乙肝病毒基因型及病毒变异对慢性肝病进展的影响

目的 进一步研究HBV基因型及病毒变异与慢性肝病进展的关系.方法 用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)以及部分PCR产物测序的方法对401例慢性HBV感染者.包括112例HCC患者(HCC组),129例无症状携带者(ASC组),70例肝硬化患者(LC组)和90例慢性肝炎患者(CH组)进行HBV基因分型以及BCP和PC变异检测.结果 401例慢性HBV感染者中181例发生B基因型感染,220例发生C型感染.HCC组中C型分布高于其他3个疾病组;C基因型感染者BCP变异多于B基因型;B基因型感染者PC变异多于C基因型;同时BCP变异发生率随着病程进展而递增:在ASC组、CH组、LC组和HCC组里的BCP变异阳性率分别为22.4%、35.0%、50.0%、74.1%.C1与C2亚型相比,C1有较高BCP变异阳性率,而C2有较高PC变异发生率.结论 BCP变异与肝病进程存在依从关系,因此BCP变异的检测对慢性HBV感染的疾病进展和临床结局的评估有重要意义.     

SARS冠状病毒多聚酶基因临床检测方法的建立

目的 分析SARS冠状病毒广东株多聚酶基因片段的异质性。建立RT-PCR检测SARS冠状病毒的方法，为SARS的快速诊断提供依据。方法 合成针对SARS冠状病毒多聚酶基因区段的特异性引物，从广东省SARS病人及疑似病人标本中提取RNA，经反转录和巢氏PCR扩增出相应大小的DNA片段。对这些片段克隆后进行DNA序列分析，并将序列与SARS冠状病毒和其他已知冠状病毒进行同源性分析。结果 从多例SARS病人痰、咽拭子或血液标本中得到RT-PCR阳性片段，随机选取其中8例经克隆和DNA序列分析证实均为SARS冠状病毒序列(同源性100％)，而所有阴性参照标本RT-PCR均为阴性。克隆片段BNll09与已知冠状病毒在核苷酸和氨基酸水平进行分析显示，该片段与牛冠病毒(bovinecoronavirus，BCV)和鼠肝炎病毒(murine hepatitis virus，MHV)同源性最高，在氨基酸水平上同源性高达75％。结论 SARS冠状病毒多聚酶基因片段BNll09的保守性极强，适合建立RT-PCR法检测SARS冠状病毒。     

生物素-亲和素系统控制细胞在表面的粘附力

粘附作用具有重要的生理学意义。细胞与表面的粘附是产生多种生物效应（包括生长、分化、迁移等）的基本要素。比如,细胞与表面粘附较强时,细胞通常生长;细胞与表面粘附减弱时,细胞发生分化;而细胞要进行分裂,首要的是先去粘附。粘附可以作为控制细胞行为的手段,这在生物工程方面有重要的应用前景。通过对人工血管的内外表面粘附性质的选择性的控制,可以防止由于血小板粘附造成的血栓,淋巴细胞粘附造成的免疫排斥,而增加宿主其它细胞的粘附,可促进人工血管的整合与重建。因此,研究细胞六局面的粘附作用,具有重要的意义。而其中…     

SARS冠状病毒结构蛋白在大肠杆菌中的表达

目的构建SARS冠状病毒主要结构蛋白原核表达载体,并探讨各结构蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达情况及其病毒致病机制。方法从SARS病人组织中抽提出RNA,经RT-PCR获得SARS冠状病毒刺突蛋白(S)、核衣壳蛋白(N)和膜蛋白(M)基因,将S基因的两个区段、N基因和M基因分别克隆至表达载体pET-32和pET-28上,转化大肠杆菌13121,利用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE检测表达情况。结果成功构建了SARS冠状病毒重组蛋白的表达载体pET32-S1、pET32-S2、pET32-N、pET32-M、pET28-S1、pET28-S2和pET28-N;N蛋白表达量最高,S2蛋白表达量次之,S1蛋白和M蛋白表达不明显。结论SARS病毒的N蛋白较容易在原核细胞中表达,而S蛋白和M蛋白可能由于有较多的半胱氨酸或跨膜区而不易在体外表达。N蛋白和S蛋白均有较好的抗原性。前者更适用于SARS的早期诊断。     

利用自组装单分子层（SAM）研究细胞和表面的相互作用

研究细胞和表面相互作用具有重要意义,利用长链的烷硫醇在金表面或烷基硅烷在羟基化表面形成的自组装单分子层及其微格式化的表面允许以分子水平研究并控制细胞和表面的相互作用,我们概述了自组装单分子层及其格式化表面研究细胞和表面相互作用的最新进展。     

HBV信号肽区热点变异真核表达载体的构建及在Cos7细胞中的表达

探索ＨＢＶ信号肽区热点变异对ＨＢｅＡｇ表达和基因组复制的影响。采用分子生物学方法 ,设计引入ＫｐｎⅠ和ＨｉｎⅢ酶切位点的引物扩增ＨＢＶ的前Ｃ/Ｃ片段 ( 1814 2 4 52 ) ,经ＫｐｎⅠ和ＨｉｎⅢ酶切后连于ＥＢＯ真核表达载体 ,利用定点突变技术对连接载体进行Ａ1896 Ａ1899点的定点诱变。将突变前后的质粒以脂质体介导法转染Ｃｏｓ 7细胞 ,检测突变前后ＨＢｅＡｇ表达的改变。经错配ＰＣＲ ＲＦＬＰ和测序分析 ,确定突变的克隆。突变前后的质粒转染Ｃｏｓ 7细胞经稳定表达 ,结果未突变的ＥＢ0 前Ｃ/Ｃ重组质粒ＨＢｅＡｇ表达为强阳性 …     

结直肠癌合并肠梗阻56例诊治分析

目的：总结结直肠癌合并肠梗阻的诊断和治疗经验,探讨其漏诊原因及手术方法的选择。方法：回顾分析我院2001年2月-2007年5月56例梗阻性结直肠癌病人的临床特点及根据患者不同情况分别行一期手术和分期手术。结果．56例患者均经手术治疗,出现并发症4例,死亡1例,病死率为3．6％,其余均痊愈出院。结论：结直肠癌合并肠梗阻临床特点是：左侧结肠梗阻多见;晚期病例多见;老年患者多见。外科治疗的原则是解除梗阻,尽量切除肿瘤。应根据患者的具体情况选择合适的手术方式。     

乙型肝炎病毒核心启动子部分缺失真核表达载体的构建及对病毒抗原表达的影响

乙型肝炎病毒核心启动子 (ＣＰ)部分缺失变异已证实在几种ＨＢＶ感染的临床现象中存在[1 3 ] 。我们在一组 14例血清抗 ＨＢｅ阳性的无症状携带者中 ,发现有 9例在ｎｔ174 8(或ｎｔ174 7)至ｎｔ176 7间 2 0 (或 2 1)个核苷酸的缺失 ,此 9例中有 5例合并有ｎｔ1896Ｇ→Ａ点变异[4] 。本研究在此基础上 ,拟构建这种ＣＰ 2 0 / 2 1ｂｐ缺失及合并存在Ａ1896点变异的ＨＢＶ全基因重组真核表达载体 ,并转染ＨｅｐＧ2细胞 ,以研究此类变异株对病毒抗原表达的影响。一、材料与方法1 材料 :ＥＢＯ ｐｐｌｐ质粒由美国Ｓｃｒｉｐｐｓ研究所Ｆｒａｎ…     

HBV核心启动子部分缺失重组质粒的构建

目的　构建乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核心启动子（ＣＰ）部分缺失的真核表达质粒。方法　利用线性化的、从ＣＰ上游顺 序开始且含完整转录单元的ＨＢＶ 基因克隆（Ｐ３．８Ｉ质粒）为工具,采用分子克隆、人工定点突变、ＰＣＲ－ＲＦＬＰ,鉴定和测 序分析等技术构建目的载体。结果　成功构建了ＨＢＶ全基因ＣＰ ２０／２１个ｂｐ缺失（ｎｔ １７４８／１７４７－１７６７）和ＣＰ２０／２１个ｂｐ 缺失＋１８９６热点变异的重组真核质粒表达质粒,并经ＰＣＲ－ＲＦＬＰ序列分析证实。结论　此重组真核表达质粒构建可为 体外进一步研究上述变异的生物学意义奠定基础。