输液泵在改良人源多肽抗生素LL-37表达量的应用和探析

目的改良毕赤酵母发酵条件,提高人源多肽抗生素LL-37表达量。方法用无油气体压缩机供氧,电脑输液泵控速给养料的方法,对毕赤酵母发酵进行改良。结果改良方法提高了毕赤酵母表达量约1.65倍。结论无油气体压缩机对发酵中氧气的供给、电脑输液泵控速给养料的改良方法,提高了LL-37的表达量。     

两种方法测定血清白蛋白的临床应用评价

目的分析电泳法和溴甲酚绿法检测白蛋白及白蛋白/球蛋白比值的相关性。方法本院健康体检人员及相关疾病人员102例,采用Helena全自动电泳仪和日立7600-020全自动生化分析仪分别进行测定,得出总蛋白、白蛋白及A/G比值,对上述结果进行相关性分析。结果溴甲酚绿法与电泳法进行比较:健康组ALB及A/G相关系数r分别为0.98、0.97,(P>0.05);肝病组ALB及A/G相关系数r分别为0.90、0.91(P>0.05);肾病组ALB及A/G相关系数r分别为0.74、0.73(P<0.05);多发性骨髓瘤组ALB及A/G相关系数r分别为0.52、0.55(P<0.05)。结论对健康人和肝病患者两种方法检测白蛋白有相关性,电泳法依据物理性质分离蛋白质,结果更具客观性,在肾病和多发性骨髓瘤病人的测定结果更加稳定可靠。     

血清肌钙蛋白I质控物的研究

目的评价自制血清肌钙蛋白I(cTnI)质控物均匀性和稳定性。方法按实验设计收集混合血清,分装-20℃贮存。参照CNAS-GL03《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》,对质控物的均匀性进行评价;运用恒温加速试验研究稳定性。结果质控物均匀性差异无统计学意义(P0.05)。恒温加速试验显示,血清cTnI降解随时间变化符合化学动力学一级反应,根据Arrhenius方程推测4℃贮存7d,-20℃贮存有效期为19个月;监测质控物9个月,与恒温加速试验结果一致。结论自制血清cTnI质控物均匀性、稳定性良好,可用于临床室内质量控制。     

人源多肽抗生素LL-37真核表达载体的构建

目的 构建抗菌肽LL-37的表达载体pPIC9-LL-37,转化毕赤酵母GS115以获得表达LL-37的工程菌.方法 通过重叠区扩增法人工合成抗菌肽LL-37的基因,定向克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9上,转化大肠杆菌DH5α,提取质粒,PCR鉴定及序列分析后转化毕赤酵母GS115.MM、MD平板筛选His^＋Mut^＋、His^＋Mut^-表型,PCR扩增鉴定基因的插入.结果 PCR鉴定及序列分析表明抗菌肽LL-37基因正确插入载体pPIC9,MM、MD平板筛选及PCR鉴定获得10个His^＋Mut^＋、9个His^＋Mut^-克隆.结论 获得含LL-37基因的工程菌.     

PCR-RFLP检测载脂蛋白CⅢ基因T-455C多态性方法的建立及应用

目的：建立聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术（PCR-RFLP）检测栽脂蛋白CⅢ（apoCⅢ）T-455C多态性的方法,探讨南通汉族人群中apoCⅢ多态性与高三酰甘油血症（HTG）的相关性。方法：用PCR扩增apoCⅢ基因启动子区包含T-455C多态性在内的DNA片段,扩增产物用限制性内切酶BseG Ⅰ酶切后电泳,分析apoCⅢ基因型,同时采用生化方法检测研究对象的血脂和载脂蛋白水平。结果：检测到3种基因型,分别为-455TF、-455TC和-455CC。HTG患者组和健康对照组apoCⅢ-455C等位基因频率（50．44％比33．11％）和apoCⅢ-455CC基因型频率（26．55％比12．16％）均有显著差异（P〈0．01）;C等位基因携带者患HTG的风险是非携带者的2．06倍（95％CI：1．31～3．24）;-455C等位基因携带者有较高的三酰甘油（TG）和apoCⅢ蛋白水平（P〈0．05）。结论：PCR-RFLP是一种快速、敏感的分析apoCⅢ基因启动子区T-455C多态性的方法;apoCⅢ-455C等位基因与HTG的发生相关。     

抑癌基因PTEN与人类肿瘤的研究进展

PTEN基因是1997年第一个克隆得到的具有磷酸酶活性的抑癌基因，为肿瘤抑制基因家庭的新成员。它具有蛋白质酪氨酸磷酸酶催化区域，并与细胞骨架中的张力蛋白、辅助蛋白具有较高的同源性。其定位于人染色体杂合性缺失高发区10q23.3，在成人胶质细胞瘤、前列腺瘤等多种肿瘤，尤其是晚期恶性肿瘤中存在突变。就PTEN基因的结构、功能、突变与人类肿瘤的关系作一综述。     

早期B细胞因子3在肝癌中的表达及对HepG2细胞株作用的研究

目的 研究肝癌及远端非痛肝组织中早期B细胞因子3(EBF3)mRNA与蛋白质表达差异及临床意义,并研究EBF3-EGFP(增强型绿色荧光蛋白)融合蛋白表达对肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响.方法 采用荧光定量PCR技术检测20例配对肝癌及远端非癌肝组织EBF3 mRNA水平,Western blot检测5例配对标本EBF3蛋白表达.将EBF3与EGFP融合蛋白表达载体pEGFP/EBF3转染HepG2细胞株,倒置荧光显微镜观察EBF3-EGFP融合蛋白表达,流式细胞术测定转染后不同时间S期细胞分数(SPF)和增殖指数(PI).结果 20例肝癌和配对远端非癌肝组织中EBF3mRNA与β2M mRNA的埘数比值分别为0.55±0.12和0.22±0.23,差异有统计学意义(t=5.69,P<0.001);Western blot结果表明EBF3蛋白主要表达于细胞核中,5例肝癌组织核蛋白中EBF3条带平均灰度值为26.35±14.06,与远端非癌肝组织(7.86±8.47)相比差异有统计学意义(t=2.52,P=0.036);将pEGFP/EBF3导入HepG2细胞株24 h后,可观察到EBF3-EGFP融合蛋白主要表达于核内.转染pEGFP/EBF3后48 h和72 h,SPF和PI均显著高于pEGFP转染细胞组.结论 肝癌组织中EBF3 mRNA及其蛋白表达均上调,EBF3基因导入HepG2促进细胞株增殖,EBF3在肝癌中的作用有待进一步研究.     

鬼臼乙叉甙对SHG-44胶质瘤细胞表达β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅴ后粘附相关分子表达的影响

目的　研究人脑星形胶质细胞瘤SHG 4 4细胞表达 (β 1,4 半乳糖基转移酶Ⅴ (beta 1,4 galactosyltransferaseⅤ ,β 1,4 GalTⅤ )后对化疗药物敏感性的影响 ,分析鬼臼乙叉甙 (VP16 )处理表达 β 1,4 半乳糖基转移酶Ⅴ的SHG 4 4细胞后其细胞粘附作用相关因子水平的变化。方法　用 12 0 μmol/L的VP16处理转染了正义、反义 β 1,4 GalTⅤ和空载体的SHG 4 4细胞 2 4h后 ,采用westernblot检测整合蛋白 β1表达变化及局部粘着斑激酶 (focaladhesionkinase,FAK)的蛋白水平和FAK的酪氨酸磷酸化水平。结果　在未经VP16处理的 3株SHG 4 4细胞中 ,FAK的蛋白水平没有明显改变 ,而整合蛋白 β1的蛋白表达在转正义 β 1,4 GalTⅤ的细胞中最高 ;经VP16处理后 ,SHG 4 4细胞中整合蛋白β1的表达水平增高 ,FAK及其磷酸化水平下降。但整合蛋白β1,FAK及其磷酸化水平随细胞中 β 1,4 GalTⅤ表达水平不同而变化。 结论　VP16处理对表达不同水平的β 1,4 GalT Ⅴ的SHG 4 4胶质瘤细胞的粘附影响有所不同 ,提示胶质瘤表达 β 1,4 GalTⅤ不仅与肿瘤的恶性行为有关 ,而且与肿瘤的化疗敏感性有关。     

2型糖尿病患者载脂蛋白CⅢ基因多态性与高三酰甘油血症关系研究

目的探讨中国南通地区汉族2型糖尿病（T2DM）患者中高三酰甘油血症（HTG）是否与载脂蛋白CⅢ（apoCⅢ）基因启动子区T-455C和C-482T多态性有关。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测212例T2DM患者apoCⅢ-455和-482位点多态性的基因型和等位基因频率,同时检测相关生化指标。结果 apoCⅢT-455C和C-482T多态性位点之间存在强连锁不平衡（D＇〉0.7,r2〉0.6,P〈0.0001）。等位基因以常见等位基因-455T和-482C为主,-455和-482位点基因型均分别以杂合型-455TC和-482CT为主。此2个多态性位点等位基因和基因型频率在正常三酰甘油（NTG）组和HTG组之间差异均无统计学意义（P〉0.05）。-455CC和-455TC型患HTG的风险与野生型-455TT相比差异无统计学意义（P〉0.05）,比值比（OR）[95%可信区间（CI）]分别为0.79（0.31～1.99）和1.09（0.52～2.28）。-482TT和-482CT型患HTG的风险与-482CC相比差异也无统计学意义（P〉0.05）,OR（95%CI）分别为1.33（0.53～3.34）和1.65（0.78～3.51）。所有相关生化指标在这2个多态性位点各基因型之间差异也均无统计学意义（P〉0.05）。结论在中国南通地区汉族T2DM患者中,未发现apoCⅢ基因启动子区多态性与HTG有关联,与非T2DM人群中研究结果不一致。     

凝血酶促进结肠癌SW480细胞生长的研究

目的探讨凝血酶对结肠癌SW480细胞增殖及细胞周期的影响。方法将20 nmol/L、100 nmol/L、500nmol/L的凝血酶作用于SW480细胞48 h,以未处理组（0 nmol/L）作为对照。CCK-8（cell counting kit-8）法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期变化;RT-PCR检测蛋白酶活化受体-4（protease-activated receptor-4,PAR-4）的mRNA表达;Western blotting检测NF-κB p50蛋白表达。结果在20-500 nmol/L浓度范围内,凝血酶可剂量依赖性的促进SW480细胞的增殖;细胞周期显示G0/G1期细胞百分数减少,S期及G2/M期细胞百分数增加,表明凝血酶可诱导细胞从G0/G1期向G2/M期发展,从而促进细胞增殖;随着凝血酶浓度的增加,PAR-4 mRNA及NF-κB p50蛋白含量也有不同程度的增加。结论在20-500 nmol/L浓度范围内,凝血酶可促进结肠癌SW480细胞的增殖,加速细胞周期进程;其作用可经PAR-4介导,并与NF-κB信号通路活化有关。