胚胎干细胞的生物学特性及其应用

198 1年Evans和Kaufman首次建立了小鼠胚胎干细胞系[1] 。关于人的胚胎干细胞最早文献记载是在 1994年 ,ES细胞是从人胚泡的ICM中分化而成的 ,但只传了二代未能建系成功[2 ] 。 1998年JamesThomson等[3] 从人胚泡的ICM分离出ES细胞并建系成功 ;同年JohnGearhart等[4 ] 从 5～ 9W流产的胎儿生殖嵴中分离出人胚胎生殖细胞 (embryonicgermcell,EGC) ,这些都为ES细胞的研究奠定了基础。由于ES细胞具有全能分化潜能和无限扩增能力 ,在体外可分化成各种细胞和组织用于进行替代治疗 ,因此ES细胞成为 2 1世纪生命科学研究领域的热点之一…     

7-9岁替牙期前牙反矫治体会

前牙反牙合在正畸临床中是一种常见的错牙合畸形对口腔功能、颜面的发育、美观等危害较大。它妨碍口腔颌面部软硬组织的正常发育,随着年龄的增长反牙合和颌面部的畸形愈来愈明显,可诱发诸多错牙合畸形和和颌面部改变,它不但影响咀嚼功能和美容,还严重影响幼儿颌骨的正确发育,对儿童的健康危害甚大。拖延至成年,矫正更加困难。因此,如何尽早有效地矫治前牙反牙合尤为重要。1临床资料1.1一般资料:替牙期前牙反牙合17例,其中男8例,女9例。┼反牙合10例,┼反牙合7例,年龄均在7￣9岁之间。根据临床错牙合畸形的分类,中性反牙合5例,功能性反牙合3…     

浅表性膀胱癌的灌注治疗

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，其中70％～80％是以反复复发为特点的浅表性膀胱癌。防止肿瘤发生、进展和侵袭转移是降低膀胱癌复发率和病死率的关键。对浅表性膀胱癌灌注治疗的研究进展进行综述。     

人成纤维细胞饲养层的制备及其对胚胎干细胞生长支持作用

 目的 为建立不含动物细胞成分的人胚胎干细胞( human embryonic stem cell, hESc)体外培养系统，本实验欲用人包皮成纤维细胞(human postnatal foreskin fibroblasts, hPFF)制备细胞饲养层并观察其对hESc体外生长的支持功能及生物学特性的维持作用。方法 利用儿童阴茎包皮环切术后遗弃包皮组织分离培养成纤维细胞，纯化增殖细胞，采用35Gyγ射线照射灭活法制备成饲养层。将hESc（HS181细胞株）接种在该饲养层上，连续传代至20代，倒置显微镜观察其形态学变化，测定其细胞碱性磷酸酶活性，类胚体形成实验及干细胞转录因子表达，严重联合免疫缺陷的小鼠(severe combined immune deficiency mice, SCID)体内畸胎瘤形成及体内全能分化特性实验对hESc生物学特性进行鉴定。 结果 hPFF体外培养过程中生长增殖旺盛，连续传20代以上能保持正常细胞形态学和生物学特性。经γ射线照射使其停止增殖，24h内能较好地保持细胞活力和形态学特征，具备饲养层细胞基本条件。HS181 hESc在hPFF上传到20代任能较好地保持未分化状态，细胞呈克隆性生长，高度表达碱性磷酸酶及Oct-4、Nanog等胚胎干细胞转录因子；悬浮法培养连续传20代的hESc可获得由3个胚层细胞所形成的类胚体（Embryoid bodies, EB）结构, 可检测到CD90、Flt-1、Nestin基因的表达，证明得到的类胚体中含了3个胚层细胞，说明hESc具有体外多能干性特征。体内全能分化实验显示：将第20代的hESc接种到SCID小鼠体内,6周后可形成畸胎瘤,组织学切片分析其包含了源于全部3个胚层的各种分化细胞,直接证明其具有体内多向分化的全能性。结论 hPFF可作为一种来源丰富，取材方便的人源化饲养层细胞，能有效地支持hESc体外生长。克服了目前hESc建系和体外培养过程中使用动物细胞饲养层带来的异种蛋白污染和致病微生物的危险，初步解决了hESc临床应用的生物安全性问题。     

白细胞介素2基因转染肿瘤细胞体外生物学特性的研究

将人IL-13基因导入肿瘤细胞观察其对小鼠体内肿瘤生长的抑制作用.P815是强致癌性的DBA/2小鼠肥大细胞瘤,将含人IL-13cDNA的质粒载体以磷酸钙共沉淀法导入P815K系,择出一分泌IL-13能力为40ng(每10~6细胞/每24小时)的亚克隆,同法制备分泌鼠IL-2能力为2.2ng的p815 IL-2细胞,及人IL-13分泌量为700ng的CHO IL-13细胞.p815 IL-13细胞一侧肋腹皮下接种同系DBA/2小鼠(每鼠5×10~5细胞),观察到肿瘤的短暂生长,其后出现完全性肿瘤排斥,第25～32天时,绝大多数小鼠肿瘤完全消失;p815 IL-2细胞接种小鼠出现相似过程,而亲本p815细胞接种后肿瘤持续生长至巨大肿瘤.60～70天后给     

ANTITUMOR IMMUNITY AND VACCINE EFFECT INDUCED BY IL—12 SYNERGIZES B7—1 GENE TRANSFECTED CELLS

Cytokines play an crucial role in the induction of antitumor immunity. It have been demonstrated that cytokines such as IL-2, IL-4, IL-12 could stimulate immunity response in many basic and clinical experiment[1-3]. Interleukin 12 (IL-12) is a heterodimeric cytokine which consists of p40 and p35 subunits. It stimulates the proliferation and activation of T lymphocyte and other killer cells and induces the production of IFN-g by these cells[4, 5]. IL-12 promotes T helper type 1 responses.…     

促肝细胞生长素对肾缺血再灌注损伤大鼠肾脏Bcl-2及Bax表达的作用

目的观察促肝细胞生长素（hepatocyte growth-promoting factor,pHGF）对大鼠肾缺血再灌注损伤肾功能及肾脏抑凋亡调节蛋白Bcl-2和促凋亡调节蛋白Bax表达的影响。方法将雄性Sprague-Dawley大鼠32只随机分为4组（n=8）,假手术组、缺血再灌注组（组）、缺血再灌注前pHGF干预组（组）和缺血再灌注后pHGF干预组（组）。用无损伤动脉夹钳夹大鼠双侧肾蒂45min制成肾缺血再灌注损伤（renal ischemia reperfusion injury,RIRI）模型（组）。假手术组只暴露双肾,不钳夹肾蒂。组和组依照组的方法制作RIRI模型后,再分别在术前和术后腹腔注射pHGF50mg/kg（0.8ml生理盐水稀释）。检测术后12h血清肌肝（Scr）浓度、小管上皮细胞Bcl-2和Bax的表达。结果假手术组Scr水平为（22.775±6.508）μmol/L,组为（120.850±22.237）μmol/L,较假手术组显著升高（P〈0.01）。组和组Scr水平分别为（60.413±10.197）μmol/L和（69.400±11.443）μmol/L,与组比较,均有一定程度的降低,差异有显著意义（P〈0.01）。假手术组小管上皮细胞抑凋亡调节蛋白Bcl-2表达为（2.472±0.453）/L,组为（19.075±2.330）/L,较假手术组上调,差异有显著意义（P〈0.01）,组和组Bcl-2分别为（58.075±7.765）/L和（56.025±6.481）/L,与组比较,均显著上调,差异有显著意义（P〈0.01）。组促凋亡蛋白Bax为（69.025±6.550）/L较假手术组（2.450±0.639）/L,显著上升,差异有显著意义（P〈0.01）,组和组Bax分别为（16.175±2.314）/L和（12.875±1.814）/L,较组明显下调,差异有显著意义（P〈0.01）。上述各项指标组和组间比较,差异无显著意义（P〉0.05）。结论pHGF能显著上调抑凋亡调节蛋白Bcl-2和下调促凋亡调节蛋白Bax的表达,对并发重症特发性急性肾衰竭（IARF）在肾脏结构及功能上,既有保护作用,又有治疗作用。     

GM—CSF基因修饰的肿瘤细胞疫苗对荷瘤小鼠的抗肿瘤作用

目的研究GM-CSF基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗的可行性.方法通过逆转录病毒载体,将小鼠GM-CSF基因导入EL-4淋巴瘤细胞中,研究EL-4/GM-CSF在同系C57BL/6小鼠中的成瘤性及其诱导抗肿瘤免疫的效果.结果EL-4/GM-CSF细胞在小鼠中的成瘤性下降,50%小鼠无瘤生存.射线灭活的EL-4/GM-CSF瘤苗能有效地保护野生型肿瘤细胞的攻击,在肿瘤生长的早期对实验性荷瘤小鼠进行治疗,能延长荷瘤宿主的存活时间(33.1±1.8)与对照组EL-4/Wt(23.2±1.5天)比差异有显著性(P＜0.01).基因修饰的瘤苗作用明显增强.结论GM-CSF基因修饰的肿瘤疫苗可诱导较强的抗肿瘤免疫反应,导致肿瘤的部分根除,本实验为基因修饰的肿瘤疫苗的临床应用提出了一定的实验依据.     

生存素反义寡核苷酸诱导膀胱癌细胞凋亡及增强其化疗敏感性

为探讨生存素反义寡核苷酸（生存素-ASODN）对化疗药多西紫杉醇（泰索帝）诱导膀胱癌细胞系BIU87细胞凋亡的影响。将已构建成功的生存素-ASODN真核表达载体pcDNA3-Swas通过脂质体介导转染膀胱癌细胞系BIU87，并筛选转染成功的阳性克隆；采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测其生存素mRNA表达；锥虫蓝拒染法观察生存素-ASODN与泰索帝联合应用对BIU87细胞生存的影响；     

心身4号对应激性高血压大鼠神经内分泌网络的影响

随着心身医学的迅速发展,国内外已公认原发性高血压病是心血管系统代表性心身疾病。为了深入探讨情志、心理因素与高血压之间的联系,本研究依据中医情志致病的理论,结合心身医学的观点与研究方法,塑造应激性高血压大鼠模型,从神经一内分泌网络角度,观察应激性高血压的发病机制及心身4号的调节作用。现报告如下。材料与方法1 动物健康 Wistar 系大鼠70只,雌雄各半,体重(240±15)g。由天津市医学实验动物中心提供。2 药物心身4号主要由陈皮6g 降香6g 乌药6g 代赭石6g 丹参15g 半夏6g 钩藤30g 地龙15g 牛膝15g 组