来源于人胚室下区神经干/祖细胞的贴壁法培养和鉴定

目的建立有效的人胚胎神经干/祖细胞分离及纯化方法以达到临床需要。方法无菌取胎脑室管膜下区组织,经反复机械吹打制备细胞混悬液,采用贴壁法进行体外培养、传代。传代后用Nestin进行细胞鉴定。结果应用贴壁法进行胎脑室管膜下区神经干/祖细胞的培养能够稳定传代20代以上;共聚焦显微镜下可见Nestin阳性细胞表达呈递增趋势,传至P3(passage3)阳性率为35%,P7为79%,P12为90%,P15为99%。传到前七代时分别做细胞存活率鉴定,可达(82.57±1.38)%。结论成功建立了来源于人胚室下区的神经干/祖细胞的贴壁法培养,为该细胞移植治疗神经系统疾病提供了技术方法支持。     

MLVA基因分型方法研究世界多地区布鲁氏菌的流行病学特征

目的 通过多位点串联重复序列分析（MLVA）研究世界多国家和地区分离的布鲁氏菌分子流行病学特征。方法 选择11个可变数目串联重复序列位点,使用BioNumerics软件,采用非加权配对算术平均法,对1953－2013年全球48个国家和地区分离的布鲁氏菌VNTR资料进行聚类分析,绘制系统发育树和最小生成树,分析菌株的流行分布特征。结果 布鲁氏菌系统发育树的进化关系与经典的生物分型方法基本上吻合,但猪种生物5型菌株与其他猪种生物1、2、3和4型菌株关系较远;鲸种布鲁氏菌也分为2个部分,并且关系较远。2005－2008年出现了全球布鲁氏菌病（布病）流行,中国是布病多发区,主要流行株为羊种布鲁氏菌,其次是牛种布鲁氏菌,猪种布鲁氏菌主要出现在中国南部省份,犬种布鲁氏菌只在犬中出现,人类没有发现病例。结论 布鲁氏菌具有种的系统发育树特征,并且具有分离的时间、地域和宿主的特异性,这些特征对于布病的防控具有重要意义。     

心力衰竭大鼠外周血生长分化因子-15及其心肌组织中mRNA表达水平

目的研究心力衰竭(heart failure,HF)大鼠外周血生长分化因子-15(growth differentiation factor-15,GDF-15)含量变化及心肌组织GDF-15mRNA表达与心力衰竭发生发展关系。方法结扎大鼠左前降支制备心力衰竭模型,采用酶联免疫方法与实时荧光定量方法检测外周血中GDF-15及心肌组织GDF-15mRNA表达;彩色多普勒检测实验大鼠心功能。结果随着病程进展,HF大鼠外周血液GDF-15含量1452.03±76.88pg/ml高于正常大鼠外周血GDF-15含量26.53±34.06pg/ml,HF大鼠心肌组织GDF-15mRNA亦随之增高,而假手术组则表达降低,差异有统计学意义;心功能(Left ventricμlar ejection frac-tion)EF值随着外周血及心肌组织中GDF-15表达水平增高而降低。结论外周血中GDF-15含量变化及心肌组织mRNA表达调控与HF发生发展密切相关,可以作为预测心力衰竭进展新的生物标志物。     

中国2004～2006年流行性脑脊髓膜炎病原学监测

目的对中国(未包括香港、澳门特别行政区和台湾地区)2004～2005年度(2004年10月～2005年9月)、2005～2006年度(2005年10月～2006年9月)流行性脑脊髓膜炎(流脑)病原学监测结果进行分析,了解脑膜炎奈瑟菌(Nm)菌株血清群分布及变迁趋势,C群Nm菌株的分布特征和Nm菌株的耐药性。方法2004～2005、2005～2006年度共收集送检菌株1 125株,均进行复核鉴定、血清分群和药物敏感性检测。结果1 125株送检菌株中,经鉴定Nm菌株为892株,菌株送检有效存活率为79.29%。2004～2005年度有效存活572株的血清群构成为:A群26.0%,B群28.6%,C群14.9%,其它血清群11.0%;2005～2006年度有效存活325株的血清群构成为:A群33.1%,B群14.3%,C群26.3%,其它群4.8%。已有20个省(自治区、直辖市,下同)分离到C群Nm菌株,其中15个省发现C群流脑病例。A群和C群Nm菌株表现出不同的抗生素敏感性。结论应加强流脑病原学监测工作,提高Nm监测中有效菌株的数量,密切关注C群流脑扩散趋势,及时监测Nm菌株的耐药性特征。     

TaqMan荧光定量PCR检测和鉴别不同血清群脑膜炎奈瑟菌方法的建立及应用

目的 建立TaqMan荧光定量PCR检测方法,用于脑膜炎奈瑟菌不同血清群菌株的检测和鉴别.方法 设计合成7对引物和TaqMan探针,脑膜炎奈瑟菌种属特异性的基因为ctrA;不同血清群的脑膜炎奈瑟菌特异性基因分别为A群(sacB)、B群(siaD)、C群(siaD)、X群(xcbB)、Y群(synF)、W135群(synG).检测和确定不同探针和引物用于脑膜炎奈瑟菌荧光定量PCR检测的特异性、敏感性,并同时将荧光定量PCR和乳胶凝集方法应用于121份疑似脑膜炎奈瑟菌感染患者的脑脊液标本的检测.结果 ctrA、sacB、siaD(B群)、siaD(C群)、xcbB、synF、synG等7对引物和探针能准确检测和鉴定79株不同血清群的脑膜炎奈瑟菌菌株,检测灵敏性比相应的普通PCR高101～103倍,每对引物和探针反应体系中,能检测的最低全基因组DNA拷贝数分别为8、8、80、8、8、80、8;检测121份疑似脑膜炎奈瑟菌感染患者的脑脊液标本,TaqMan荧光定量PCR检测11份阳性,乳胶凝集方法检测6份阳性.结论 TaqMan荧光定量PCR方法能特异地检测和鉴定不同血清群脑膜炎奈瑟菌,具有较高的灵敏性和快速检测的特点,能提高临床疑似脑膜炎奈瑟菌感染病例的阳性检出率.     

肾透明细胞癌组织MMP-26和PDZK1表达临床意义的研究

目的:分析基质金属蛋白酶-26(MMP-26)和PDZK1在不同分化程度肾透明细胞癌(RCCC)中表达模式的测定,探讨其与RCCC的关系.方法:免疫组织化学(ABC法)和RT-PCR技术分别检测RCCC75例(A组)、肾脏良性病变的正常肾组织20例(B组)、RCCC新鲜组织30例(C组)和10例新鲜肾脏良性病变正常组织(D组)的MMP-26和PDZK1表达情况.结果:A组MMP-26表达率为82.7％ (62/75),B组为50.0％ (10/20),x2=9.183,P=0.002;A组PDZK1表达率为80.0％(60/75),B组为30.0％ (6/20),x2=18.631,P=0.000.MMP-26 mRNA在C、D组分别为0.830±0.126和0.600±0.035,t=2.931,P=0.009;PDZK1 mRNA在C和D组分别为0.950±0.055和0.570±0.043,t=4.494,P=0.000.C组MMP-26 mRNA在Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级表达分别为1.030±0.104和0.850±0.087,t=3.923,P=0.000;C组PDZK1 mRNA在Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ表达分别为0.720±0.044和0.920±0.108,t=2.724,P=0.011.相关分析MMP-26与PDZK 1 mRNA在C组表达呈负相关,r=-0.737,P=0.000.结论:MMP-26在RCCC组织中高表达,且随其分级增高减低表达降低,PDZK1在RCCC组织中高表达,随其分级增高表达增高,MMP-26与PDZK1可能与肿瘤的发生发展有关,有望成为新的肿瘤治疗靶点.     

大鼠心肌氮能神经形态学观察

目的:观察大鼠心脏各部心肌氮能神经元及氮能神经的形态及分布,为探讨氮能神经在心脏功能及其疾病发生发展中的作用提供形态学资料.方法:采用免疫组织化学SABC法显示大鼠心脏nNOS免疫阳性神经元及神经纤维的形态与分布.结果:在大鼠心肌内均有氮能神经元和神经纤维分布.胞体呈梭形、蝌蚪形和椭圆形等多种形状.nNOS免疫阳性神经纤维呈串珠状、条索状、细线状及不定形状,其走行多与肌纤维长轴平行.结论:心肌中氮能神经元及神经纤维的分布,提示氮能神经参与心脏生理功能和病理过程的调节.     

多重聚合酶链反应检测流感嗜血杆菌

目的 建立检测流感嗜血杆菌的多重聚合酶链反应(M-PCR)方法 .方法 合成扩增流感嗜血杆菌编码P6外膜蛋白基因的引物(Hi),鉴定流感嗜血杆菌种特异性;合成扩增流感嗜血杆菌编码荚膜基因的引物(Hi-cap),鉴定菌株是否具有荚膜;设计并合成6对扩增流感嗜血杆菌不同血清型(荚膜型)编码摹因的引物(Hia-Hif),鉴定菌株的血清型,以其他呼吸道常见病原体菌株做对照,应用M-PCR方法 对200株临床分离的疑似流感嗜血杆菌菌株进行鉴定和血清分型.结果 M-PCR方法 检测流感嗜血杆菌具有高度的敏感性和特异性.对照菌株应用种(Hi)、荚膜(Hi-cap)和荚膜型(Hia-Hif)特异引物没有扩增出DNA片段.M-PCR方法 检测DNA的最低检测量为0.935 Pg.对临床分离的200株疑似流感嗜血杆菌鉴定,189株为流感嗜血杆菌,与API R NH鉴定结果 一致.其中1株具有荚膜,为f血清型,与玻片凝集法鉴定结果 一致.结论 M-PCR方法 检测流感嗜血杆菌具有较高的敏感性和特异性,可用于流感嗜血杆菌感染病例标本的快速检测和病例诊断.     

局解教学实施创新教育的认识

随着科教兴国战略的实施,中共中央、国务院、教育主管部门出台了一系列决定、法规、计划,其中都突出强调了素质教育,而创业精神、创新精神的培育又是全面素质教育的核心。当前,高教界对培养创造型人才、开展创新教育的讨论方兴未艾,各抒高见,仁者见仁,智者见智,我们作为高校教师,不能不为之关心,也势必要考虑到我们今后局解教学将如何顺应形势,把教学改革引到新的高度。我们查阅一些资料,结合自己学习体会,谈谈粗浅认识,以期引出话题抛砖引玉,与同道共同进一步探讨。     

人骨髓基质细胞培养、纯化和鉴定

目的:介绍一种为临床细胞学治疗提供自体骨髓基质细胞(BMSCs)的分离纯化方法.方法:采用红细胞沉降和密度梯度离心相结合的分离纯化方法从骨髓血中分离BMSCs.台盼蓝染色实验测定BMSCs活力;对BMSCs进行CD44、CD34抗体免疫荧光显色,激光共聚焦显微镜观察.结果:BMSCs活性大于95%,纯度大于85%,细胞的纯度和均一性均符合中国卫生部第三类医疗技术的要求,已达到临床应用标准.结论:本细胞制备方法简单易行,可批量获得BMSCs,满足临床治疗的需要.