CBLB502蛋白原核表达及辐射防护作用验证

目的 原核表达并纯化TLR5受体的激动剂CBLB502蛋白,验证其辐射防护作用。方法 采用pET28b原核表达系统表达CBLB502蛋白,利用Ni-NTA亲和层析柱亲和层析纯化CBLB502蛋白,经报告基因检测方法结合动物实验评价纯化蛋白活性。结果 成功表达并纯化CBLB502蛋白,纯度可达95%以上,能够激活NF-κB报告基因,可以提高9 Gy照射小鼠存活率,对照组小鼠全部死亡,CBLB502蛋白预防组全部存活。结论 成功表达并纯化CBLB502蛋白,并验证其对小鼠的辐射防护作用。     

红系分化相关基因相互作用蛋白质的分离与鉴定

目的制备红系分化相关基因(erythroid differentiation-associated gene,EDAG)蛋白的单克隆抗体,利用免疫沉淀联合质谱技术对EDAG相互作用蛋白质进行分离与鉴定。方法构建EDAG原核表达载体,通过诱导、表达、纯化获得EDAG融合蛋白,杂交瘤技术建立分泌EDAG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,利用Western印迹筛选阳性杂交瘤细胞,免疫小鼠得腹水,最后用免疫共沉淀与质谱联合鉴定EDAG相互作用蛋白。结果纯化获得EDAG重组蛋白,筛选出4株分泌EDAG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并制备了腹水。该抗体均可用于内源EDAG蛋白的检测,其中两种抗体可用于免疫共沉淀实验,运用质谱技术筛选获得EDAG候选相互作用蛋白。结论利用EDAG单克隆抗体,筛选到EDAG候选相互作用蛋白质13种,涉及细胞增殖及转录等过程,为EDAG的功能研究及其分子机制的阐明提供了新的线索。     

化合物2G2抑制K562细胞增殖并诱导凋亡

目的建立基于白血病细胞K562生长活力的小分子化合物筛选的高通量筛选模型,筛选特异性针对慢性粒细胞白血病（CML）增殖抑制的先导化合物。方法以K562细胞系为实验对象,在96孔板上,利用MTS/PMS比色实验测定化合物对细胞活力的影响,建立具有抑制K562细胞活性的化合物筛选模型,并应用该模型完成了1000多种小分子化合物的筛选,对筛选得到的活性化合物通过3H-TdR掺入实验、细胞生长曲线、细胞周期和凋亡检测等实验进行验证和分析。结果建立并利用96孔板药物筛选模型,筛选获得一个具有一定特异性抑制K562细胞增殖的化合物——2G2。结论成功建立了抗白血病药物的筛选方法,为白血病治疗药物的开发研究提供了新的筛选模型。     

外周血淋巴细胞γ-H2 AX的RL／G值分析：一种新的用于辐射事故伤员分类诊断和剂量估算的方法

在应对大规模的核与辐射事故过程中,对伤员进行快速分类诊断和快速剂量估算,是核事故医学救援的重要问题之一。目前,以染色体畸变为代表的生物剂量估算方法并不能满足大规模核与辐射事故中批量伤员的分类诊断和快速剂量估算的需要。近年来的研究报道表明,外周血淋巴细胞中γ-H2AX分析是一种非常有潜力的生物剂量估算方法。目前,对于外周血淋巴细胞中γ-H2AX的分析主要有两种方法：①荧光显微镜分析细胞中γ-H2AX聚集点。这种方法准确度高,灵敏度高,但是分析速度慢;②采用流式细胞术结合细胞免疫荧光方法分析细胞中γ-H2AX含量,这种方法分析速度快,但是实验重复性差,存在个体间和个体内差异大的问题,降低了其实际应用价值。王治东等的“Ratio of γ-H2AX level in lymphocytes to that in granulocytes detected using flow cytometry as a potential biodosimeter for radiation exposure”一文建立了一种基于流式细胞快速分析外周血淋巴细胞中γ-H2AX含量的新方法。该方法保留了流式细胞分析的快速、高通量等优点,同时解决了目前流式细胞分析外周血淋巴细胞γ-H2AX方法存在个体间和个体内差异大的问题,该研究对生物剂量计领域具有重要的意义。     

Hp/DNA双参数分析放射损伤小鼠骨髓细胞周期、凋亡和Hp

目的：建立结合珠蛋白(Hp)／DNA双参数流式细胞技术，以探讨放射损伤小鼠骨髓细胞中Hp含量与细胞周期和凋亡的关系。方法：小鼠骨髓细胞经70％乙醇固定后，Triton-X100破膜，间接免疫荧光技术标记Hp，PI标记DNA，上流式细胞仪测试。用ModFit软件设双门法分析Hp^ 和Hp^-细胞的细胞周期和凋亡，CELLQuest软件分析Hp^ 细胞比例。结果：γ射线照射后6h小鼠骨髓有核细胞中Hp^ 细胞的比例明显高于未照射对照组，骨髓细胞的凋亡来自于Hp^-细胞，Hp^ 细胞未见凋亡，Hp^-细胞发生的G2/M阻滞比Hp6 细胞严重。这些信息是单用Westem印迹法或单纯DNA分析所不能提示的。结论：Hp/DNA双参数流式细胞技术可用于分析Hp与细胞周期和凋亡的关系，是一种快速、客观的分析方法。     

寡聚核苷酸芯片技术筛选电离辐射后大鼠PC12细胞的差异表达基因

目的为探讨中枢神经系统辐射损伤的分子机理，采用寡聚核苷酸芯片技术研究16Gy^60Coγ射线照射前后PC12细胞基因的表达变化。方法采用大鼠寡聚核苷酸芯片技术进行辐射相关基因的筛查，芯片探针进行荧光交换标记，且每个基因重复3次点阵；分析结果，选取感兴趣基因进行RT-PCR半定量验证。结果基因芯片筛查有40个差异表达基因，其中上调基因37个，下调基因3个。这些差异基因主要涉及细胞周期、代谢、信号转导、免疫与应激、细胞增殖、生长发育及细胞凋亡等多个方面。RT-PCR结果显示照射后48hPC12细胞OAS1、GARG16和IL6 mRNA表达水平均上调，与芯片结果一致。结论PC12细胞可用于神经细胞辐射后信号转导、细胞代谢、生长发育、应激反应以及细胞增殖等方面的研究。     

提前获取早熟凝集染色体环快速估算受照剂量的可行性研究

目的：缩短培养时间,拟合γ射线诱发离体人外周血淋巴细胞早熟凝集染色体环（premature condensation chromosomerings,PCC-R）的剂量-效应曲线,探讨快速估算生物剂量的可行性。方法：~（60）Coγ射线照射离体人外周血,剂量为0、1、3、6、10、15、20 Gy,照后分别培养44和48 h,收获前1 h加入冈田酸,分别计数PCC-R频率,拟合受照44与48 h的剂量-效应曲线并进行比较。结果：培养44 h较48 h获得的分析细胞数略少,PCC-R率略低于48 h结果（各个剂量点间的差异均无统计学意义）。外周血淋巴细胞PCC-R率随照射剂量的增加而增加,0～15 Gy剂量范围内二者之间满足直线方程Y=-0.015 2＋0.062 5D（R~2=0.983 9）。结论：缩短培养时间至44 h,PCC-R仍然可以用于15 Gy以内的辐射事故的剂量估算。     

1名女大学生退学的个案报告

女学生22岁,系大学机械系热能工程专科96级学生,1997年因多次夜不归宿,并与多人发生不正当性行为,受到勒令退学处分。在处理这一事件过程中,我们分析认为,导致这一状况,家庭成长环境不良和生活突发事件影响是外因,个人认识上的偏差以及道德法律观念淡薄是内因。1　家庭生活环境及不良教养方式导致严重的自卑心理在事发之后,女生强调的一句话就是:“求求你们,千万别告诉我妈,她会受不了的”;“我对不起她,她这辈子太苦了”。其母亲是农村小学民办教师,其父亲长期在外做厨师,1996年因身体不好呆在家里。有一个姐姐早已出嫁。家庭生活很困难。…     

STAT3RNAi联合γ射线照射对U251细胞增殖的影响

目的 构建特异性抑制信号转导与转录激活因子3 (STAT3)的小干扰RNA(siRNA)表达载体并检测联合 ⁶⁰Co γ射线照射对U251细胞STAT3表达及细胞增殖的抑制作用。方法 设计、合成STAT3特异性的19 bp短链寡核苷酸,经退火形成双链DNA片段,克隆到pSilence2.1-U6-H1载体中,构建STAT3特异siRNA的表达载体, HindⅢ和BamHⅠ双酶切及测序鉴定重组体,并转染U251细胞,免疫印迹法(Western blot)检测STAT3 mRNA和蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性,克隆形成率及MTT实验确定放疗剂量。结果 经双酶切与测序鉴定成功构建pSilence2.1-STAT3表达载体,转染星形胶质瘤细胞株U251细胞可显著抑制细胞中STAT3 蛋白的表达水平;确定2 Gy为放疗剂量。转染pSilence2.1-STAT3,细胞增殖活性较未转染U251细胞显著降低(P<0.05),联合 ⁶⁰Co γ射线照射U251细胞增殖活性单独转染进一步显著降低(P<0.05)。结论 运用pSilence2.1-U6-H1载体构建的pSilence2.1-STAT3表达载体可有效抑制STAT3的表达及星形胶质瘤细胞的增殖; 联合2 Gy ⁶⁰Co γ射线照射可增加抑制效果。     

GM-CSF在辐射后的变化及其在辐射损伤治疗中的应用

GM-CSF是较早发现的一种造血生长因子,在某些刺激条件下可由多种细胞合成分泌,能够刺激骨髓造血祖细胞增殖和分化,刺激中性、嗜酸性粒细胞及巨噬细胞增殖和成熟,也可以促进巨核细胞生长,对红细胞生长有辅助调节作用。GM-CSF水平在辐射后动物体内发生明显的变化,对辐射损伤后造血的恢复具有很好的治疗效果。