造血干细胞及相关细胞因子

血液中的血细胞均来自造血干细胞,它独特的生物学特点为许多疾病的治疗开辟了新的途径,HSC的增殖、存活及定向分化受到多种因子的调控。如何在体外通过各种方法大量扩增造血干/祖细胞,又保持其体内造血重建能力显得尤为重要。     

LIF基因在COS-7细胞中的表达及活性研究

目的人白血病抑制因子(LIF)基囚在COS-7细胞中进行瞬时表达,检测表达产物对HL-60白血病细胞的作用。方法用脂质体转染法将pcDNA3．0-LIF真核表达质粒导入COS-7细胞,通过形态学观察、MTT、FCM法研究COS-7细胞表达产物对HL-60细胞的影响。结果人LIF基因可在COS-7细胞中进行有效表达,表达产物对HL-60白血病细胞具有抑制生长和诱导凋亡的作用。结论人LIF基囚在COS-7细胞中能有效表达,表达产物具有较强的抑制白血病细胞生长,诱导细胞凋亡的作用。     

利培酮和齐拉西酮对精神分裂症病人血浆CK影响

目的观察精神分裂症病人血浆细胞因子（CK）水平的变化,探讨利培酮和齐拉西酮对病人CK水平的影响。方法采用酶联免疫吸附法,检测50例精神分裂症病人治疗前后白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,以50名健康人作为对照。结果治疗前后利培酮和齐拉西酮组IL-2、IL-6和TNF-α的水平均高于正常对照组,差异有显著性（F=74.73-140.53,q=14.72-45.06,P〈0.01）;经利培酮及齐拉西酮治疗8周后,IL-2、IL-6和TNF-a水平均明显降低,与治疗前比较差异有显著意义（t=3.34-19.43,P〈0.01）。结论精神分裂症存在CK介导的免疫功能障碍,利培酮和齐拉西酮对CK具有调节作用。     

人胶质细胞源性神经营养因子(hGDNF)成熟肽基因的克隆及原核表达

目的分离人胶质细胞源性神经营养因子(hGDNF)成熟肽基因，并在E．coil中获得表达。方法以人的白细胞基因组DNA为模板，合成特异引物，采用PCR技术分离得到hGDNF成熟肽基因，并构建表达载体pET-21a( )-hGDNF，转化大肠杆菌BL21(DE3)，分别用IPTG和乳糖诱导表达，SDS-PAGE电泳检测hGDNF蛋白表达。结果PCR扩增出了400bp的DNA片段，构建的表达载体pET-21a( )-hGDNF经酶切、PCR鉴定均出现400bp左右的条带，测序结果正确，用IPTG或乳糖诱导转化菌均有15kd大小的目的条带，表达的目的蛋白占菌体总蛋白30％以上，以包涵体形式存在。结论克隆得到人GDNF成熟肽基因并在大肠杆菌中得到了高效表达。     

应用流式细胞术分析CIK细胞胞内Th1/Th2细胞因子

目的：建立细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)体外扩增的方法,并从单细胞水平分析CIK细胞的胞内Th1／Th2类因子产生的情况,进一步明确CIK细胞的免疫学特性及其参与的免疫效应机制。方法：取健康人外周血单个核细胞(PBMC),按一定的时间顺序分别加入IFN-γ、IL-2和CD3单抗,体外扩增CIK细胞,再应用流式细胞术,经刺激、阻断、固定、穿透和标记等过程测定CIK细胞内细胞因子IFN-γ和IL-4水平。结果：外周血单个核细胞加细胞因子培养两周后CD3^ CD56^ 增加,培养至第21天、28天未见明显下降;诱导后CD3^ CD8^ 细胞量与CD3^ CD4^ 量相比明显增多;单细胞胞内细胞因子测定显示扩增后的CIK细胞Th1／Th2因子状态明显向Th1偏移。结论：采用多种因子组合刺激外周血单个核细胞,可大量诱导出CD3^ CD56^ 双阳性细胞,具高度增殖性,是一类新型的免疫过继疗法细胞;其偏移的Th1／Th2因子状态可作为解释其极强的细胞毒作用的理论依据。     

NKCF检测在疾病诊断中的应用

报告用MIT比色法观察了恶性肿瘤、SLE、哮喘等疾病患者的NKCF活性,并与经PHA刺激的淋巴细胞~3H—TdR 掺入量(cpm)和刺激指数(SI)对比。结果;(1)三类恶性肿瘤患者的NKCF 活性比正常值明显降低,而他们的淋巴细胞cpm 和SI 则与正常值无显著差异;(2)SLE 组NKCF 活性显著下降,而淋巴细胞cpm 和SI 有所上升;(3)哮喘患者的NKCF 活性无明显改变,而淋巴细胞cpm 和SI 升高。结果表明,NKCF 活性检测对恶性肿瘤和SLE 有辅助诊断价值。     

再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞生长的影响

目的 研究再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞生长的影响。方法 采用静置贴壁培养法在再生丝素膜上体外培养鼠胚真皮层成纤维细胞，并用活细胞计数法及MTT比色法观察再生丝素膜对细胞的形态、功能和生长的影响。结果 再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞的贴壁能力和形态及其代谢功能未见明显改变，也未见明显毒性，并能支持细胞正常生长，呈现正常的生长繁殖曲线。结论 再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞具有良好的细胞相容性。     

pcDNA3.0/mbcl-2α真核表达载体的构建及其在L929细胞中的表达与实验研究

目的 构建重组真核表达载体pcDNA3．0／mbcl-2α，并在L929细胞中稳定表达，研究mbcl-2α基因表达对L929细胞生物学行为的影响。方法 用PCR法从含mbcl-2α基因的载体pORF-mbcl-2α获得目的基因片段，正向克隆入真核表达质粒pcDNA3．0中。pcDNA3．0／mbcl-2α以脂质体法转染L929细胞，经G418加压筛选，获得阳性单克隆细胞，用RT-PCR检测克隆细胞中mbcl-2α基因的转录，细胞免疫组化染色法检测蛋白表达。台盼兰拒染法进行活细胞计数，判定细胞增殖速率；MTT比色法测定化疗药物阿霉素对细胞生长的抑制率，并分析药物敏感性。结果 构建了重组真核表达载体pcDNA3．0／mbcl-2α，并在L929细胞中稳定表达，获得了可稳定表达mbcl-2α基因的L929细胞株。L929细胞转mbcl-2α基因后，其增殖速率高于对照组，而药物敏感性低于对照组。结论 pcDNA3．0／mbcl-2α在L929细胞中可稳定表达，对L929细胞的增殖和药物敏感性均具有一定的影响，为进一步研究mbcl-2α基因的生物学功能奠定了基础。     

rhIL-24刺激PBMC产生IFN-γ、IL-6的初步研究

目的 研究重组人白细胞介素24(rhlL-24)对外周血单个核细胞产生γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素6(IL-6)的刺激效应。方法 正常人的外周血单个核细胞(PBMC)经含有rhlL-24的CHO细胞表达上清刺激48 h、72 h,取其刺激PBMC培养上清液用酶联免疫吸附试验((ELISA)法测定IFN-γ和IL-6含量。结果 加含rhlL-24的CHO细胞表达上清的实验组上清中IFN-γ和IL-6含量明显高于对照组(P<0.01)。结论 rhlL-24对外周血单个核细胞分泌IFN-γ和IL-6具有刺激效应,说明rhlL-24具有明显的免疫调节功能。导师。     

CTLL-2的液氮冻存

小鼠淋巴瘤细胞系CTLL-2,必须依赖白细胞介素2(IL-2)才能生长,因此国内外许多实验室常以该细胞增殖的程序作为检测IL-2活性的指标。大家公认该方法具有灵敏度高、重复性好等优点。但是CTLL-2难以在液氮中冻存,因此实验室需长期不间断地进行传代培养,这不仅增加工了作量,而且细菌污染和细胞变异的机会也增多,给实验工作带来了困难。为了解决这个问题,我们对CTLL—2的液氮冻存作了一些探索,初步获得成功。