom mRNA和COX-2mRNA在EMs的表达与rAFS分期均无相关性。P450arom mRNA与COX-2mRNA在EMs中的表达水平呈正相关（r=0．964,P〈0．01）;在AM中的表达水平亦呈正相关（r=0．813,P〈0．01）。结论P450arom和COX-2与EMs和AM的发病相关,二者协同作用促进EMs和AM的发生发展。     

COX-2与芳香化酶在增生子宫内膜及子宫内膜癌组织表达及意义

目的 研究环氧化酶-2（COX-2）与芳香化酶（P450arom）在单纯与复杂增生子宫内膜、非典型增生内膜及子宫内膜癌组织中的表达,并分析两者表达的相关性和意义。方法 选取94例手术及刮宫组织标本,其中正常子宫内膜10例、单纯与复杂增生子宫内膜29例、非典型增生子宫内膜17例、子宫内膜癌38例,运用免疫组织化学Envision法检测COX-2与P450arom蛋白的表达。结果 COX-2蛋白在单纯与复杂增生子宫内膜、非典型增生子宫内膜和子宫内膜癌中的表达均高于正常子宫内膜,差异均有统计学意义（χ^2=5.283~14.928,P〈0.05）;P450arom蛋白在子宫内膜癌中的表达高于正常子宫内膜,差异有统计学意义（χ^2=9.023,P〈0.01）;在单纯与复杂增生子宫内膜、非典型增生子宫内膜中的表达与正常子宫内膜比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。而在子宫内膜癌中,两者的表达与组织学分级及手术病理分期均无关（P〉0.05）。COX-2和P450arom蛋白在子宫内膜癌及癌前病变中的表达密切相关（r=0.598,P〈0.01）。结论 COX-2与P450arom蛋白在子宫内膜癌及癌前病变中呈高表达,且两者的表达呈正相关,提示两者可能存在协同作用,共同促进子宫内膜癌的发生和发展。     

雌激素受体亚型在子宫内膜增生中的表达

目的探讨雌激素受体(ER)亚型α和βmRNA及蛋白的异常表达在子宫内膜增生的发生发展中的作用。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白一过氧化酶连接法(SP法)，检测18例正常子宫内膜组织、47例子宫内膜增生组织中ERα和ERβmRNA及蛋白的表达。结果①正常子宫内膜组ERβmRNA的平均表达水平低于子宫内膜增生组(P＜O．01)；②ERαmRNA和蛋白在不典型增生组织中的表达低于单纯型和复合型增生组织(P＜O．05)，ERβmRNA和蛋白在这三种类型的子宫内膜增生组织间没有差异。结论ERβmRNA的异常表达在子宫内膜增生发病中起重要作用，ERαmRNA和蛋白表达的下降与子宫内膜不典型增生的发生有关。     

EBV相关胃癌与P53基因异常的研究

[目的]探讨EBV感染和p53基因异常在胃癌发生发展中的病因学作用.[方法]应用免疫组化技术检测13例EBV相关胃癌(EBV associated gastric carcinoma,EBVaGC),45例临床指标与之匹配的EBV阴性胃癌(EBV negative gastric carcinoma,EBVnGC)以及58例相应癌旁组织中p53蛋白的表达;PCR-SSCP银染技术检测p53基因exon 5～8突变情况.[结果]①胃癌组p53蛋白阳性率为86.2%(50/58),而相应癌旁组织均为阴性,胃癌组p53蛋白的阳性率明显高于癌旁组织组,两组间有极显著性差异(P=0.0000).②EBVnGC p53蛋白阳性率为86.7%(39/45),过表达率为57.8%(26/45);EBVaGC p53蛋白阳性率为84.6%(11/13),过表达率仅为15.4%(2/13).两组间p53蛋白的阳性检出率无明显差异(P=0.7912),但EBVaGC组p53蛋白过表达率明显低于EBVnGC组,两组间有显著性差异(P=0.0085).③2例EBVnGC检测到p53基因突变,突变均位于exon 5,13例EBVaGC和58例相应癌旁组织均未检测到p53基因突变.[结论]p53基因异常与胃癌的发生密切相关,EBVaGC组织中存在p53蛋白的表达和过表达,但p53蛋白的异常累积可能并非p53基因突变所致.     

紫杉醇联合铂类治疗晚期卵巢癌疗效观察

卵巢癌是死亡率最高的妇科恶性肿瘤,约70%的患者在就诊时已属晚期,致手术不能根治,术后复发率高,5年生存率仅为20%～30%[1]。因此,对晚期卵巢上皮癌如何辅以有效化疗一直是临床工作者急需解决的难题。我院自2000年4月以来,以紫杉醇联合铂类治疗晚期卵巢癌共53例,结果总结报道如下。1对象与方法1.1病例选择及一般资料2004年4月15日～2005年5月26日我院以紫杉醇联合铂类治疗晚期卵巢癌53例,年龄22～74岁,平均年龄50岁,中位年龄45岁。病例选择标准:1)已行肿瘤细胞减灭术并经病理确诊为原发性卵巢上皮癌,按FIGO分期标准[2]为Ⅲ、Ⅳ期患者;2)化…     

TLR3和TLR4基因多态性与EBV相关胃癌易感性的关系

目的 探讨TLR3c.1377和TLR4Asp299Gly基因多态性与EBV感染在EBV相关胃癌（EBVassociated gastric carcinoma, EBVaGC）发生中的相关性。方法 选用41例EBVaGC组织、62例EBV阴性胃癌（EBV-negative gastric carcinoma, EBVnGC）组织以及64例健康人群血标本作为研究对象,采用PCR结合限制性长度多态性分析（reaction-restriction fragment length polymorphism, RFLP)技术检测TLR3c.1377 和TLR4 Asp299Gly基因多态性,并对实验结果进行统计分析。结果 （1）胃癌组与对照组比较TLR3c.1377基因型频率差异有统计学意义（P=0.025）,胃癌组T等位基因频率明显高于对照组（45.6% vs. 29.7%,P=0.004),T等位基因携带者的患病风险明显高于非携带者(OR=2.435,P=0.008）;（2）EBVaGC、EBVnGC以及对照组间TLR3c.1377基因型、等位基因频率差异无统计学意义（P>0.05）。（3）EBVaGC组,EBVnGC组以及正常对照组所有个体TLR4 Asp299Gly基因型均为Asp/Asp纯合子（P>0.05）。结论 TLR3c.1377基因多态性与胃癌易感性有关,T等位基因为胃癌的危险因子,而C等位基因为一保护基因;TLR3c.1377基因多态性与EBVaGC易感性无明显相关。     

超声评估妊娠期高血压疾病对晚孕期母胎心功能及胎儿生长发育的影响

目的使用超声参数较为全面、系统的评估妊娠期高血压疾病母胎心功能及胎儿生长发育,为母胎一体化管理提供有价值的信息。方法选取孕周28~41+6周的孕妇150例,妊娠期高血压疾病孕妇60例为疾病组,与其孕龄匹配且血压正常的孕妇90例为对照组。测量的超声参数:(1)孕妇LVDd、LAD、IVSTd、LVPWTd、LVEF、二尖瓣环运动速度的Ea/Aa值。(2)胎儿右心室Tei指数。(3)胎儿BPD、HC、AC、FL。结果疾病组孕妇LVDd、LAD、IVSTd、LVPWTd均较对照组增高(P<0.05),疾病组孕妇舒张功能减低者较对照组增多(P<0.05),疾病组胎儿右心室Tei指数较对照组增高(P<0.05),与孕妇血压呈正相关(P<0.05),疾病组胎儿BDP、HC、AC、FL均较对照组减小(P<0.05)。结论通过对妊娠期高血压疾病孕妇母胎心功能及胎儿生长发育超声参数的研究,可对妊娠期高血压疾病母胎情况进行监测。     

EBV感染上皮细胞机制的研究进展

近年来发现EBV与多种上皮细胞恶性肿瘤的发生密切相关，探讨EBV感染上皮细胞的机制对预防和治疗EBV相关疾病有重要意义。本文就EBV感染上皮细胞的可能机制作一综述。     

原发性卵巢癌p15 mRNA及其蛋白的表达

①目的　检测原发性卵巢癌中p15mRNA及其蛋白的表达 ,以探讨该基因在原发性卵巢癌发生发展过程中的作用。②方法　应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)以及免疫组化方法 ,对 4 8例原发性卵巢癌以及 15例正常卵巢组织中 p15mRNA及其蛋白的表达进行检测。 ③结果　原发性卵巢癌中 p15mRNA及其蛋白的表达与正常卵巢组织比较差异有显著性 (χ2 =4 .16、5 .11,P <0 .0 5 )。p15mRNA及其蛋白表达与卵巢癌组织学类型相关 (χ2 =5 .5 9、7.30 ,P <0 .0 5 ) ,与其FIGO分期及组织学分级无关 (χ2 =1.13～ 2 .0 9,P >0 .0 5 )。④结论　原发性卵巢癌中p15mRNA及其蛋白表达异常 ,提示该基因的失活与原发性卵巢癌的发生有关。