基因治疗中非病毒载体的基因导入方法

随着基因治疗研究的深入,人们发现,基因治疗的关键是选择恰当的载体及导入方法,使目的基因获得靶向性导入,稳定有效的表达,可控性增强。目前用于基因治疗的载体有两种:病毒载体和非病毒载体。虽然基因治疗的临床实验研究多采用病毒载体,但是不同的病毒载体由于各自存在许多不足     

裂瘤型腺病毒Ad-E1A对小鼠腹水型肝癌的基因治疗及免疫功能影响

目的研究裂瘤型腺病毒Ad-E1A对BALB/c小鼠腹水型肝癌的基因治疗效果,并检测其对免疫功能的影响。方法将Ad-E1A进行多轮扩增获得高效价病毒子,采用RT-PCR法鉴定E1A基因在小鼠肝癌H22细胞内的转录。将BALB/c小鼠分为非致瘤组（正常组）和皮下注射H22细胞转移瘤的致瘤组,其中致瘤组又分为PBS组、Ad-E1A组、5-Fu组进行抗肿瘤试验,检测各组的抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数、白细胞总数等。结果获得了达7×109pfu/ml的高滴度Ad-E1A。致瘤组的抗肿瘤试验中,Ad-E1A组与5-Fu组的抑瘤率分别为66.7%和68.8%,二者差异无统计学意义（P〉0.05）;Ad-E1A组和PBS组间的胸腺指数和脾脏指数变化无统计学意义,而5-Fu组显著降低（P〈0.01和P〈0.05）;同时Ad-E1A组和PBS组间的白细胞总数变化不大,但5-Fu组显著降低（P〈0.01）,其中中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞均明显降低（P〈0.05）。结论 Ad-E1A可以抑制小鼠腹水型肝癌的生长,且对小鼠的免疫功能未见明显毒副作用。     

rhIL-24刺激PBMC产生IFN-γ、IL-6的初步研究

目的 研究重组人白细胞介素24(rhlL-24)对外周血单个核细胞产生γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素6(IL-6)的刺激效应。方法 正常人的外周血单个核细胞(PBMC)经含有rhlL-24的CHO细胞表达上清刺激48 h、72 h,取其刺激PBMC培养上清液用酶联免疫吸附试验((ELISA)法测定IFN-γ和IL-6含量。结果 加含rhlL-24的CHO细胞表达上清的实验组上清中IFN-γ和IL-6含量明显高于对照组(P<0.01)。结论 rhlL-24对外周血单个核细胞分泌IFN-γ和IL-6具有刺激效应,说明rhlL-24具有明显的免疫调节功能。导师。     

抑癌基因PTEN的研究新进展

PTEN是一种抑癌基因,与细胞骨架张力蛋白同源,其产物具有双磷酸酶活性——蛋白磷酸酶活性和脂质磷酸酶活性,是至今为止发现的第一个具有双磷酸酶活性的抑癌基因,结合到质膜上的PTEN可通过PIP,等途径来调节细胞信号转导和生长,并在肿瘤细胞浸润、血管发生以及肿瘤转移中起到一定的作用。     

LIF基因修饰的ECV-304细胞对脐血造血细胞体外培养的影响

目的 观察经LIF基因修饰的ECV-304细胞对脐血造血干/祖细胞(HSC/HPC)体外培养的影响.方法 用脂质体转染法将pcDNA3.0-LIF真核表达质粒导入ECV-304人脐静脉内皮细胞,并通过G418筛选获得能稳定表达LIF的ECV-304转基因细胞.用LIF基因修饰的ECV-304细胞与脐血CD34 细胞共培养,检测培养前后CD54 细胞、CD34 CD54 细胞和CD34 CD62L 细胞数量的变化,观察转LIF基因的ECV-304细胞对脐血造血细胞的影响.结果 成功获得经LIF基因修饰的ECV-304转基因细胞,该细胞能支持脐血CD34 细胞的扩增,且能维持细胞表面与归巢有关的黏附分子的表达, 培养后CD34 CD54 和CD34 CD62L 细胞亚群数量显著增加.结论 经LIF基因修饰的ECV-304细胞可改善脐血造血细胞体外培养的微环境,有助于抑制HSC/HPC的分化并保持其归巢能力.     

Ad-IL-24联合DDP对A549细胞体外生长的影响

目的探讨白细胞介素24基因腺病毒载体（Ad-IL-24）联合顺铂体外对人肺腺癌的抑制效应及诱导人肺腺癌的细胞凋亡机制。方法用Ad-IL-24、DDP、Ad-IL-24联合DDP分别体外作用于A549细胞12h、24h、48h,采用CCK8法及流式细胞术（FCM）分别检测细胞增殖抑制率和细胞凋亡率。结果 Ad-IL-24作用于A549细胞48h后细胞增殖抑制率为27.7%,Ad-IL-24联合DDP作用于A549细胞48h后细胞增殖抑制率为45.2%;Ad-IL-24作用于A549细胞48h细胞凋亡率为22.9%,联合用药后细胞凋亡率为35.9%。结论 Ad-IL-24对A549细胞具有生长抑制作用,能引起A549细胞凋亡,联合DDP用药后效果更佳,Ad-IL-24具有化疗增敏效应。     

人白细胞介素-24基因的克隆及序列测定

目的克隆人白细胞介素-24(hIL-24)基因，以供重组表达。方法利用自行设计合成的一对引物，采用RT-PCR技术从LPS活化的人外周血单个核细胞的总RNA中分离hIL-24cDNA并重组到pUCl9载体上，进行酶切鉴定和DNA序列测定。结果PCR及酶切产物电泳结果均证明所克隆的基因为621bp。经序列测定证实所克隆的hIL-24与GenBank报道的结果完全一致。结论该基因系国内首次获得并经序列测定证实的hIL-24cDNA基因。这为进一步在真核或大肠杆菌中高效表达有活性的重组hIL-24，更深入地研究其作用机制以及临床应用奠定了坚实的基础。     

抗幽门螺杆菌尿素酶B单抗对人血小板聚集与活化的影响及其机制研究

目的研究抗幽门螺杆菌尿素酶B（Hp ureB）单克隆抗体（1F11）对二磷酸腺苷（ADP）诱导的人血小板聚集与活化的影响及其机制。方法采用Western blot分析血小板膜糖蛋白（GP）成分与1Fll的相关性，采用比浊法检测血小板聚集情况，分别用双抗夹心、抗原竞争的酶联免疫测定法检测各组血浆中的P-选择素、血栓烷B2。通过流式细胞术（FCM）分析单抗1F11与SZ21单抗对血小板GPⅢa的竞争性。结果1F11与血小板成分GPⅢa有一定程度结合，1F11单抗可明显抑制ADP诱导的人血小板的聚集，随着1F11浓度的增加，血小板聚集抑制率呈剂量依赖性增高，但1F11并不抑制血浆中P-选择素、血栓烷B2的水平。FCM结果显示：加单抗1F11后可使FITC—SZ21单抗与血小板结合的阳性细胞率从99．5％降至77．4％。，结论1F11可与人血小板GPⅢa结合并抑制血小板聚集，但不能阻止血小板的活化过程。HpureB与人血小板GPma具有交叉识别的抗原表位。提示幽门螺杆菌可能与ITP发病有关。     

基因工程人干扰素—α2a抗柯萨奇病毒的实验研究

采用微量细胞病变抑制法在Ｗｉｓｈ细胞上研究了ＩＮＦ－α２ａ抗柯萨奇病毒的作用。