泡球蚴病患者血清中Th1/Th2型细胞因子水平的观察

近年来研究发现,Th1和Th2细胞产生的细胞因子在病程转归中具有重要作用,可反映宿主机体内免疫应答的反应类型。本文对泡球蚴病(AE)患者血清中的各种细胞因子进行了检测,以了解Th1/Th2型细胞因子在AE患者细胞免疫调节中的作用及临床意义。     

日本血吸虫混合DNA疫苗pBK-CMV-Sj26/Sj32诱导小鼠的免疫应答

目的　观察含日本血吸虫候选疫苗分子谷胱甘肽S -转移酶 (Sj2 6 )和天冬酰胺肽链酶 (Sj32 )的真核载体 pBK-CMV -Sj2 6 /Sj32诱导小鼠的免疫应答情况。 方法　将质粒按 5 0 μg/只在 0w ,3w ,5w免疫小鼠股四头肌 ,第一次免疫后取小鼠脾细胞作T淋巴细胞转化实验 ;在 0w、3w和 6w经小鼠尾静脉取血 ,ELISA检测血清中抗体效价及阳性反应率。结果　淋巴细胞转化实验示血吸虫成虫抗原能特异性刺激免疫鼠脾细胞 ;第一次免疫后特异性抗体效价开始升高。抗体最高效价为 1∶2 0 ,3次免疫后有 91.7%小鼠血清呈阳性反应。结论　真核载体 pBK -CMV -Sj2 6 /Sj32可诱导小鼠体液及细胞免疫应答     

日本血吸虫Sj14FABP与细胞因子IL-12重组质粒的构建和表达

目的　构建日本血吸虫 14kDa脂肪酸结合蛋白 (Sj14FABP)和细胞因子IL 12共表达质粒 ,并观察其能否在小鼠体内获得表达。方法　TRIzol试剂提取日本血吸虫成虫总RNA ,采用RT PCR方法逆转录Sj14FABP编码基因序列 ,经过双酶切后定向克隆到载体pVIVO2 IL12中 ,通过PCR、酶切及测序进行鉴定。大量制备重组质粒 pVIVO2 IL12 Sj14FABP并免疫BALB/c小鼠 ,取注射部位肌肉组织进行间接免疫荧光试验。结果　RT PCR扩增出一条大小为 4 4 0bp的片段 ;经PCR、酶切及测序鉴定表明所构建的重组质粒中含有Sj14FABP基因 ;间接免疫荧光试验结果为阳性。 结论　本试验成功构建重组质粒 pVIVO2 IL12 Sj14FABP ,并在小鼠体内获得表达。     

日本血吸虫双价DNA疫苗肌肉刺激和全身过敏试验

目的观察日本血吸虫双价DNA疫苗对家兔肌肉注射所产生的刺激反应和豚鼠的全身过敏反应,评价其安全性。方法家兔4只,雌雄各半,采用自身对照,左侧股四头肌注射日本血吸虫双价DNA疫苗,右侧注射生理盐水,观察注射部位肌肉的刺激反应,并进行病理组织学检查;豚鼠24只,随机分为4组,日本血吸虫双价DNA疫苗组（致敏剂量0.5mg/只,激发剂量1mg/只）、空白质粒对照组（致敏剂量0.5mg/只,激发剂量1mg/只）、生理盐水对照组和10%人血白蛋白阳性对照组,进行全身过敏试验。结果日本血吸虫双价DNA疫苗对家兔肌肉局部刺激仅见注射部位轻度充血,未发现肌肉组织的变性和坏死;对豚鼠无过敏反应发生,10%人血白蛋白阳性对照组出现明显的过敏反应。结论日本血吸虫双价DNA疫苗对家兔肌肉无刺激作用,对豚鼠也无过敏反应,预期临床应用安全。     

日本血吸虫双价DNA疫苗pVIVO2-Sj14-Sj23免疫方案的研究

目的研究双价DNA疫苗pVIVO2-Sj14-Sj23在不同免疫剂量、免疫次数、免疫有效时间及不同免疫途径的最佳免疫方案。方法构建和制备双价DNA疫苗pVIVO2-Sj14-Sj23;110只雄性BALB/c小鼠随机分成11组,每组10只,按照四因素三水平分成2个对照组和9个实验组。各组统一在末次免疫后30d每鼠感染(40±2)条日本血吸虫尾蚴,感染后45d剖杀,计数成虫虫荷。结果双价DNA疫苗9个实验组获得40.14%～62.68%的减虫率。通过SPSS12.0进行正交设计的统计分析:F值0.05。免疫剂量,免疫次数,免疫途径和免疫有效时间几个因素间差异无统计学意义。结论实验结果提示该疫苗的较好免疫方案为:50μg/只,免疫2次,采取皮内注射,免疫有效时间至少为12周。     

日本血吸虫成虫RNA的快速分离纯化

应用异硫氨酸胍-酚-氯访一步法提取日本血吸虫总RNA，在1h左右即可提取纯度高、完整性较好的RNA。该方法简单易行，既经济又省时，对来源不易的少量组织尤为有效。通过对血吸虫成虫RNA变性琼脂糖凝胶电泳，观察到日本血吸虫大亚基rRNA存在体内缺口现象，随核糖体小亚基RNA一道电泳迁移。     

日本血吸虫表皮膜蛋白的研究 Ⅱ.生化及免疫活性分析

日本血吸虫表皮膜蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后至少显示19个蛋白带,其中3条蛋白带含醣,分子量分别为24KD、17.5KD和15KD。用免疫印班技术能检出与日本血吸虫病人血清反应的表皮膜抗原组分,其分子量分别为125KD、100KD和57KD     

紫外线减毒尾蚴免疫水牛抗日本血吸虫感染的实验研究

耕牛是农村主要劳动力,在血吸虫病流行区病牛达220万头,是血吸虫病主要传播来源。近年来,减毒疫苗预防血吸虫感染的研究取得很大进展。国内我们首次采用紫外线(400μW)照射日本血吸虫尾蚴经皮肤免疫水牛3次,每次10000条/头,每次间隔4周,所有实验组和对照组动物于末次免疫后6周均以1000条正常日本血吸虫尾蚴攻击感染或感染,所有水牛在攻击感染后6周被处死,检查免疫后水牛抗感染的保护     

日本血吸虫成虫表皮膜蛋白的研究——Ⅲ.ELISA法在疗效考核中的价值

用吡喹酮(100mg/kg)治疗感染日本血吸虫42d后的家兔,1周后用相同剂量的吡喹酮重复治疗1次。用成虫表皮膜抗原-酶联免疫吸附试验(TA-ELISA)和虫卵可溶性抗原-酶联免疫吸附试验(SEA-ELISA)分别检测治愈后的家兔血清中特异性IgG下降水平。结果发现家兔血清中抗TA的特异性IgG在治愈后5个月降至正常水平(OD 492nm<0.2),而抗SEA的特异性IgG仍维持在一个较高的水平(ODx=0.57),二者相比,差异有显著性意义,提示疗效考核时,TA-ELISA法优于SEA-ELISA法。