α2a或α2b基因工程干扰素对CD4+/CD8+的比值和NK活性的影响

目的　研究不同品牌IFNα2a或IFNα2b的免疫调节作用。方法　采用MTT法进行NK细胞的细胞毒试验和用流式细胞仪测定淋巴细胞CD抗原表达。结果　 2 0 0IU/ml不同品牌的IFNα2a或IFNα2b能促进NK细胞杀伤K562 细胞 ,其杀伤效率可达 35 %左右 ,比不加干扰素对照组NK细胞杀伤效率约 14%均提高了近 2 .5倍 (P <0 .0 5 ) ,可使CD4 /CD8 的比值升高 (P <0 .0 5 )。结论　进口和国产的不同品牌IFNα2a和IFNα2b具有同等的免疫调节功效。     

人腺病毒介导白细胞介素24对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及免疫功能影响的研究

目的研究腺病毒介导白细胞介素24（Ad—hIL-24）基因对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及其对免疫功能的影响。方法取16只BALB／C小鼠，其中4只未致瘤，12只BALB／C小鼠致瘤后随机分为3组：PBS组、5-氟脲嘧啶（5-Fu）组和Ad—hIL-24组。PBS组和Ad—hIL-24组（×10^7pfu）隔日用药，共注射5次；5-Fu组注射5-Fu，20μg／kg，连续注射5d，停药2d后，再连续注射5d。2周后，称质量，眼眶取血，处死后取瘤体、脾脏、胸腺，检测抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数、白细胞总数及淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞数。结果Ad-hIL-24组与5-Fu组的抑瘤率分别为45．08％和52．11％，两者抑瘤效果差异无统计学意义（P〉0．05），而与PBS组比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）。与5-Fu组相比，Ad—hIL-24组的胸腺指数、脾脏指数、外周血白细胞总数、淋巴细胞及单核细胞数均增加，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。与正常未致瘤组比较，Ad—hIL-24组中性粒细胞显著增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Ad-hIL-24可以抑制小鼠H22肝癌的生长，并对机体免疫功能无抑制作用。     

转基因饲养层细胞体外促进脐带血CD34+HSPC增殖研究

目的 构建转hOSM基因细胞系作为饲养层细胞，观察其对脐带血CD34+HSPC的扩增作用。方法 用分子生物学技术建立转hOSM基因细胞系，免疫磁珠法分离脐带血CD34+HSPC，将其与饲养层细胞共培养7d后，流式细胞术检测其增殖，将扩增后染色的CD34+细胞移植入SCID小鼠体内，应用荧光显微镜和RT-PCR法观察移植效果。结果 CD34+HSPC与饲养层细胞共培养后扩增了9.4倍，其表面归巢相关分子CXCR4和CD54阳性率仍较高，植入小鼠体内4周后，可成功归巢到小鼠骨髓。结论 建立的转hOSM基因饲养层细胞可以有效的扩增CD34+HSPC，并维持其较高的移植效率和造血活性。     

再生丝素膜对Ad-VEGF165转基因成纤维细胞基因表达的影响

背景：前期实验已证实再生丝素膜可促进pcDNA3.0-VEGF165转染的L929细胞表达血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)。 目的：进一步观察再生丝素膜对经腺病毒介导的人VEGF (Ad-VEGF165)转基因成纤维细胞基因转录表达的影响。 设计、时间及地点：对比观察细胞基因工程实验，于2007-11/2008-04在苏州大学细胞与分子生物实验室完成。 材料：再生丝素膜由苏州大学材料工程学院李明忠教授提供。 方法：将Ad-VEGF165腺病毒感染培养在再生丝素膜、聚氯乙烯膜及聚乙烯膜上的QBI-293A人胚肾和WI-38人胚肺成纤维细胞，以空载体Ad-GFP腺病毒和未接种病毒的PBS组为对照。 主要观察指标：通过实时定量RT-PCR法检测不同材料对成纤维细胞VEGF mRNA转录的影响；ELISA法检测其对VEGF、血管生成素1、碱性成纤维细胞生长因子、血小板衍化生长因子表达的影响。 结果：再生丝素膜组成纤维细胞VEGF mRNA呈高水平表达，但聚氯乙烯膜组转录水平明显下降(P < 0.05)。再生丝素膜组Ad-VEGF165转基因293A细胞及WI-38细胞不仅目的基因VEGF细胞因子的分泌呈高水平表达，并可促使血管生成素1基因表达水平明显提高(P < 0.05)，而且再生丝素膜还可使成纤维细胞自身分泌的碱性成纤维细胞生长因子、血小板衍化生长因子呈现正常表达水平。 结论：再生丝素膜不仅利于VEGF目的基因在成纤维细胞中呈现高效表达，并促进血管生成素1基因的表达，而且能维持成纤维细胞自身分泌的与组织损伤修复相关基因碱性成纤维细胞生长因子、血小板衍化生长因子的正常表达。     

囊肿型肾钙乳症1例报告

肾钙乳甚为罕见 ,我院近遇 1例 ,Ｘ线表现具有特征性 ,报告如下。女 ,41岁。因胸部外伤摄胸片见左中上腹肾区半月形高密度影。自诉 10余年前外院Ｂ超检查诊断为左肾结石。无腰背部肾区不适症状 ,无尿频、尿血史。体检 :两侧肾区无明显异常。实验室检查血、尿常规正常。仰卧位腹部平片左肾区见 4.3ｃｍ× 3.9ｃｍ大小椭圆形密度增高影 ,阴影密度浓淡不均 ,其内有许多大如绿豆小如芝麻粒大小的高密度的小结石均匀散布 ,呈“麻饼状”(图 1)。静脉尿路造影示右侧肾盂、肾盏及输尿管显示正常。左侧中及上肾盏外侧缘见弧形压迹 ,致中、上肾盏变长…     

骨髓基质细胞的造血支持作用等生物学特性的研究

目的研究人骨髓基质细胞体外长期培养的生物学特性和造血支持功能。方法①采用静置贴壁细胞培养法,体外长期培养胎儿、儿童和成人的骨髓基质细胞。②采用免疫细胞化学染色法和流式细胞仪检测法,分析细胞的表型。③将不同发育阶段的骨髓基质细胞体外培养,并扩增脐血造血干细胞。结果①建立了成纤维肌样细胞系,可传至10代,维持6个月,同时还培养出内皮细胞和巨噬细胞。②儿童骨髓基质肌样细胞的染色特征为波形纤维蛋白(viementin)呈阳性,第VIII因子呈阴性;儿童骨髓基质细胞的表型为CD33     

腺病毒介导的IL-24对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的体外抑制效应

目的研究腺病毒介导的IL-24基因表达对NCI-H460肺癌细胞抑癌增效作用及分子机制。方法将Ad-IL-24重组腺病毒感染NCI-H460细胞。以Western blot法鉴定IL-24基因在NCI-H460细胞中的表达;MTT法检测重组腺病毒对NCI-H460细胞的生长抑制作用;经Annexin-V-PE/7-AAD染色后流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率变化;RT-PCR检测NCI-H460细胞中bax、caspase-3、bcl-2、survivin等因子的表达。结果腺病毒介导的IL-24基因在NCI-H460细胞中能够有效表达;Ad-IL-24组对NCI-H460细胞的生长具有明显的抑制作用, Ad-IL-24能够上调bax、caspase-3等因子的表达,下调bcl-2、survivin等因子的表达,诱导细胞凋亡。结论腺病毒介导的IL-24 基因在体外可明显抑制人肺癌细胞NCI-H460的生长,诱导其凋亡,其分子机制可能与上调bax、caspase-3等促凋亡因子的表达,下调bcl-2、survivin等凋亡抑制因子的表达有关。     

腺病毒介导的生长抑制基因4对ECV304细胞体外生长及分泌血管内皮生长因子的影响

目的: 检测腺病毒介导的生长抑制基因4(adenovirus-mediated inhibitor of growth family member 4,Ad-ING4)感染后ECV304细胞体外生长及分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响,探讨ING4抑制肿瘤生长的可能机制。方法: 构建ING4腺病毒载体,用MTT法检测Ad-ING4感染后ECV304细胞体外生长影响,ELISA检测VEGF的分泌情况。结果: Ad-ING4感染后第3天和第4天ECV304细胞体外生长均受到抑制(P < 0.01),第4天时抑制率达63.6%,VEGF分泌受到抑制。结论: ING4能抑制ECV304细胞生长及VEGF分泌。Ad-ING4能抑制血管内皮细胞生长和血管的生成,从而可抑制体内肿瘤的生长。     

再生丝素膜对转基因角膜上皮细胞表达细胞因子的影响

目的 探讨再生丝素膜对转基因人角膜上皮细胞表达细胞因子的影响,以及转基因细胞修饰的再生丝素膜构建生物材料复合体的可能性.方法 实验研究.兔角膜缘注射重组腺病毒载体血管内皮生长因子165(Ad-VEGF_(165))诱导新生血管,测量角膜新生血管生长面积,分析角膜组织血管内皮细胞生长因子免疫组织化学结果.用再生丝素膜培养角膜上皮细胞,观察细胞形态、生长曲线、Ad-VEGF_(165)感染效率.收集再生丝素膜Ad-VEGF_(165)转基因角膜上皮细胞培养上清,酶联免疫吸附试验法检测上清中血管内皮生长因子、血管生成素1、表皮生长因子、转化生长因子等细胞因子浓度.采用双因素方差分析基因感染和再生丝素膜材料两因素对HCECs细胞因子表达水平的比较.结果 (1)角膜缘注射Ad-VEGF_(165)后第1周、第1个月角膜新生血管面积分别为(7.60±1.12)mm~2、(12.28±2.54)mm~2,注射后第3天、第1周、第1个月角膜基质内可见血管内皮生长因子阳性表达.(2)再生丝素膜及无再生丝素膜两种培养条件,角膜上皮细胞细胞形态、生长曲线、Ad-VEGF_(165)感染效率均无明显差异.(3)再生丝素膜培养Ad-VEGF_(165)转基因角膜上皮细胞上清中各细胞因子浓度分别为血管内皮生长因子(721.67±66.97)ng/L、表皮生长因子(1042.67±315.81)ng/L、血管生成素1(2421.00±0.00)ng/L、转化生长因子(313.33±34.06)ng/L.无再生丝素膜Ad-VEGF_(165)转基因角膜上皮细胞培养上清各细胞因子浓度分别为血管内皮生长因子(721.67±66.97)ng/L、表皮生长因子(860.33±315.81).g/L、血管生成素1(1960.33±797.90)ng/L、转化生长因子(278.00±53.11)ns/L.Ad-VEGF_(165)感染角膜上皮细胞培养上清中各细胞因子浓度均显著高于对照组,分别为血管内皮生长因子(F=168.16,P<0.0001)、表皮生长因子(F=52.76,P<0.0001)、血管生成素1(F=12.47,P=0.001)、转化生长因子(F=5.647,P=0.016).再生丝素膜与无再生丝素膜两种培养条件下,血管内皮生长因子(F=0.071,P=0.793)、表皮生长因子(F=0.563,P=0.465)、血管生成素1(F=0.14,P=0.714)、转化生长因子(F=0.008,P=0.932)浓度比较差异无统计学意义.结论 再生丝素膜与细胞培养板一样,Ad-VEGF_(165)转基因角膜上皮细胞目的 基因能获得高效表达,同时还使角膜上皮细胞自分泌的新生血管相关细胞因子表皮生长因子、血管生成素1、转化生长因子等获得高效表达.     

Ad.RGD-ING4和PTEN对白血病细胞株抑癌作用

目的:构建RGD修饰的生长抑制因子4(ING4)和(或)10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)单、双基因重组腺病毒载体,以研究其对白血病细胞株的感染效率和抑瘤作用的可行性。方法:在本科室已成功构建的p Ad Track-巨细胞病毒(CMV)-多腺苷酸(poly A)启动子腺病毒载体上,通过常规的分子生物学方法,获得RGD修饰的ING4和(或)PTEN单、双基因重组腺病毒,将其与未经RGD修饰的基因重组腺病毒同时感染QBI-293A细胞,检测和比较病毒的效价,并以10、50、100、200感染复数(MOI)不同剂量感染不同肿瘤细胞和人胚肺正常二倍体细胞系WI-38,培养48 h后在荧光显微镜下观察和用流式细胞仪检测,通过比较各组细胞中绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞比例来检测其对不同肿瘤细胞的感染效率。结果:经荧光显微镜观察各组重组腺病毒可见GFP的表达,反转录(RT)-PCR鉴定结果表明均可产生预期大小750 bp的ING4和1 209 bp的PTEN PCR产物,基因测序结果与预期序列相一致。RGD修饰的基因重组腺病毒载体效价分别比未经修饰的基因重组腺病毒效价高3~4倍(P=0.027)。流式细胞仪检测显示RGD修饰的基因重组腺病毒比未经修饰的基因重组腺病毒载体对各组肿瘤靶细胞有更高的GFP表达,感染效率明显提高,尤其对人白血病细胞系K562、Thp-1、MEG-01差异最为明显,未经改造的腺病毒载体感染白血病细胞后GFP阳性率仅3.16%~5.01%,而带有RGD的腺病毒载体感染后GFP阳性率可达到23.11%~31.58%(P=0.001 3)。结论 :成功构建了RGD修饰的ING4和(或)PTEN单、双基因重组腺病毒载体。RGD修饰的ING4和(或)PTEN基因重组腺病毒明显提高了腺病毒的效价,在各种肿瘤细胞感染效率中以白血病细胞系K562、Thp-1、MEG-01最为明显。