人IL-31的克隆表达及对表皮角化细胞的影响

目的克隆人IL-31基因,构建真核表达载体,研究人IL-31对表皮角化细胞HaCaT的影响及其作用机制。方法PMA、PHA刺激正常人外周血单个核细胞,提取细胞总RNA,采用RT-PCR克隆人IL-31基因,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/myc-His（-）A,进行PCR和双酶切鉴定,并进行序列测定。将重组质粒转染CHO细胞,用RT-PCR和Western blot分析rhIL-31在CHO细胞中的表达。用Ni^2＋树脂纯化his融合蛋白,用不同剂量rhIL-31刺激HaCaT细胞,利用Transwell穿孔板检测HaCaT细胞培养上清对外周血单个核细胞的趋化作用,荧光定量PCR检测rhIL-31对HaCaT表达趋化因子的影响,Western blot检测STAT3磷酸化。结果成功获得全长人IL-31基因,测序正确,经双酶切、PCR和序列测定鉴定,真核表达质粒构建正确,可在CHO细胞中表达;该目的蛋白刺激人表皮角化细胞HaCaT,细胞培养上清对外周血单个核细胞有趋化作用,HaCaT细胞表达趋化因子MDC、TARC、I-309;细胞STAT3磷酸化增加。结论IL-31作用于正常人表皮角化细胞,细胞培养上清对外周血单个核细胞有趋化作用,HaCaT细胞趋化因子表达增加,细胞STAT3磷酸化增加,提示IL-31可通过STAT3发挥作用。     

新生大鼠嗅球嗅鞘细胞的纯化方法研究

目的 探讨新生大鼠嗅球嗅鞘细胞（OECs）的体外培养和纯化方法，为研究脊髓损伤后神经再生获得丰富OECs来源奠定基础。方法 用原代培养的方法分离、培养新生大鼠嗅球OECs，比较p75抗体吸附、阿糖胞苷抑制、差速贴壁三种方法的纯化效果，根据GFAP免疫细胞化学染色结果统计所得OECs的纯度，同时在相差显微镜下对不同培养时期的OECs的形态进行观察。结果 体外培养的新生大鼠嗅球OECs主要为双极或三级细胞，其突起细长。未经纯化的OECs则成纤维细胞生长迅速而占优势，三种纯化方法均能使接种14d后的OECs纯度均值大于75％。p75抗体吸附法和阿糖胞苷抑制法的纯化率均值略高于差速贴壁法。结论 新生大鼠嗅球OECS的原代培养中细胞纯化是必要的；在脊髓损伤再生研究中，较之p75抗体吸附法和阿糖胞苷抑制法，差速贴壁法是一种简单、经济、实用的OECs纯化方法。     

灵芝水提取物对人免疫细胞及IL-6的调节作用

目的：观察灵芝水提取物对人免疫细胞及细胞因子的调节作用。方法：灵芝水提取物（ＧＬ－Ｗ）作用于人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）,用ＭＴＴ法及流式细胞仪技术检测。结果：１．ＧＬ－Ｗ以经植物凝集素（ＰＨＡ）活化的和未经ＰＨＡ活化的人ＰＢＬ均有促增殖效应,其中经ＰＨＡ活化的增殖反应显著（Ｐ〈０．０５）,细胞周期检测发现其主要促进细胞进入Ｓ期,表明ＧＬ－Ｗ可促进人ＰＢＬ的ＤＮＡ合成。２．选择最大促进增殖效诮浓度的     

双黄连对α2a-干扰素抗柯萨奇病毒的协同作用

目的：探讨双黄连对rIFN-α2a抗柯萨奇病毒的影响。方法：采用微量细胞病变抑制法在Wish和Vero细胞上进行双黄连、rIFN-α2a及两者联用抗柯萨奇病毒(CVB₃)的实验研究。结果：两药联用抗柯萨奇病毒呈明显协同作用;0.125 mg．ml^-1的双黄连可使干扰素(rIFN-α2a)在Wish和Vero细胞上抗柯萨奇病毒的效价提高2.58倍左右。结论：该结果为临床中西医结合治疗柯萨奇病毒感染提供新的配伍。     

血管生成素-1基因重组腺病毒转染兔外周血血管内皮祖细胞的研究

目的探讨重组腺病毒介导的血管生成素-1（Ang-1）基因转染兔外周血血管内皮祖细胞（EPCs）的方法及效果。方法从兔外周血中体外分离、扩增EPCs,采用免疫组织化学和荧光化学法鉴定EPCs,设EPCs细胞对照组（EPCs）、EPCs＋Ad空病毒载体对照组（EPCs＋Ad）及EPCs＋Ad-Ang-1组（EPCs＋Ad-Ang-1）。以携带Ang-1基因的重组腺病毒转染EPCs后,用荧光显微镜下观察转染效果,RT-PCR鉴定细胞内Ang-1基因在EPCs中的转录;ELISA法检测细胞培养上清中的Ang-1蛋白表达。结果 EPCs＋Ad-Ang-1组镜下观察到大部分细胞呈现绿色荧光;RT-PCR鉴定证实EPCs细胞内的Ang-1转录;ELISA检测证实EPCs＋Ad-Ang-1组细胞上清液中Ang-1的浓度高于EPCs组和EPCs＋Ad组（均P〈0.05）。结论腺病毒介导的Ang-1基因转染外周血EPCs可行。     

白细胞介素-4基因多态性与非小细胞肺癌易感性研究

目的探讨白细胞介素（interluekin,IL）-4基因多态性与非小细胞肺癌易感性的关系。方法采用PIRA-PCR分析的方法检测了235例非小细胞肺癌患者和216名正常对照者的IL-4T-168C（rs2070874）多态性,分析其基因型与非小细胞肺癌发病风险的相关性。结果在非小细胞肺癌患者中,TC基因型出现的频率（28．9％）明显低于正常对照组（37．5％）。TC基因型显著降低了非小细胞肺癌的易感性（OR=0．65．95％CI=O．47～0．97;P=O．04）;非小细胞肺癌患者中携带c型等位基因的基因型（TC／CC）频率明显低于正常对照组中相应基因型的频率（64．3％VS73．5％;OR=o．64,95％CI=0．48---0．96;P=O．03）。结论IL．4T-168C（rs2070874）多态性可能与中国人群非小细胞肺癌的遗传易感性相关。     

转基因饲养层细胞体外促进脐带血CD34+HSPC增殖

hOSM基因饲养层细胞可以有效地扩增CD34+HSPC,并维持其较高的移植效率和造血活性.     

IL-3体外造血支持效应的初步研究

IL- 3是早期多能生长因子 ,单独或与其它因子配伍 ,可以促进多能干细胞自我更新及定向祖细胞的增殖 [1 ]。骨髓基质细胞不能合成 IL- 3,已为一些学者证实 [2 ]。因此 ,我们在成人骨髓基质细胞支持的培养体系中加入 IL- 3,探讨其对脐血造血细胞增殖分化的作用。1　材料和方法1.1　细胞的采集　脐血采集后使用 Ficoll分离 ,获得脐血MNCs。成人骨髓细胞用 Ficoll分离后 ,制成适当浓度的细胞悬液。1.2　基质细胞的培养　成人骨髓 MNCs按 1× 10 6 / ml悬浮于 5 ml基质 RPMI16 40培养液中 ,培养 3～ 4周 ,形成单层后 ,用γ射线 (15 GY)辐…     

腺病毒介导IL-24基因诱导人脑胶质瘤U87MG细胞的凋亡

目的：研究腺病毒介导IL-24基因表达载体(Ad-IL-24)对人脑胶质瘤U87MG细胞的抑制作用,初步探讨其作用机制。方法：将本科室构建的Ad-IL-24感染U87MG细胞,RT-PCR法检测IL-24基因的表达,MTT法和流式细胞术检测U87MG细胞的生长和凋亡,激光共聚焦显微镜观察U87MG细胞凋亡的形态学变化,RT-PCR法检测Bax、Bcl-2基因mRNA的表达,Western blotting检测caspase-3的活化。结果：Ad-IL-24感染U87MG细胞后,IL-24在U87MG细胞中有明显表达,并抑制U87MG细胞生长、诱导其凋亡、出现典型的凋亡细胞核形态学改变。Ad-IL-24可上调U87MG细胞中Bax基因、下调Bcl-2基因的表达,并诱导caspase-3蛋白的活化。结论：Ad-IL-24可诱导U87MG细胞凋亡,其机制可能与上调Bax基因、下调Bcl-2基因表达,并活化caspase-3有关。     

人重组白细胞介素24和表没食子儿茶素没食子酸酯对肿瘤血管生成的影响

目的 观察人重组白细胞介素24(rhIL-24)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对组织新生血管和肿瘤组织血管生成的影响并作比较.方法 在鸡胚模型上比较观察rhIL-24、EGCG对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响,在人肺腺癌裸鼠移植瘤模型上比较观察两者对肿瘤组织生长、组织中CD34和NF-κB(p50)的表达影响.结果 rhIL-24、EGCG均可抑制CAM上Ⅱ、Ⅲ级血管的生成.rhIL-24组瘤体组织中NF-κB(p50)的表达与PBS组比较有显著性差异,而EGCG组则不明显;rhIL-24组和EGCG组瘤体组织中CD34标记的微血管密度,与PBS组比较均有显著性差异.结论 rhIL-24、EGCG都有抑制CAM血管生成和肿瘤组织血管生成的作用,对肿瘤组织中NF-κB表达可能存在不同影响,推测两者或许存在不同的抗肿瘤血管生成机制.