非病毒载体系统在基因治疗中的应用

非病毒载体系统具有低毒、低免疫原性和相对靶向性等优点,是新兴发展起来的基因转移系统.本文综述了目前基因治疗中所用的几种非病毒载体系统及其研究进展.     

肿瘤病人天然杀伤细胞的异质性

肿瘤的发生发展与宿主的免疫功能密切相关,这方面研究得较多的是花结形成试验与淋巴细胞转化试验。按照经典的免疫监视观点,抗肿瘤的免疫监视功能主要是借助依赖胸腺的T淋巴细胞。近年来发现了天然杀伤(NK)现象,使兔疫监视的内容更充实。     

免疫球蛋白可变区基因的体外扩增、序列分析及人-鼠嵌合重链抗体的表达

本文用聚合酶链反应法(PCR)扩增了抗人小细胞肺癌单克隆抗体的轻、重链可变区基因(V_k、V_H基因)。逐步克隆将V_H基因与表达质粒重组,最终与载有人恒定区基因的载体拼接,得嵌合质粒的在哺乳类细胞中表达了人-鼠嵌合重链抗体。 1 免疫球蛋白可变区基因的体外扩增用酸性异硫氰酸胍-苯酚-氯仿抽提抗人小细胞肺癌单克隆抗体的细胞,得较高质量的总RNA,用oligo(dT)为引物合成第一链     

胰岛素样生长因子受体靶向性基因导人系统的体外和体内导人瘤谱

目的 通过研究E5基因导入系统的体外、体内基因导入瘤谱,建成一个平台技术：一个基因导入系统可用于多种肿瘤的基因治疗。方法 应用E5基因导入系统在体外、体内转移报告基因到IGF I R阳性的多种肿瘤细胞与裸小鼠皮下肿瘤。结果 E5基因导入系统在体外转移报告基因到富于IGF I R的5种肿瘤细胞,在体内将报告基因转移到IGF I R阳性裸小鼠皮下肿瘤,其导入率与IGF I R表达水平呈正相关。而体外、体内均不能将报告基因导入到IGF I R阴性的肿瘤细胞和裸小鼠皮下肿瘤。结论 E5基因导入系统具有相对的靶向性与广谱性,在临床基因治疗研究和应用中具有潜在的价值。     

血管内皮生长因子受体介导的靶向性非病毒载体的改进与体内 …

目的 通过构建一种有相对靶向性的基因治疗载体,将外源基因导入新生血管内皮细胞,为开展靶向于肿瘤新生血管的基因治疗奠定基础。方法 根据血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）与ＶＥＧＦ受体结合位点,修改本实验室已有的酸体寡肽ＧＶ１、ＧＶ２氨基酸序列,并合成了基因转移载体系统。用载体包裹外源ＤＮＡ（β－ｇａｌ）,进行体内实验,观察外源基因在体内的分布和不同时间的表达情况。结果 报告基因在心、肺、肝和肾中无明显地表     

人原发性肝癌转化基因——N-ras的研究

近三年内已有报道从10余种人体恶性肿瘤应用DNA转染和分子生物学技术鉴定和分离癌基因,例如从膀胱癌、肺癌分离出Ha-ras;从肺癌、结肠癌、胆囊癌、胰腺癌卵巢癌、某些软组织肉瘤中分离出Ki-ras;从纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤、髓细胞性白血病和T细胞淋巴瘤等分离出N-ras等。但关于我国常见的原发性肝癌的转化基因尚未见正式报道。本文描述从原发性肝癌、肝癌7402细     

裸鼠肿瘤动物模型VEGF受体表达及其意义

目的　通过免疫组织化学染色了解flt 1与flk 1 KDR(VEGF的两个高亲和受体 )在人肿瘤细胞皮下接种肿瘤动物模型的血管内皮细胞与肿瘤细胞中的表达。方法　取荷瘤裸鼠皮下接种瘤块 ,漂洗、固定、石蜡连续切片 ,进行两种受体相应免疫组化检测。结果　在 13种荷瘤裸鼠血管内皮细胞及肿瘤细胞中flt 1的阳性率大部分为强阳性或中阳性 ,而只有在荷人胃腺癌MKN 4 5裸鼠的肿瘤细胞中flt 1的阳性率为弱阳性 ,在荷人卵巢癌SKOv3裸鼠的肿瘤细胞中flt 1的表达为阴性。相比较而言 ,在 13种荷瘤裸鼠血管内皮细胞及肿瘤细胞中KDR的阳性率大部分为中阳性或弱阳性 ,并且在荷人肝癌SMMC 772 1裸鼠 ,荷人胃腺癌SPC A1裸鼠 ,荷人高转移肝癌移植瘤裸鼠 ,荷人卵巢癌SKOv3裸鼠的肿瘤细胞中 ,荷人宫颈癌移植瘤裸鼠和荷人胃腺癌MKN 4 5裸鼠的肿瘤细胞中 ,KDR表达为阴性。结论　VEGF受体共同表达于肿瘤血管内皮细胞与肿瘤细胞 ,提示了VEGF与VEGF受体结合作用在肿瘤演化中的重要性 ,为靶向于VEGF受体的基因治疗策略选择裸鼠动物模型提供了参考依据     

表皮生长因子受体介导的新型肝癌靶向性基因转移

如何使得外源基因稳定地从吞噬溶酶体中释放 ,是提高受体介导基因转移系统转移效率的关键。本文以绿色荧光蛋白质粒为报告基因 ,合成针对表皮生长因子受体 (EGFR)的相应 16肽配体寡肽和流感病毒血凝素HA2 0寡肽 ,并与多聚赖氨酸连接 ,连接物与绿色荧光蛋白报告基因按 1∶1混合 ,构建新型肝癌靶向性转移系统 ,命名为四元复合体。分别以四元复合体和脂质体在体内外进行基因转染 ,流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测绿色荧光蛋白表达。结果表明 ,四元复合体介导基因定向转染至肿瘤细胞 ,其转染率为 44 95 % ,显著高于脂质体转染组( 3 3 0 9% ,P <0 0 5 ) ,动物实验证明 ,四元复合体介导绿色荧光蛋白特异性表达于肿瘤细胞 ,具有良好的应用前景     

受体介导的基因导入系统对家兔肝肾功能的影响

双歧杆菌是人类肠道的正常菌群 ,它在调整肠道某些疾病方面起着重要作用 ,而它在肿瘤免疫治疗中作为一种生物反应调变剂 (ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｒｅｓｐｏｎｓｅｍｏｄｉｆｉｅｒ,ＢＲＭ)不仅使实验动物平均存活期延长 ,死亡率减低 ,抑瘤率提高 ,而且可以增强一些免疫细胞活性 ,但研究尚缺乏深度和全面 ,本文旨在通过对几项细胞及细胞因子免疫指标的检测来探讨双歧杆菌的部分抗肿瘤免疫机制。于ＢＡＬＢ/ｃ小鼠 (2 0± 2ｇ,6～ 8周龄 ,雌雄各半 )左腋皮下接种ＨＧＦ16Ａ3 肿瘤细胞 10 6/ 0 2ｍｌ/只 (一般于注射后 4ｄ即可在局部触及米粒大…     

肿瘤病人天然杀伤细胞的异质性

本文测定10例癌症患者(包括乳腺癌、结直肠癌、胃癌、食管癌、急性粒细胞性白血病)外周血淋巴细胞对无关靶-7402人体肝癌细胞株的天然杀伤(NK)活性。以抑制靶细胞的贴壁率为指标。经贴壁粘附去掉单核细胞,用抗胸腺血清去除T淋巴细胞及密度梯度离心去掉IgGFc受体阳性细胞(Fc-