CD34~＋造血干/祖细胞在转hLIF基因腺病毒载体饲养层细胞中的扩增及其移植SCID小鼠的实验研究

目的:建立转hLIF基因腺病毒载体的饲养层细胞,观察对CD34+造血干/祖细胞的扩增作用,并研究移植辐射损伤模型SCID小鼠的效果.方法:建立转hLIF基因腺病毒载体的饲养层细胞,并用RT-PCR法鉴定目的基因;采用免疫磁珠法分离脐带血CD34+造血干/祖细胞,流式细胞术检测纯度;将CD34+造血干/祖细胞与饲养层细胞共培养,流式细胞术检测各组增殖效果,建立辐射损伤模型SCID小鼠,将扩增后的CD34+造血干/祖细胞经CFDA SE荧光标记后移植入SCID小鼠体内,通过RT-PCR和观察荧光标记细胞来检测小鼠内的人源细胞.结果:建立的转基因饲养层细胞均有绿色荧光,RT-PCR法证实有目的基因表达,免疫磁珠法分离的CD34+造血干/祖细胞纯度可达(95.6±2.58)%,与饲养层细胞共培养后CD34+造血干/祖细胞可扩增13.2倍,表面粘附分子CXCR4和CD54表达量仍较高,移植入SCID小鼠四周后,仍可见带有荧光标记的人源细胞,RT-PCR证明人源基因Alu的存在.结论:建立的转hLIF基因腺病毒载体饲养层细胞可以有效地扩增CD34+造血干/祖细胞,延缓其分化,并且有较高的移植效率和造血活性.     

三种癌细胞对Ad-E1A的敏感程度研究

目的：研究腺病毒介导的E1A基因（Ad-E1A）体外对Hep-2人喉癌细胞、A375人黑色素瘤细胞、SMMC-7721人肝癌细胞的生长抑制作用及敏感程度。方法：RT-PCR鉴定E1A基因的转录;MTT法检测细胞的生长抑制作用;Hoechst染色法检测细胞核形态改变;流式细胞术（FCM）检测细胞周期和细胞凋亡。结果：Ad-E1A在三种癌细胞内均有效表达,在其感染72h和96h后对Hep-2、A375、SMMC-7721细胞的生长抑制率达分别为18.65%和29.95%;33.02%和45.36%;36.32%和54.11%;其中对SMMC-7721细胞的作用最强,FCM 检测发现其凋亡率为36.92%。Hoechst染色表明Ad-E1A诱导肿瘤细胞凋亡,使其呈现典型的核固缩、断裂并出现凋亡小体等核形态改变。结论：Ad-E1A对Hep-2、A375、SMMC-7721三种癌细胞均有生长抑制作用,尤以对SMMC-7721细胞作用最强、A375细胞次之, Hep-2细胞的敏感性相对较低;此外,Ad-E1A还能诱导肿瘤细胞凋亡。     

Ad-ING4诱导人前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的研究腺病毒介导的ING4基因(简称Ad-ING4)体外对人前列腺癌细胞PC-3的生长抑制作用。方法将携有绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒空载体Ad(简称Ad-GFP)及Ad-ING4分别感染PC-3细胞,RT-PCR检测ING4基因的转录;荧光显微镜观察Ad-ING4对PC-3细胞的细胞毒作用;用MTT比色法绘制细胞生长曲线,计算生长抑制率;流式细胞仪(FCM)检测Ad-ING4对细胞凋亡的影响;Hoechst 33258核荧光染色检测细胞凋亡的核形态学变化。结果 RT-PCR显示Ad-ING4能在PC-3细胞内转录;MTT结果提示Ad-ING4感染72 h和96 h后对细胞生长抑制率达39.29%和50.00%;FCM检测Ad-ING4感染细胞72 h后凋亡率为76.19%;核荧光染色结果进一步证明Ad-ING4对PC-3细胞可呈现典型的细胞凋亡核形态学改变。结论 Ad-ING4能够明显抑制PC-3细胞的生长,并诱导细胞凋亡。     

表达抗血管内皮细胞生长因子核酶和白细胞介素24腺病毒载体的构建及其对结肠癌HT-29细胞的毒性作用

肿瘤的发生是一个多基因改变过程,因此,在肿瘤基因治疗过程中,以单一基因为靶点的治疗很难取得显著的抗肿瘤效果.我们构建了同时带有双基因抗血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)发夹状核酶(Rz)和白细胞介素24(interleukin-24,IL-24)的腺病毒载体,并初步观察了其对结肠癌HT-29细胞的毒性作用.     

ING4基因的克隆及其诱导HeLa细胞凋亡的实验研究

 目的：分离小鼠ING4基因并构建真核表达载体pcDNA3.0-ING4, 观察ING4基因转染人宫颈癌HeLa细胞后对细胞凋亡的影响。方法:应用RT-PCR技术从小鼠肝组织中扩增得到ING4cDNA。利用DNA重组技术构建真核表达载体pcDNA3.0-ING4并用双酶切、PCR、基因测序进行鉴定,然后利用阳离子脂质体lipofectamine将其转染HeLa细胞，用RT-PCR检测ING4基因的表达情况，应用荧光显微镜（Hoechst33258染色）、激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果:RT-PCR产物为约 750 bp 的条带,构建的真核表达载体pcDNA3.0-ING4经双酶切、PCR鉴定均出现 750 bp 大小的条带，基因测序正确, Hoechst33258染色发现pcDNA3.0-ING4转染HeLa细胞的凋亡率（21.25%）明显高于对照组pcDNA3.0转染HeLa细胞的凋亡率（8.91%,P<0.01）。共聚焦显微镜也观察到了典型的细胞凋亡。细胞周期检测显示S期细胞所占百分数pcDNA3.0-ING4转染组高于pcDNA3.0转染组。结论:分离得到了小鼠ING4基因并成功构建真核表达载体pcDNA3.0-ING4, 初步研究发现该基因转染HeLa细胞后可促使细胞凋亡。     

再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞生长的影响

目的 研究再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞生长的影响。方法 采用静置贴壁培养法在再生丝素膜上体外培养鼠胚真皮层成纤维细胞，并用活细胞计数法及MTT比色法观察再生丝素膜对细胞的形态、功能和生长的影响。结果 再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞的贴壁能力和形态及其代谢功能未见明显改变，也未见明显毒性，并能支持细胞正常生长，呈现正常的生长繁殖曲线。结论 再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞具有良好的细胞相容性。     

高温对骨肉瘤细胞株体外灭活的实验研究

应用MTT法测定SDH活性及肿瘤干细胞集落形成法对HOS-9603细胞系进行体外热灭活实验研究．结果表明：（1）45℃60min或50℃10min以上，HOS－8603基本失去细胞集落形成能力；（2）SDN的活性随温度升高和时间延长而下降；与细胞集落形成能力有较好的相关性，（3）提示了临床无需采用煮沸灭活即可将肿瘤细胞杀灭．     

敦煌空气净洁剂的抗流感病毒效应

敦煌空气净洁剂是采用中药及其有效成分进行复方配伍的乳化剂,经体外抗病毒试验及气雾杀病毒试验证明具有抗流感病毒效应,既是理想的空气净化剂型,又是有效的空气杀灭流感病毒气雾剂,可用于预防感冒和流感流行。     

5种中药有效成分的干扰素促诱生效应

用100μg/ml的人参皂甙、云芝糖肽、人参多糖、羧甲基茯苓多糖及10μg/ml的刺五加多糖对人脐血白细胞进行了IFN-α和IFN-γ的促诱生试验,其促诱生组的IFN效价比常规诱生组(IFN     

下腔静脉后输尿管的影像诊断价值

目的评价影像学检查在下腔静脉后输尿管的诊断价值。方法对7例下腔静脉后输尿管的B超、静脉尿路造影(IVU)、逆行尿路造影(RGU)及CT、MR成像的影像资料进行回顾性分析和比较。结果 B超检查7例显示右侧输尿管上段并右肾积水;IVU检查7例可见输尿管上段呈反"J"征,移行段以上输尿管及肾盂、肾盏不同程度扩张积水;RGU检查7例所见移行段以上之输尿管及肾盂、肾盏表现与IVU检查所见相似,患侧输尿管全程显影;CT扫描2例显示右侧输尿管在腰3~4平面水平于腔静脉的后侧及内外侧显影;MR检查1例显示输尿管于下腔静脉外后绕至下腔静脉内前侧。7例均于术前获得明确诊断并进行了手术,证实为右侧下腔静脉后输尿管。结论多种影像学的协同检查为下腔静脉后输尿管的诊断提供了主要依据,是诊断下腔静脉后输尿管的可靠方法。