表达抗-VEGF发夹状核酶腺病毒载体的构建及其对结肠癌生长的抑制作用

背景与目的：VEGF过表达提示结肠癌预后不良。本实验构建带有抗-VEGF发夹状核酶的复制缺陷型腺病毒，观察其对结肠癌VEGF表达及肿瘤生长的抑制作用。方法：将人工合成的抗-VEGF发夹状核酶DNA定向克隆至转移质粒pAdTrack—CMV多克隆位点，然后与病毒骨架质粒pAdEasy-1在细菌BJ5183中重组，在293a细胞中包装成完整病毒（命名为Ad-Rz）并复制扩增、纯化。RT-PCR检测病毒感染后抗-VEGF发夹状核酶在HT-29细胞中的表达、real-time PCR及ELISA检测其对VEGF mRNA及蛋白表达的抑制作用。观察Ad-Rz对HT-29细胞和裸鼠移植瘤生长的抑制作用，CD34标记检测肿瘤组织微血管密度（MVD）。结果：抗-VEGF发夹状核酶成功克隆至复制缺陷型腺病毒载体上。抗-VEGF发夹状核酶可在HT-29细胞中表达．Ad—Rz感染的HT-29细胞中VEGFmRNA的相对表达量大约为PBS组的45％（e〈0．05）。ELISA结果显示Ad—Rz感染后的细胞上清液中蛋白含量（A值）为0．455±0．35／百万细胞，低于PBS组（P〈0．05）。Ad—Rz对HT-29细胞的生长抑制无统计学意义（P〉0．05），但可显著抑制肿瘤组织内血管的形成（P〈0．05），Ad—Rz治疗的移植瘤增殖率低于PBS组，但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：腺病毒载体介导的抗-VEGF发夹状核酶可有效抑制HT-29细胞VEGF的表达及移植瘤组织内血管的生成。     

冠状动脉供血的肺隔离症一例

患者女,51岁。咳嗽、咯血20余年(发作1～2次/年)。活动后或情绪紧张时心悸3个月余,再发1天入院。体检:偶发房性早搏、短阵房内折返性心动过速。运动实验:阳性。实验室检查:乳酸脱氢酶135.2 U/L、肌酸磷酸激酶34 U/L、肌酸激酶同工酶14.6 U/L。血常规:白细胞计数3.7×109/L,嗜中性粒细胞0.594,血红蛋白126 g/L。余无特殊。     

牛磺酸抑制新生大鼠心肌成纤维细胞胶原合成及其机制的初步研究

目的研究牛磺酸对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖、胶原合成及TGF—Bl蛋白表达的影响，初步探讨其抗纤维化的作用和机制。方法在培养的心肌成纤维细胞中加不同浓度的牛磺酸72h，用羟脯氨酸法及MTT比色法分别测胶原量和细胞增殖情况，ELISA法测TGF—β1，蛋白含量。结果牛磺酸能明显抑制心肌成纤维细胞的增殖及胶原的合成，并减少TGF—βl蛋白的表达。结论牛磺酸能通过下调TGF—β1蛋白的表达，抑制心肌成纤维细胞增殖和胶原合成，起到抗心肌纤维化的作用。     

人P选择素胞外区Lectin-EGF片段的基因克隆及表达研究

目的 构建表达人P-选择素胞外凝集素-表皮生长因子样区(Lectin—EGF)片段的基因工程菌。方法 从人血小板中提取总RNA，经RT—PCR得到P-选择素cDNA，用PCR方法扩增其中的Lectin—EGF片段，并将其克隆到原核表达载体PBV220中，再转化宿主菌DH5α。结果 通过酶切、PCR和基因序列分析确定重组载体片段为目的基因的核苷酸序列，并在大肠杆菌中获有效表达重组蛋白。结论 表达人P-选择素胞外区Lectin—EGF片段的基因工程菌的成功构建，为在大肠杆菌中大量表达该表位片段对应蛋白从而制备其抗体提供基础。     

AML患者ABMT前后血清中细胞因子的动态观察

本文对５例急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）进行了自体骨髓移植（ＡＢＭＴ）前后血清中细胞因子人白细胞介素－２（ＩＬ－２）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、干扰素（ＩＦＮ）和人白细胞素－６（ＩＬ－６）水平的动态观察，结果表明ＡＢＭＴ零天具抗肿瘤、抗感染和免疫调节作用的ＩＬ０２ＴＮＦ、ＩＦＮ的效价已明显下降，至９－１０天达最低值，几乎接近零，至第２１天才开始上升，第３５天基本恢复到ＡＢＭＴ零水平。而且造血作用和免疫调     

人β-NGF基因在CHO细胞中表达的活性检测

目的 检测人β-NGF基因转染CHO细胞后培养上清中所表达的β-NGF的生物学活性。方法 采用脂质体介导的真核细胞转染，运用MTT法进行检测分析。结果 转染β-NGF基因的CHO细胞可分泌能促进PC12细胞生长的活性β-NGF。结论 转染β-NGF基因的CHO细胞所分泌的β-NGF接近自然合成的蛋白。具有较高的生物学活性。为NGF的生物制药奠定了实验基础。     

Ad-ING4-IRES-IL-24双基因共表达载体的构建及表达

目的:构建IRES介导的携带人肿瘤生长抑制因子4(ING4)和人白介素24(IL-24)双基因的重组腺病毒共表达载体(简称为Ad-ING4-IRES-IL-24),研究其表达产物对A549肺癌细胞生长的影响。方法:将PCR扩增的IRES、ING4和IL-24基因片段分别插入pAdTrack-CMV载体中构建pAdTrack-CMV-ING4-IRES-IL-24双基因共表达重组转移载体。按腺病毒载体常规构建方法获得同源重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-ING4-IRES-IL-24,并在QBI-293A包装细胞中进行包装和病毒扩增。将扩增后的Ad-ING4-IRES-IL-24腺病毒感染A549肺癌细胞,并用RT-PCR和Western blot法鉴定ING4和IL-24基因在QBI-293A细胞或A549肺癌细胞中的表达,MTT法和流式细胞仪检测其对A549肺癌细胞生长抑制和诱导凋亡的功能和抑癌增效作用。结果:DNA测序结果显示pAdTrack-CMV转移载体中插入的ING4、IRES和IL-24片段的序列与GenBank报道的完全一致,Ad-ING4-IRES-IL-24能成功介导ING4和IL-24基因在QBI-293A和A549细胞中表达,不仅能明显抑制A549肺癌细胞生长和诱导其凋亡(72小时生长抑制率为62.82%±0.65%,凋亡率为19.40%±1.29%),而且与Ad-ING4-IRES(72小时生长抑制率为42.31%±0.43%,凋亡率为13.30%±1.85%)和Ad-IRES-IL-24单基因组(72小时生长抑制率为47.44%±0.39%,凋亡率为12.40%±1.05%)相比具有显著性差异(P<0.05)。结论:成功构建了IRES介导的Ad-ING4-IL-24双基因共表达重组腺病毒载体,Ad-ING4-IL-24不仅能明显抑制A549肺癌细胞生长和诱导其凋亡,而且与Ad-ING4和AdIL-24单基因组相比具有抑癌增效作用。     

硫酸小诺霉素片剂的体内外抗菌作用

小诺霉素(Micronomicin,MCR)是一种氨基糖苷类抗生素,临床试验证明其针剂对治疗细菌性感染有明显疗效,抗革蓝氏阴性菌感染显效率可达79.8％,优于庆大霉素(GM),特别是对肠道感染疗效更为明显。据此无锡第四制药厂研制了硫酸小诺霉素片剂。本文报道硫酸小诺霉素片剂与庆大霉素片剂一样,口服后在小鼠肠道内具有抗痢疾杆菌的效果。体外试验证明对耐氯霉素伤寒杆菌、空肠弯曲菌、结肠弯曲菌有明显的抑     

表阿霉素诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的 进一步探讨表阿霉素治疗原发性肝癌的作用机理。方法 应用DNA电泳、电镜、流式细胞仪分析技术，观察表阿霉素诱导人肝癌SMMC－7721细胞凋亡模式。结果 0.1μg/ml表阿霉素作用细胞12、24、36、48小时及0.1、1.0、10.0、100μg/ml表阿霉素作用细胞24小时均可出现细胞凋亡现象，其诱导凋亡效率与剂量、时间呈正相关。结论 表阿霉素可诱导人肝癌SMMC－7721细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

人胰岛素样生长因子-1基因强化组织工程法诱导裸鼠异位软骨形成

目的 探讨人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因转染诱导后的人骨髓基质干细胞(hMSCs)与再生丝素膜复合后在裸鼠体内形成组织工程软骨的能力.方法 分离培养hMSCs,体外诱导成软骨样细胞,流式细胞仪测定细胞表型,免疫组化检测软骨细胞表型;脂质体介导hIGF-1转染诱导后的hMSCs, RT-PCR、酶免疫测定法和免疫组化检测hIGF-1及Ⅱ型胶原的表达;转染后的hMSCs与再生丝素膜复合培养,扫描电镜观察细胞形态,复合物植入裸鼠皮下,HE及免疫组化染色观察新生软骨的结构和表型.结果 分离培养出纯化的hMSCs符合间充质干细胞表型,具有快速增殖及经诱导后向软骨分化的能力,诱导后的细胞表达Ⅱ型胶原;转染诱导后的hMSCs能稳定分泌具活性的hIGF-1蛋白,并表达软骨细胞表型;转染后的hMSCs与再生丝素膜复合培养显示良好的生物相容性,新生组织具典型的软骨组织陷窝,并表达Ⅱ型胶原.结论 经hIGF-1基因诱导后的hMSCs与再生丝素膜在体内能构建出软骨样组织.