表皮葡萄球菌生物被膜形成相关icaC敲除突变株的构建及其表型的改变

目的构建表皮葡萄球菌脚阴性突变株，以期获得仅icaC基因不同而其他遗传背景与表皮葡萄球菌1457株相同的突变株，对脚基因产物在细菌形成生物被膜中的作用进行研究。方法构建同源重组质粒pBT2-△icaC，经金黄色葡萄球菌RN4220株修饰后电转化入表皮葡萄球菌1457株。将含重组质粒的表皮葡萄球菌1457株在40℃多次传代，筛选出icaC敲除突变株（△icaC株）。检测△icaC以株生长曲线，采用微量板半定量法检测细菌生物被膜的形成能力，并采用斑点免疫印迹法检测细菌多糖黏附因子的合成。结果使用同源重组法敲除表皮葡萄球菌1457株基因组中的脚基因，△icaC株的生长曲线与表皮葡萄球菌1457株相似，但生物被膜形成能力及细胞外多糖黏附因子含量显著降低。结论表皮葡萄球菌1457株中脚基因的缺失对细菌生长无明显影响，但显著降低细胞外多糖黏附因子含量及生物被膜形成能力，为进一步研究表皮葡萄球菌脚基因在生物被膜形成中的作用奠定基础。     

trap基因表达在表皮葡萄球菌生物膜形成及附属基因调节(agr)系统活化中的作用

目的研究表皮葡萄球菌trap基因表达与生物膜形成的相关性及其对agr系统的活化作用。方法采用微量板半定量法检测表皮葡萄球菌生物膜表型，二维电泳和高灵敏度的基质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析比较表皮葡萄球菌标准株蛋白质表达谱，实时定量逆转录PCR检测trap基因和RNAⅢ的转录水平，CLUSTALX对表皮葡萄球菌trap基因与金黄色葡萄球菌序列进行分析，Mega软件构建进化树。结果比较分析形成生物膜的表皮葡萄球菌ATCC 35984株与不形成生物膜的ATCC 12228株生长中期的蛋白质组，发现ATCC 35984株的TRAP蛋白量明显高于ATCC 12228株。转录水平的检测显示ATCC 12228株和生物膜阳性临床SE1457、SE671株的trap基因均低转录，但RNAⅢ的转录水平未降低。SE1457株agr系统突变后，RNAⅢ的转录明显降低，trap基因的转录无变化。RNAⅢ的转录随细菌生长变化而增加，trap基因转录保持不变。trap序列分析显示其在表皮葡萄球菌与金黄色葡萄球菌中较为保守，但存在明显的进化距离。结论在本论文所研究的表皮葡萄球菌菌株中，trap基因的转录和翻译与细菌生物膜的形成不存在直接的调控相关性；并提示TRAP蛋白不是表皮葡萄球菌agr系统活化所必需的细菌产物；表皮葡萄球菌trap基因序列与金黄色葡萄球菌之间存在差异，可能与其功能差异相关。     

金黄色葡萄球菌临床分离株生物膜及ica操纵子检测

近年来,随着多种插管、透析技术及生物材料的广泛应用,以及人口老龄化及免疫力低下人群增加,形成生物膜的细菌感染迅速增加.金黄色葡萄球菌是临床上分离的常见细菌,可造成多种感染,既可引起社区感染又可造成医院感染,是医院感染的主要病原菌.     

新生儿重症监护病房多重耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶的基因型

目的 了解新生儿重症监护病房内多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性及其β-内酰胺酶基因携带情况.为控制医院感染及合理用药提供依据.方法 收集本院新生儿重症监护病房分离出的26株多重耐药鲍曼不动杆菌,采用琼脂稀释法检测其对抗菌药物的最低抑菌浓度,聚合酶链反应技术检测多重耐药鲍曼不动杆菌菌株β-内酰胺酶基因携带情况.结果 26株多重耐药鲍曼不动杆菌临床分离菌株对头孢他啶、头孢西丁、哌拉西林一他唑巴坦及环丙沙星耐药率100.0%,对其余抗菌药物耐药率为80.8%～96.2%.26株测试菌株中oxa-51均为阳性,20株(77%)oxa-23阳性,14株(54%)ampC阳性,11株(42%)oxa-23和ampC同时阳性.未检出携带oxa-24、oxa-58、imp-1、imp-4和vim-2基因的菌株.结论 鲍曼不动杆菌的耐药性严重,oxa-23和ampC是本院新生儿重症监护病房内多重耐药鲍曼不动杆菌携带的主要β-内酰胺酶基因.

Abstract：

Objective To investigate the correlation between drug resistance and β-actamase genes of multi-drug resistance Acinetobacter baumannii (MDR-AB) in neonatal intensive care unit to provide evidence for rational antibiotics administration and nosocomial infection control.Methods Twenty-six MDR-AB strains were separated and collected from clinical specimens.The minimum inhibitory concentrations of 13 antimicrobial agents were determined by agar dilution method.Genotypes of β-lactamase were detected by polymerase chain reaction.Results The resistant rates of the 26 strains to Ceftazidime,Cefoxitin,Piperacillin-tazobactam and Ciprofloxacin were 100.0%.About 80.8% to 96.2% of these strains were resistant to the other antimicrobial drugs.Among the 26 MDR-AB strains,100% (26/26) strains possessed oxa-51,77% (20/26) possessed oxa-23 gene,54% (14/26) carried arnpC gene,both oxa-23 and ampC were identified in 42% (11/26) strains,while oxa-24,oxa-58,imp-1,imp-4 and vim-2 gene were not identified.Conclusions The drug resistance of Acinetobacter baumannii is serious,oxa-23 and ampC are the major plactamase genes carried by MDR-AB in neonatal intensive care unit.     

重组质粒DNA—抗原—抗体复合物诱生乙型肝炎表面抗体的研究

本文研究了高编码乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）基因的重组质粒ＤＮＡ（ｐＣＭＶ－ＨＢｓ）对ＨＢｓＡｇ，抗．ＨＢｓ免疫复合物（ＩＣ）诱生抗－ＨＢｓ的影响，在Ｂａｌｂ／ｃ小鼠中，ＩＣ加ｐＣＭＶ－ＨＢｓ（１００μｇ）免疫组比单独使用ＩＣ或ｐＣＭＶ－ＨＢｓＤＮＡ缚诱生的抗－ＨＢｓ效价高，虽然略低于ＩＣ加氢氧化铝组，但无明显差异，在ＩＣ中加２０μｇｐＣＭＶ－ＨＢｓＤＮＡ，经再次免疫亦可有效地诱生高效价的抗     

地塞米松对体外循环诱发犬心、肺、脾及外周血单核细胞TLR-4 mRNA表达的影响

目的探讨地塞米松对体外循环（CPB）诱发犬心、肺、脾及外周血单核细胞（PBMC）Toll样受体-4（TLR-4）mRNA表达的影响。方法健康家犬10只，体重18～24妇，雌雄不拘，随机分为对照（C）组和地塞米松（D）组，每组5只。麻醉诱导前即刻D组静脉注射地塞米松1mg／kg，C组给予等量生理盐水，麻醉诱导后建立CPB，测定CPB前、CPB 1h、CPB 2h、停CPB后30min、停CPB后2h时心、肺、脾、PBMC中TLR-4、TNF-α、热休克蛋白（HSP-70）mRNA表达及血浆一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）浓度。结果CPB可诱发心、肺、脾及PBMC中TLR-4、HSP-70、TNF—α mRNA表达及血浆NO、MDA浓度增加；地塞米松预先给药可减弱CPB诱发的上述改变（脾除外）（P〈0．05）。结论地塞米松预先给药可减弱CPB诱发犬的全身炎性反应，与下调TLR-4 mRNA表达有关。     

质粒DNA促进HBsAg—抗HBs复合型疫苗诱生的免疫应 …

目的 研究ＨＢｓＡｇ－抗ＨＢｓ－质料ＤＮＡ复合型疫苗的免疫原性及其诱生细胞免疫应答的类型。方法 分别以ＨＢｓＡｇ、ＨＢｓＡｇ－抗－ＨＢｓ（ＩＣ）、ｐＩ／ＡｍｐＨＢｓ、ＩＣ－ｐＩ／ＡｍｐＨＢｓ及ＩＣ－ｐＩ／Ａｍｐ免疫小鼠，检测抗－ＨＢｓ的效价，分析抗－ＨＢｓ ＩｇＧ亚类（ＥＬＩＳＡ）；取免疫小鼠脾细胞，体外抗原刺激，用竞争性ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＩＦＮ－γ及ＩＬ－４ ｍＲＮＡ转录水平。结果 ＩＣ－ｐＩ     

异氟醚对肝脏部分切除术病人肺泡巨噬细胞促炎性细胞因子mRNA表达的影响

目的 观察异氟醚麻醉中人肺泡巨噬细胞IL-8、IL-1β基因表达的变化,以探讨异氟醚对肺炎性反应的影响。方法24例肝脏部分切除手术病人随机分为异氟醚全麻观察组（n=12）和硬膜外+全麻对照组（n=12）。两组病人均快速诱导,气管内插管,麻醉维持用药均包括异丙酚4～6mg·kg-1·h-1、芬太尼和维库溴铵。观察组吸入异氟醚,使呼气末异氟醚浓度保持在1.0％,对照组在诱导后经硬膜外注入1.0％利多卡因+0.2％丁卡因混合液5ml/h。在气管插管后即刻和4h用纤维支气管镜进行支气管肺泡灌洗,从灌洗液中收获肺泡巨噬细胞提取RNA,逆转录合成cDNA,PCR后电泳扫描求积,检测肺泡巨噬细胞IL-8、IL-1βmRNA的表达。结果 麻醉维持4h后比气管插管后即刻IL8-、IL-1βmRNA的表达增加,观察组比对照组IL-8、IL-1βmRNA的表达更强（P<0.05）。结论 异氟醚能增强肝脏部分切除病人肺泡巨噬细胞促炎性细胞因子mRNA的表达,即在转录水平上,异氟醚能增强肺部的炎性反应。     

福氏志贺菌喹诺酮类耐药临床分离株gyrA和parC的基因突变

目的检测福氏志贺菌喹诺酮类耐药临床分离株DNA旋转酶gyrA和拓扑异构酶ⅣparC基因的突变情况，探讨GyrA和ParC氨基酸改变与喹诺酮类耐药的相关性。方法根据药敏实验结果选取47株福氏志贺菌临床分离菌，对其gyrA、parC喹诺酮耐药决定区（QRDR）进行聚合酶链反应（PCR）扩增和测序分析，并采用SAS（V8．2）软件分析GyrA和ParC改变和喹诺酮类耐药性的关联程度。结果44株喹诺酮类耐药菌在gyrA、parC基因QRDR均发生有义突变，gyrA83位密码子突变（TCG→TTG）最为常见．存在于43株耐药菌。混合模型分析结果显示GyrA83位、ParC80位氨基酸改变与萘啶酸的耐药性密切相关（P〈0．01，R^2=0．999），GyrA83、87位氨基酸改变与环丙沙星的耐药性密切相关（P〈0．05，R^2=0．872）。结论GyrA Ser83→Leu突变是导致福氏志贺菌临床株对喹诺酮类耐药的关键突变，此单位点突变即可介导福氏志贺菌对萘啶酸的耐药，但对环丙沙星耐药需同时存在GyrA和／或ParC多个位点突变或其他耐药机制。     

乙肝病毒核心抗原DNA疫苗诱导小鼠抗原特异性CD8+T细胞动态变化和动态分布

目的：研究乙肝病毒核心抗原(HBcAg)DNA疫苗诱导的细胞免疫应答。方法：用表达乙肝病毒核心抗原N端144个氨基酸的重组质粒DNA(简称pHBc144)100ug免疫C57BL／6小鼠，用细胞内细胞因子染色技术检测小鼠体内抗原特异性CD8^ T细胞的动态变化。结果：pHBc144免疫后抗原特异性CD8^ T细胞逐渐增多，在初次免疫的第14天出现第一个免疫应答高峰，此后抗原特异性CD8^ T细胞数量逐渐下降进入免疫记忆期并在1年内维持在稳定水平。加强免疫后在第10天抗原特异性CD8^ T细胞数量达到高峰，约是初次免疫应答高峰的2倍，此后抗原特异性CD8^ T细胞数量逐渐下降，但下降的速度比初次免疫应答减缓。结论：pHBc144DNA疫苗可诱导有效的细胞免疫应答。