白细胞介素-4基因多态性与非小细胞肺癌易感性研究

目的探讨白细胞介素（interluekin,IL）-4基因多态性与非小细胞肺癌易感性的关系。方法采用PIRA-PCR分析的方法检测了235例非小细胞肺癌患者和216名正常对照者的IL-4T-168C（rs2070874）多态性,分析其基因型与非小细胞肺癌发病风险的相关性。结果在非小细胞肺癌患者中,TC基因型出现的频率（28．9％）明显低于正常对照组（37．5％）。TC基因型显著降低了非小细胞肺癌的易感性（OR=0．65．95％CI=O．47～0．97;P=O．04）;非小细胞肺癌患者中携带c型等位基因的基因型（TC／CC）频率明显低于正常对照组中相应基因型的频率（64．3％VS73．5％;OR=o．64,95％CI=0．48---0．96;P=O．03）。结论IL．4T-168C（rs2070874）多态性可能与中国人群非小细胞肺癌的遗传易感性相关。     

转基因饲养层细胞体外促进脐带血CD34+HSPC增殖

hOSM基因饲养层细胞可以有效地扩增CD34+HSPC,并维持其较高的移植效率和造血活性.     

血管生成素-1基因重组腺病毒转染兔外周血血管内皮祖细胞的研究

目的探讨重组腺病毒介导的血管生成素-1（Ang-1）基因转染兔外周血血管内皮祖细胞（EPCs）的方法及效果。方法从兔外周血中体外分离、扩增EPCs,采用免疫组织化学和荧光化学法鉴定EPCs,设EPCs细胞对照组（EPCs）、EPCs＋Ad空病毒载体对照组（EPCs＋Ad）及EPCs＋Ad-Ang-1组（EPCs＋Ad-Ang-1）。以携带Ang-1基因的重组腺病毒转染EPCs后,用荧光显微镜下观察转染效果,RT-PCR鉴定细胞内Ang-1基因在EPCs中的转录;ELISA法检测细胞培养上清中的Ang-1蛋白表达。结果 EPCs＋Ad-Ang-1组镜下观察到大部分细胞呈现绿色荧光;RT-PCR鉴定证实EPCs细胞内的Ang-1转录;ELISA检测证实EPCs＋Ad-Ang-1组细胞上清液中Ang-1的浓度高于EPCs组和EPCs＋Ad组（均P〈0.05）。结论腺病毒介导的Ang-1基因转染外周血EPCs可行。     

人重组白细胞介素24和表没食子儿茶素没食子酸酯对肿瘤血管生成的影响

目的 观察人重组白细胞介素24(rhIL-24)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对组织新生血管和肿瘤组织血管生成的影响并作比较.方法 在鸡胚模型上比较观察rhIL-24、EGCG对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响,在人肺腺癌裸鼠移植瘤模型上比较观察两者对肿瘤组织生长、组织中CD34和NF-κB(p50)的表达影响.结果 rhIL-24、EGCG均可抑制CAM上Ⅱ、Ⅲ级血管的生成.rhIL-24组瘤体组织中NF-κB(p50)的表达与PBS组比较有显著性差异,而EGCG组则不明显;rhIL-24组和EGCG组瘤体组织中CD34标记的微血管密度,与PBS组比较均有显著性差异.结论 rhIL-24、EGCG都有抑制CAM血管生成和肿瘤组织血管生成的作用,对肿瘤组织中NF-κB表达可能存在不同影响,推测两者或许存在不同的抗肿瘤血管生成机制.     

人血管生成素1和血管内皮生长因子165重组腺病毒载体构建及目的基因表达*★

目的：拟构建人血管生成素1和血管内皮生长因子165腺病毒载体，观察靶细胞转染后目的基因的表达水平。 方法：通过RT-PCR方法克隆人Ang-1全长编码基因，PCR法以pcDNA3.0-VEGF165质粒为模板扩增VEGF165基因，分别将目的基因酶切连接到带有GFP标记的pTrack-CMV质粒上，构建重组质粒pTrack-CMV-Ang-1和 pTrack-CMV-VEGF165，经PCR、酶切和测序鉴定后将其PmeI线性化与腺病毒质粒pAdeasy-1共转化BJ5183细菌，获得重组腺病毒载体pAdeasy-1-pTrack-CMV-Ang-1/VEGF165，经PacI线性化后转染QBI-293A包装细胞，收获重组腺病毒Ad-Ang-1及Ad-VEGF165。 结果：PCR﹑双酶切和测序鉴定结果证实成功构建pTrack-CMV-Ang-1/VEGF165重组转移质粒，PmeI线性化后重组腺病毒载体获得成功包装。脂质体转染QBI-293A细胞后光镜下可见由腺病毒引起的细胞圆缩、聚集呈菌落状的典型细胞病理性改变；荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达，且荧光强度随培养时间延长而逐渐增强；经多轮感染、扩增后，病毒效价可达（2.0~5.0）×1010 pfu/mL。转染48 h后，293A细胞中的血管生成素1与血管内皮生长因子含量均明显提高（F=427.93，17.93，P < 0.05）。 结论：成功构建并获得了Ad-Ang-1及Ad-VEGF165重组腺病毒，血管生成素1与血管内皮生长因子165均能在靶细胞中有效表达。     

Ad-ING4对乳腺癌的生长抑制作用研究

目的 研究腺病毒(adenovirus,Ad)介导的ING4基因(Ad-ING4)表达对人乳腺癌的生长抑制作用.方法 采用Ad-ING4腺病毒感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,RT-PCR、Western blot 法检测ING4基因在肿瘤细胞中的转录和表达;四唑盐(MTT)法、Hochest33258染色法和流式细胞仪(FCM)检测ING4基因的表达对乳腺癌细胞的生长抑制、周期变化和凋亡效应;半定量RT-PCR检测凋亡相关基因的转录;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测人血管生成素1(Ang-1)的分泌水平;在乳腺癌的裸鼠移植瘤动物模型上检测Ad-INCA对移植瘤生长的抑制作用,并检测Bc1-2,Bax,Caspase-3等细胞凋亡相关因子的表达.结果 ING4基因可在MDA-MB-231细胞中成功转录及表达,并对乳腺癌细胞有明显增殖抑制及促凋亡作用,G_2/M期阻滞达(24.86±1.24)%;Ad-ING4显著抑制移植瘤生长,瘤重抑制率达49%;免疫组化结果显示Ad-ING4上调Bax和Caspase-3的表达,下调Bc1-2、Survivin和CD34的表达.结论 ING4基因在体内外均可明显抑制MDA-MB-231细胞的生长,诱导其凋亡.     

LPS及IL-3对人骨髓基质细胞分泌IL-6的调节效应

骨髓造血微环境主要由基质细胞和细胞外基质（ＥＣＭ）构成,基质细胞包括多种细胞成分,如成纤维细胞、内皮细胞、脂肪细胞、巨噬细胞等,可分泌多种造血调控因子,调节造血干、祖细胞的增殖分化和自我更新［１］。基质细胞可以合成ＩＬ６参与造血调控,已为许多学者证实［２］。近来报道显示,ＬＰＳ和ＩＬ３可以促进基质细胞合成ＩＬ６、ＩＬ８、ＳＣＦ等,进而促进造血干、祖细胞的增殖分化［２,３］。我们拟建立人骨髓基质细胞层,探讨各种条件下ＩＬ６的合成情况。１　材料与方法１．１　材料　试剂：ＬＰＳ北京邦定公司。…     

hOSM在COS-7细胞中表达及对人A375黑色素瘤细胞的生长抑制作用

目的:克隆人抑瘤素(hOSM)基因并构建真核表达载体,在COS-7细胞中表达具有抑制人A375黑色素瘤细胞生长的基因重组蛋白。方法:用PMA刺激U937细胞,抽提总RNA,经RT-PCR获得cDNA,与pUCmT载体连接,经PCR获得全长hOSM基因,再与pcDNA3·1/myc-his(-)A真核表达载体连接,构建真核表达重组质粒pcDNA3·1A-hOSM,经PCR和限制性酶切及DNA测序鉴定后,在COS-7细胞中进行瞬时表达,采用RT-PCR鉴定hOSM基因的转录,MTT法检测表达产物抑制A375细胞生长的活性。结果:重组入载体中的基因片段不仅方向正确,而且所克隆的hOSM基因,与GeneBank报告序列完全一致,并成功地在COS-7细胞中瞬时表达了具有抑制A375细胞生长的rhOSM蛋白。结论:本研究成功地克隆出hOSM基因并在COS-7细胞中获得瞬时表达,证明了表达的基因重组蛋白具有抑制人A375黑色素瘤细胞生长的活性,为在真核细胞中进行稳定表达,深入研究rhOSM的生物学功能创造了条件。     

大鼠嗅黏膜嗅鞘细胞的分裂增殖和免疫细胞化学特性

目的:体外培养大鼠嗅黏膜嗅鞘细胞(olfactoryensheathingcells,OECs),观察其形态、分裂增殖和免疫细胞化学特性,探索自体嗅黏膜嗅鞘细胞作为OECs来源的可能性。方法:采用差时贴壁的方法分离培养成年大鼠嗅黏膜嗅鞘细胞,相差显微镜下观察细胞形态和分裂增殖;用免疫组化方法观察GFAP、NGFRp75、S鄄100、NGF、BDNF、NT鄄3的表达。结果:培养的细胞根据形态来分,可分为双极、多极和偏平状;细胞分裂时先回缩成球形,分裂成两个子球,再伸出突起,变成梭形或多极形。GFAP、NGFRp75、S鄄100、BDNF和NT鄄3表达阳性。结论:在含血清培养基上,大鼠嗅黏膜嗅鞘细胞能正常分裂增殖和分泌神经营养因子。     

螺旋CT定性诊断肺磨玻璃结节的临床价值

目的：探讨螺旋CT定性诊断肺磨玻璃结节的临床价值。方法：对我院经病理证实的118例肺磨玻璃结节患者的螺旋CT影像学资料进行回顾性分析,分析螺旋CT对肺磨玻璃结节的诊断符合率,同时对不同病理类型的肺磨玻璃结节的螺旋CT征象进行比较。结果：118例患者中,113例螺旋CT诊断和病理结果相符,准确率为95.76%（113/118）。其中良性符合率为97.92%（47/48）,恶性符合率为94.29%（66/70）;随着肺磨玻璃结节恶性程度越来越高,病灶越来越不规则,分叶、毛刺、胸膜凹陷、空泡征增多,边缘不清楚增多,不同病理类型肺部磨玻璃结节CT征象比较,差异具有显著性意义;恶性组病灶明显大于良性组,且随着恶性程度越来越高,肺部磨玻璃结节病灶呈明显增大趋势;炎症、AAH与AIS实性成分均为0,IAC实性成分明显大于MIA。结论：螺旋CT对于肺磨玻璃结节的定性诊断率较高,同时对不同病理类型的肺磨玻璃结节具有较高的鉴别价值,对于术前诊断及鉴别诊断具有重要的指导意义。