人脑源性神经营养因子成熟肽基因克隆及表达

目的构建表达人脑源性神经营养因子hBDNF的基因工程菌。方法人工合成1对含EcoRI和BamHI限制性酶切位点的特异引物，以人血白细胞基因组DNA为模板。应用PCR技术扩增hBDNF成熟肽基因。用A-T克隆法与pUCm-T载体连接后，再定向插入原核表达载体pBV220，将重组体pBV220．hBDNF转化大肠杆菌DH5a，经42℃热诱导表达。结果经限制性酶切和DNA测序证明重组入载体中的DNA片段确为hBDNF，并成功表达出hBDNF蛋白。结论该研究成功地克隆出hBDNF基因编码序列并在大肠杆菌中获得稳定表达，表达效率达25％，为今后生物学活性的研究和神经系统疾病的基因治疗奠定了基础。     

兔眼角膜、结膜成纤维细胞的培养

目的 建立眼角膜、结膜细胞体外培养的方法。方法 采用组织块培养法培养兔眼角膜基质及结膜成纤维细胞。结果 结膜成纤维细胞在培养10天以后可以形成单层细胞。眼角膜成纤维细胞在培养瓶中培养2周后可形成单层；24孔板培养3d后细胞贴壁生长旺盛，10d形成单层。结论 眼角膜、结膜成纤维细胞组织块培养法是可行的，但在24孔培养板上眼角膜成纤维细胞比在培养瓶中贴壁快而且容易生长。     

脐尿管囊肿1例报告

患者男,54岁。无痛性肉眼血尿2周。无尿频、尿急,无发热、消瘦、乏力。影像学检查:CT表现为膀胱顶正中部壁内,见大小约1.61cm×1.18cm软组织肿块影向膀胱腔内外局限性膨出,累及膀胱壁全层,边缘光整,密度均匀。增强后肿块无明显强化。肿块后缘见点状钙化。膀胱充盈佳,膀胱底部和两侧壁光整,无异常增厚,膀胱前间隙清楚(图1,2)。精囊及前列腺无异常。考虑膀胱顶部脐尿管肿瘤。MRI表现为膀胱前壁顶部正中见一卵圆形短T1WI长T2WI软组织肿块信号,大小约1.74cm×1.28cm,病灶前缘与前腹壁分界清楚,后缘向膀胱腔内突起,冠状位和正中矢状位病灶位…     

米托蒽醌对HL-60细胞生长的影响

目的：探索米托蒽醌（MTN）对HL－60细胞生长的影响。方法：取对数生长期HL－60细胞，不同浓度MTN作用不同时间后，利用MTT法观察MTN对HL－60细胞的抑制效应，透射电镜，DNA电泳观察MTN作用HL－60细胞后其形态学及DNA的变化。结果：（1）毫微克级的MTN对HL－60细胞有明显的抑制效应。且此效应具有时间，剂量依赖关系。（2）MTN作用后的HL－60细胞透射电镜观察胞膜完整，出现核碎裂，凋亡小体等形态学特征。DNA电泳出现200bp左右的梯形条带。结论：MTN对HP－60细胞有明显的抑制作用。小剂量的MTN对HL－60细胞以诱导细胞凋亡为主，大剂量的MTN对HL－60细胞以细胞毒作用为主。     

奥沙利铂对A549肺腺癌细胞系生长抑制作用和细胞凋亡的实验研究

目的　观察奥沙利铂对肺腺癌细胞系A5 4 9的药物敏感性和诱导细胞凋亡作用。方法　将不同浓度的奥沙利铂与A5 4 9作用 2 4、36、4 8h ,用MTT法计算细胞生长抑制率 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果　奥沙利铂对A5 4 9的细胞生长抑制率随作用浓度和作用时间的增加而增大。 12 .5、2 5、5 0、10 0 μg/ml奥沙利铂对A5 4 9作用 2 4h ,细胞凋亡率分别为 35 %、13.6 %、2 .6 %、1.4 %。结论　奥沙利铂对A5 4 9细胞有生长抑制作用 ,呈剂量依赖性和时间依赖性 ;能引起细胞凋亡 ,细胞凋亡率呈剂量依赖性 ,与细胞生长抑制率呈正相关关系 (P <0 .0 1)。     

不同表达载体对人白细胞介素-18原核表达效率的影响

目的 探讨PBV220及PJW2载体构建的rhIL—18重组质粒的IL—18表达效率。方法 将构建的PBV220／rhIL—18重组质粒中的rhIL—18酶切、克隆到表达载体PJW2中，经PCR产物电泳及测序鉴定，热诱导后在大肠杆菌中表达。结果 PJW2／rhIL—18表达的重组人IL—18占菌体总蛋白质的20％，而PBV220／IL—18重组质粒表达的重组人IL—18占菌体总蛋白质的16％。两者表达的蛋白质分子量约为18KD，与预期分子量相符。结论 PJW2载体rhIL—18表达效率高于PBV220，为下一步的纯化及提高蛋白产量打下了基础。     

人端粒酶逆转录酶启动子介导的E1A和IL-24表达及其对肝癌细胞生长的抑制作用

目的构建人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子介导的E1A和IL-24双基因靶向腺病毒载体,获得Ad-h-E1A-IL-24靶向重组病毒子,并探索其体外抑瘤作用。方法运用PCR扩增MCF-7乳腺癌细胞的DNA,XbaⅠ和HindⅢ酶切获得280 bp hTERT启动子,插入空载体构建成pTrack-hTERT;运用PCR及HindⅢ和XhoⅠ酶切获得E1A,与pTrack-hTERT构成pAdTrack-hTERT-E1A;运用PCR及NotⅠ和SalⅠ酶切获得IL-24,插入pTrack-PP-IRES;XbaⅠ和XhoⅠ酶切获得hTERT-E1A,与pTrack-PP-IL-24-IRES形成pTrack-hTERT-E1A-PP-IL-24-IRES,同源重组、包装和扩增获得Ad-h-E1A-IL-24重组靶向病毒子。用25 MOI重组靶向腺病毒感染SMMC-7721肝癌细胞,MTT法测定Ad-h-E1A-IL-24的细胞生长抑制作用。结果成功构建pTrack-hTERT-E1A-PP-IL-24-IRES,并获得Ad-h-E1A-IL-24重组病毒子。与非靶向双基因比较,Ad-h-E1A-IL-24组可明显抑制肿瘤细胞生长（P〈0.05或0.01）。结论Ad-h-E1A-IL-24靶向腺病毒载体的体外抑瘤作用优于非靶向双基因载体。     

腺病毒3型诱导MxA蛋白产生及其抗病毒作用的研究

目的:观察腺病毒3型对MxA蛋白的诱导作用以及MxA蛋白的体外抗病毒作用。方法:采用流式细胞仪分析不同浓度的腺病毒3型（Ad3）诱导健康人外周血单个核细胞（PBMC）胞浆MxA蛋白的产生;采用微量细胞病变抑制法观察重组MxA蛋白对Hela细胞内腺病毒3型的抗病毒作用。结果:不同浓度的腺病毒诱异PBMC产生MxA蛋白的含量均显著高于对照组。10 ng/ml MxA蛋白质抗Hela细胞内腺病毒3型感染的效价为20TCID20。结论:腺病毒3型体外可诱导PBMC产生MxA蛋白;重组MxA蛋白具有抗腺病毒3型作用。     

人IL-24基因的克隆及在COS-7细胞中的表达

目的：克隆人IL-24基因，构建真核表达载体，在COS-7细胞中进行表达，并检测重组表达蛋白hIL-24的抗肿瘤活性。方法：分离人外周血单个核细胞，提取细胞总RNA，采用RT-PCR技术克隆人IL-24基因，将其重组于pUC19，双脱氧末端终止法测定其核苷酸序列，构建真核重组表达载体pcDNA3-hIL-24，进行双酶切和PCR鉴定，以质粒pcDNA3-hIL-24转染COS-7细胞进行瞬时表达，用RT-PCR检测mRNA表达，并用MTT法、TUNEL法和流式细胞术检测其诱导肿瘤细胞凋亡的活性。结果：成功获得621bp的人IL-24基因，测序正确，经双酶切和PCR鉴定真核表达质粒构建正确，以脂质体转染COS-7细胞后，用RT-PCR法、MTT法、TUNEL法和流式细胞术检测表明COS-7细胞可表达hIL-24，且所表达的人IL-24具有较强的诱导A549肺腺癌细胞凋亡的作用。结论：人IL-24基因的瞬时表达和凋亡效应的初步研究已获成功，为研究人IL-24抗肿瘤的分子机制和临床应用提供了实验依据．     

人β-NGF基因在CHO细胞中表达的生物学活性及分离纯化

目的：检测人β—NGF基因转染CHO细胞后培养上清中所表达的β—NGF的生物学活性及分离纯化。方法：采用脂质体介导的真核细胞转染，运用形态学观察和MTT法进行检测做定性定量分析，蛋白观察用SDS—PAGE电泳。结果：转染β—NGF基因的CHO细胞可分泌能促进PC12细胞生长的活性β—NGF，且可透过血脑屏障。结论：转染β—NGF基因的CHO细胞所分泌的β—NGF，接近自然合成的蛋白，具有较高生物学活性，为NGF的生物制药奠定了实验基础。