成纤维生长因子(FGF) 23基因沉默对甲状旁腺激素(PTH)促成骨细胞分化作用的影响

 目的  研究内源性成纤维生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)对甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)促成骨细胞分化作用的影响。方法  采用酶消化法分离培养新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,应用小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术(RNAi)沉默成骨细胞FGF23表达,应用MTT法和PNPP法检测细胞增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphates,ALP)活性,应用real-time RT-PCR法检测其FGF23、ALP和骨钙素(osteocalcin,OCN)等基因mRNA水平,研究PTH对培养成骨细胞和FGF23基因沉默细胞的作用。结果  rhPTH1-34对培养成骨细胞增殖促进作用明显,分化促进作用弱。1×10-10~1×10-8 mol/L rhPTH1-34 作用3天,细胞增殖率增加31.6%~50.5% (P<0.05),而细胞比活性未见明显改变。同时其ALP和OCN转录水平轻度上调,分别较对照组增加35%(P<0.05)和16%(P>0.05)。rhPTH1-34上调成骨细胞FGF23 mRNA水平(4倍),该作用可被针对FGF23特异的shRNA转染所抑制。FGF23基因沉默后PTH促分化作用明显增强,其ALP和OCN mRNA水平分别较对照组增加1.8倍(P<0.05)和5.8倍(P<0.05),显示内源性FGF23对PTH促分化的干扰作用。结论  内源性FGF23可能参与PTH促分化作用的调节,FGF23上调可干扰PTH的促成骨细胞分化作用。     

雌激素水平对大豆苷原(DAI)促大鼠成骨细胞分化作用的影响

 目的  观察基础雌激素(estrogen)水平对大豆苷原(daizein,DAI)促成骨细胞分化作用的影响。方法  采用酶消化法分离培养新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,通过培养液中添加17β-雌二醇改变培养微环境(包括空白对照)雌激素水平,应用MTT法和对硝基苯磷酸盐(p-nitropheny-phosate,PNPP)法检测细胞增殖率和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,应用real-time PCR法检测其雌激素受体α(ERa)、雌激素受体β(ERβ)和过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)γ的mRNA水平变化,研究雌激素基础水平变化对DAI促成骨细胞分化作用的影响。结果  培养环境中雌二醇水平升高致DAI的促分化作用减弱。其中100 nmol/L DAI组ALP比活性较对照组的增幅由雌激素补充前的23%分别降至8%(17β-雌二醇为100 pmol/L)和-11%(17β-雌二醇为1 000 pmol/L),显示基础雌激素水平对DAI促分化的拮抗作用。为避免培养液中血清雌激素的可能影响,进一步采用去激素血清培养(含2%去激素胎牛血清)。此时补充17β-雌二醇至100 pmol/L,DAI各剂量组细胞ALP比活性较对照组明显增加(16%~21%,P<0.05)。继续补充雌激素至1 000和10 000 pmol/L 时,其作用反而减弱。该结果显示,DAI促成骨细胞分化作用与雌激素基础水平有关,低雌激素状态(≤100 pmol/L)可增强其作用。为进一步探索其作用机制,我们初步观察了雌激素(100 pmol/L)和DAI(100 nmol/L)单独或联合作用下成骨细胞ERa、ERβ和PPARγ受体表达变化。结果显示,100 pmol/L 17β-雌二醇明显上调ERβ表达,并部分抵抗DAI下调ERβ的作用。结论  DAI的促成骨分化作用与基础雌激素水平有关,低雌激素(≤100 pmol/L)状态有利于DAI的促分化作用,而雌激素水平升高可减弱其促分化作用。     

大豆苷原（DA）对成骨细胞雌激素受体（ER）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）

 目的 研究大豆苷原(daidzein,DA)对成骨细胞雌激素受体(estrogen receptor,ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ (peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)表达的调节作用,并观察雌激素对这种调节的影响。方法 小鼠成骨细胞MC3T3-E1体外低血清(α-MEM,含2% FBS)培养,分别用0.1和10 μmol/L的DA处理,采用实时定量PCR或Western blot分析细胞ERα、ERβ和PPARγ的表达变化。加入浓度均为0.1 μmol/L的ER拮抗剂ICI182780或PPARγ拮抗剂GW9662,观察ER和PPARγ在DA调节中的作用。为观察雌激素的影响,采用无血清培养,在10 nmol/L 17β-雌二醇(E2)条件下研究DA对细胞受体表达的作用。结果 DA抑制体外培养成骨细胞ER表达,而刺激其PPARγ表达。0.1和10 μmol/L的DA分别下调ERα 蛋白水平44%和38% (P<0.05),下调ERβ蛋白水平50%(P<0.05)和31% (P<0.05),上调PPARγ 74%和78% (P<0.05)。 ICI182780可阻断DA对ERα转录水平的抑制作用,DA对成骨细胞ERβ mRNA水平的下调无统计学意义(P=0.087 4);GW9662可阻断DA对PPARγ表达的上调作用,提示成骨细胞ER和PPARγ参与自身表达调节。在10 nmol/L 17β-雌二醇条件下,DA对无血清培养的成骨细胞ERα转录水平的抑制作用由28.0%～29.6%(P<0.05)增强至74.0%～82.8%(P<0.01),其对ERβ表达的抑制作用也明显增强,而对PPARγ的上调作用几乎丧失。结论 DA可通过调节ERs和PPARγ等受体表达间接影响成骨细胞的药物反应,雌激素可明显影响DA的受体调节作用。DA对细胞受体表达的调节作用可能是其对成骨细胞时间相关双相调节的重要机制之一。     

体外培养人成骨细胞BGP、IGF-1基因表达的增龄改变

目的　探讨体外培养不同年龄组人成骨细胞BGP、IGF 1基因表达的增龄改变规律。方法　选择≤ 5岁、3 0～ 4 0岁、5 0～ 60岁、≥ 70岁 4个年龄组的松质骨 ,用 1∶1DMEM HamF 12培养液进行培养。不同年龄组两代人成骨细胞培养至 14d抽提细胞内总RNA ,应用RT PCR方法半定量检测BGP、IGF 1基因表达情况 ,并进行各年龄组比较。结果　各年龄组体外培养至 14d的两代人成骨细胞所抽提的细胞内总RNA量随增龄而降低 (男r=- 0 .783 ,女r=- 0 .873 ,均P <0 .0 0 1) ;各年龄组成骨细胞均检测到BGP与IGF 1的mRNA表达。BGP与IGF 1mRNA表达量于幼年组较低 ,3 0～ 4 0岁最高 ,之后随年龄增长逐渐降低 ,其表达量和年龄明显相关 (BGP男r2 =0 .3 2 8,女r2 =0 .3 0 1;IGF 1男r2 =0 .3 0 3 ,女r2 =0 .3 3 8,均P <0 .0 5 ) ,性别之间未见明显差异。结论　体外培养人成骨细胞的总RNA量随增龄而降低 ,不同年龄组人成骨细胞均表达BGP、IGF 1mRNA ,其表达量随增龄而改变     

中医药防治骨质疏松症研究进展

中医药防治骨质疏松症的研究日益受到重视,中药制剂因其天然药源和疗效肯定等优点,在我国具有独特的优势。近10年来,中医药防治骨质疏松症的研究取得了不少的进展,目前文献报道的防治骨质疏松症的中药制剂达60多个,有的已通过了国家新药审批,而绝大多数尚处于实验或临床研究之中。本文就     

91例低骨旷含量者中医辨证初探

随年龄增长,骨皮质中骨矿含量逐渐丢失,出现骨质疏松。在老年人中患骨质疏松症的比例颇高,成为老年衰老的重要表现。然而,我国目前对老年骨质疏松症的诊治研究报     

50GyX射线局部照射卵巢对大鼠骨代谢的影响

卵巢功能衰退可致明显骨质丢失．本文作者应用５０ＧｙＸ射线局部照射大鼠卵巢，造成卵泡闭锁，雌激素低下，从而引起尿Ｃａ／Ｃｒ、Ｈｏｐ／Ｃｒ和血ＡＬＰ升高，呈明显负钙平衡，伴骨形成作用；胚骨上端１／３段形态计量学分析见骨小梁数和骨小梁体积减少，骨小梁间隙增加，呈松质骨丢失的病理特点．研究表明卵巢的辐射效应对骨代谢有明显影响．     

破骨细胞的起源及影响其分化发育的因素

破骨细胞的起源及影响其分化发育的因素于明香１王洪复２（１泰山医学院２７１０００２上海医科大学）弄清破骨细胞（Ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ，ＯＣ）的起源是研究骨质疏松症病因与防治的关键环节。近２０年来，人们从在体及离体骨髓细胞和脾细胞培养等方面对破骨细胞的起...