人CD3ζRNAi逆转录病毒载体的构建及鉴定

目的:利用RNAi表达载体法构建并筛选携带针对CD3ζ基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体及稳定产毒的细胞克隆。方法:利用DNA重组技术,设计3条60 bp能转录产生靶向CD3ζ小发卡RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,以pSUPER.retro.neo+gfp质粒作为空载体经限制性核酸内切酶酶切后与RNAi序列进行重组,构建CD3ζ-pSUPER retroRNAi逆转录病毒载体,脂质体法转染包装细胞系PA317,建立产生逆转录病毒的细胞克隆。结果:重组载体经限制性核酸内切酶酶切、PCR和测序鉴定表明CD3ζ-pSUPER retroRNAi重组质粒构建成功;脂质体法将重组载体转染包装细胞系PA317,表达绿色荧光蛋白,表明包装成功。结论:成功地构建了特异性沉默CD3ζ基因的pSUPER retroRNAi逆转录病毒载体及稳定产毒的细胞系,为后续研究CD59与CD3ζ在T细胞内信号转导的相互作用提供理论和实验依据。     

CBP棕榈酰化位点的突变对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生物学行为的影响

背景与目的：Src羧基末端激酶结合蛋白（Csk-binding protein，CBP）是新近发现的通过棕榈酰化位点锚定脂筏，参与多种肿瘤的发生、发展过程的抑制性跨膜接头蛋白。本研究旨在观察棕榈酰化位点异常的CBP对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其相关的分子机制。方法：构建CBP-增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）融合蛋白的慢病毒表达载体，采用反转录病毒转染的方法建立CBP棕榈酰化位点突变的A431细胞系以及CBP过表达的A431细胞系，实验分为4组：空白对照组（Parental组，未进行基因转染的A431细胞）、阴性对照组（Control，A431细胞转染仅含EGFP 阴性对照病毒载体）、阳性（过表达）对照组（WT-CBP，A431细胞转染WT PAG1-EGFP病毒载体）、实验组（Mutant-CBP，A431细胞转染棕榈酰化位点突变的CBP-EGFP病毒载体）。采用流式细胞术（flow cytometry，FCM）检测转染率，并用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测转染后细胞中CBP mRNA表达和蛋白水平，验证转染是否成功。采用流式细胞术检测CBP棕榈酰化位点突变对细胞凋亡的影响；细胞计数试剂盒-8（Cell Counting Kit-8，CCK-8）细胞增殖实验、划痕、transwell迁移及侵袭实验检测CBP棕榈酰化位点突变对A431细胞生长、迁移和侵袭能力的影响；用Western blot检测Csk和Fyn两种下游信号转导分子蛋白水平的变化。结果：建立了稳定的CBP棕榈酰化位点突变A431细胞系和CBP过表达A431细胞系。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况，结果显示，与Control组和Parental组比较WT-CBP组A431细胞的凋亡明显增多，差异有统计学意义（P<0.001）；但Mutant-CBP组A431细胞的凋亡与WT-CBP组相比明显减少，与Control组和Parental组比较差异无统计学意义（P>0.05）。划痕实验结果表明，与Control组和Parental组比较野生型CBP过表达组A431细胞愈合率明显降低（P<0.001），而CBP棕榈酰化位点突变A431细胞愈合率没有明显变化（P＞0.05）。Transwell迁移和侵袭实验结果表明，与Control组和Parental组比较野生型CBP过表达组A431细胞的迁移、侵袭能力明显降低（P<0.001），过表达CBP棕榈酰化位点突变A431细胞的迁移和侵袭能力与WT-CBP组相比明显增高，而与Control组和Parental组相比差异无统计学意义（P>0.05）。Western blot结果表明：WT-CBP组Csk和Fyn蛋白与Parental组和Control组相比表达明显增加（P<0.001），而Mutant-CBP组Csk和Fyn蛋白的相对表达水平与Parental组和Control组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。结论： CBP上调可以抑制A431细胞的增殖，但棕榈酰化位点突变的CBP丧失了发挥抑制细胞增殖的功能。由此可见，棕榈酰化位点突变可影响CBP发挥其抑制细胞增殖的作用。     

航天医学精品课程体系建设的经验与体会

自2000年以来第四军医大学航空航天医学院开展了系统的航天医学课程体系建设,并取得了较好的成绩.从三个方面介绍了航天医学课程体系建设的经验与体会,包括航天医学课程体系的创立与实践,航天医学教学资源的建设与成果,学生创新能力培养的研究与效果等.     

结肠镜下喷洒中药颗粒剂治疗溃疡性结肠炎33例

目的 :观察结肠镜下喷洒中药配方颗粒剂治疗溃疡性结肠炎的疗效。方法 :对33例溃疡性结肠炎内镜直视下喷洒中药配方颗粒剂。结果 :腹泻、腹胀、腹痛、脓血便等症状减轻或消失,92.5%.结论 :内镜下喷中药颗配方颗粒剂治疗溃疡性结肠炎是一种直接、准确、安全、高效的新途径。     

踝关节运动对治疗下肢手术后深静脉血栓形成的机制探讨

目的探究踝关节运动治疗下肢手术后深静脉血栓形成(DVT)的机制。方法选择2015年1月至2016年12月期间的68例患下肢DVT的患者,分为实验组和对照组,每组34例。对照组在手术前、中、后均未使用抗凝剂和止血药并采用常规的护理;实验组在对照组的基础上,进行裸关节运动。对两组患者术前、后腿周经差、腘静脉血管内径和血流速度以及血浆生化指标检测比较分析。结果术前,两组患者大腿和小腿的周经差、腘静脉血管内径和血流速度均无显著差异(P0.05),术后,两组患者的腿周经均显著降低,组间比较,实验组显著的小于对照组(P0.05),实验组和对照组的血管内径和血液流速具有显著的差异(P0.05)。术后,实验组的PAI-1指标显著低于对照组,而t-PA显著的高于对照组(P0.05)。实验组的D-D上调、Fbg下调(P0.05)增。结论踝关节运动可能通过降低纤溶酶原激活物抑制剂,增强纤咨溶活性,从而能预防下肢手术后DVT。     

硒促进体外培养的大鼠皮层神经细胞生长及机理的研究

目的 研究硒对体外神经细胞生长发育的直接影响及可能的作用机理。方法 采用体外新生大鼠皮层神经细胞培养法观察微量元素硒对神经细胞形态学及其表达神经元特异性烯醇化酶（NSE）和神经生长因子（NGF）蛋白的影响。结果 中低浓度的硒能增加体外培养的神经细胞最长突起长度和细胞平均直径；硒能促进体外培养的神经细胞表达NSE蛋白；体外培养的大鼠皮层神经细胞随着培养时间的延长，NGF的表达减弱，与对照组比较，硒能促进神经细胞NGF的表达。结论 硒可能是通过促进、增强NSE、NGF蛋白的表达，进而直接作用于体外培养的神经细胞，促进神经细胞的生长、发育与分化。     

不安腿综合征的脑影像学研究进展

不安腿综合征(RLS)的病因复杂,脑影像学技术的发展及应用为不安腿综合征的病因假说提供了新角度,特别是利用核磁共振和发射性计算机断层扫描技术对该病的脑结构、铁代谢、多巴胺能系统、阿片系统和5羟色胺系统给予数据支持.笔者就RLS脑影像学的最新研究进展进行综述.     

深圳市食物中毒来源金黄色葡萄球菌的分子流行病学分析

目的建立金黄色葡萄球菌(金葡菌)的分子分型技术,研究深圳市食物中毒来源金葡菌的分子流行病学特征。方法对食物中毒事件中食物链的不同环节均采集标本,进行金葡菌分离培养。对所分离菌株同时应用SPA分型及PFGE技术作分子流行病学分析。结果 136起疑似食物中毒事件中有12起能够从食物链不同环节分离到金葡菌,共59株。PFGE将59株金葡菌分为15个型别,在10起食物中毒事件的不同环节中分析到PFGE型别一致的菌株,分辨系数为0.87。SPA分型将59株金葡菌分为10个型别,在12起食物中毒事件中不同环节样品中分析到SPA型别一致的菌株,分辨系数为0.85。结论 PFGE的分辨力高于SPA分型;通过结合流行病学资料分析,12起食物中毒事件中有6起能够通过分子分型方法准确溯源。     

老年脂肪肝患者血清免疫球蛋白和肝纤维化指标水平的临床评价

目的 探讨老年脂肪肝病人血清免疫球蛋白（Ig）水平与肝纤维化的关系。方法 采用免疫散射比浊法检测108例老年脂肪肝患者血清IgA、IgG、IgM含量及采用放射免疫吸附试验（RIA）测定血清透明质酸（HA）、Ⅳ型前胶原肽（IVC）及层黏连蛋白（LN）水平，并分析其相关性。结果 老年脂肪肝患者血清IgA、IgG、IgM含量明显高于对照组（P〈0．01），肝纤维化指标HA、IVC、LN水平明显高于对照组（P〈0．01），而且患者血清IgA、IgG、IgM与HA、IVC、LN之间呈显著正相关（P〈0．01或P〈0．05）。结论 老年脂肪肝有较为明显的肝纤维化倾向。检测其血清IgA、IgG、IgM与HA、IVC、LN含量，对于脂肪肝纤维化的诊断及评估预后具有重要的临床意义。