淋巴细胞体外杀伤小鼠神经母细胞瘤实验观察

【目的】建立体外小鼠神经母细胞瘤细胞和淋巴细胞共培养的细胞模型,通过检测不同免疫学指标来衡量淋巴细胞杀伤肿瘤细胞能力。【方法】从正常C57BL／6小鼠体内分离脾淋巴细胞,调节到适当的浓度,将神经母细胞瘤的细胞株（N2a）和新鲜分离的脾淋巴细胞共培养。在倒置显微镜下观察脾淋巴细胞形态,同时分离培养上清,用ELISA方法检测IL-6、IFN-r、TNF-α含量。MTT方法检测共培养体系中存活细胞状况,用来反映脾淋巴细胞体外杀伤神经母细胞瘤细胞的能力。【结果】体外共培养模型显示,脾淋巴细胞具有强大的杀伤N2a肿瘤细胞的能力,37℃5％C02培养48h后,在4—1×10^6／mL脾淋巴细胞浓度下无肿瘤细胞生长。细胞培养上清中可以检测到高浓度的IL-6（1849pg／mL）和中浓度的TNF-α（137pg／mL）,却检测不到IFN-r。【结论】脾淋巴细胞具有很强体外杀伤N2a肿瘤细胞能力,IL-6可能发挥着比TNF-α更重要作用,这为临床上神经母细胞瘤手术后的免疫治疗提供了新的思路。     

质粒表达型siRNA对SARS-CoV复制与感染干扰的初步研究

目的构建针对SARS-CoV的特异性siRNA质粒,利用RNA干扰技术抑制该病毒复制与感染.方法根据SARS-CoV的全长基因序列,以4个不同的部位为靶点,分别设计、合成含有19 nt干扰序列的一段寡核苷酸,将两两互补的寡核苷酸经退火后所形成的序列克隆到pSilencer 3.1-H1载体中,构建表达siRNA的质粒.采用脂质体法将质粒转染Vero E6细胞,经潮霉素抗性筛选后,再对稳定表达的细胞进行细胞病变、病毒空斑形成和MTT实验,以观察干扰效应.结果对所构建的质粒分别测序,确定其含有siRNA的序列与预期的特异性干扰序列一致.用不同浓度的SARS-CoV感染转染质粒后的细胞,与阴性对照相比,其细胞病变减轻、活细胞显著增加,病毒空斑明显减少.结论利用RNA干扰能有效的抑制SARS-CoV在细胞中的复制,并对细胞有保护作用,为预防、治疗SARS提供了新的思路和方法.     

胶体金免疫层析试纸条快速检测乙型流感病毒

目的建立有效、简便的胶体金免疫层析试纸条快速检测乙型流感病毒感染的方法。方法通过对乙型流感病毒核蛋白单克隆抗体进行胶体金标记,成功研制了乙型流感病毒免疫层析检测试纸条。结果该试纸条操作简单,肉眼于10～15 min内判定结果,对乙型流感病毒具有高度特异性,与甲型H1N1、H3N2亚型流感病毒等其他重要呼吸道病毒无交叉反应。试纸条在室温保存12个月、2～8℃保存18个月,其特异性和灵敏度无明显变化。对从内蒙自治区医院收集的流感样症状病人的702份鼻咽部分泌物进行检测,与美国Quidel公司同类产品的符合率为95%。结论建立的乙型流感病毒免疫层析检测方法具有简便、快速、特异、敏感和稳定等特点,对乙型流感病毒感染疾病的临床检测与早期诊断具有重要意义。     

用反向遗传技术产生冷适应致弱的重组A型人流感病毒的研究

目的 以鸡胚高度适应株A/PR/8/34株为重组流感病毒骨架,利用反向遗传技术拯救冷适应致弱的重组A型人流感病毒.方法 对冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60(H2N2)流感病毒株的PB2基因片段,进行了全基因序列合成,同时人工引入PB2265(N265S)氨基酸的突变.PB2基因片段通过与改造后的转录/表达载体pAD3000连接,构建PB2基因的拯救载体.该重组质粒与PR8进行"7 1"组合的病毒拯救,共转染COS-1细胞.结果 经测序获得序列准确的拯救质粒pMDV-A-PB2,利用反向遗传技术成功拯救出了具有血凝性(1×25)的冷适应的重组A型流感病毒.结论 利用反向遗传技术成功拯救冷适应致弱的重组A型人流感病毒,该系统为深入研究甲型人流感病毒的基因功能和新型疫苗研发奠定了基础.     

甲型H1N1流感病毒样颗粒疫苗的初步研究

目的对甲型H1N1病毒样颗粒的免疫原性和保护效果进行初步研究,为研发不依赖鸡胚生产工艺的流感疫苗提供新的思路。方法使用昆虫-杆状病毒表达系统表达并纯化甲型H1N1流感病毒A/California/07/2009(H1N1)的病毒样颗粒;通过Western blot、血凝、单向免疫扩散,透射电镜等方法鉴定病毒样颗粒;使用A/California/07/2009(H1N1)裂解疫苗作为对照,腹腔注射免疫Balb/c小鼠,并使用A/Beijing/501/2009(H1N1)进行攻毒,评价病毒样颗粒疫苗的免疫原性及保护效果。结果经鉴定,纯化后的病毒样颗粒血凝滴度为1:512,HA含量为92.9μg/ml,颗粒大小在100 nm左右,二免10 d后IgG抗体效价7.9×103,血凝抑制实验测得血抑(Hemagglutination Inhibition,HI)效价384,对50LD50的A/Beijing/501/2009(H1N1)病毒的保护率达到100%。结论甲型H1N1流感病毒样颗粒的免疫原性显著高于裂解疫苗,为发展不依赖鸡胚生产的流感亚单位疫苗提供了技术保证。     

脑水解物制备

脑活素是营养脑组织的药物,提高智力的保健品,是具有脑组织活性的多肽和脑组织氨基酸的脑水解物。我们以动物脑组织用同种动物的胰酶水解,获得的脑水解物中多呔含量为10％,氨基酸含量90％,可供输注     

化学发光测定人体内超氧化物歧化酶的实验报告

超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase SOD)能催化超氧阴离子自由基(Superoxide anion radicals O)的歧化反应,与抗衰老、抗炎症、抗氧毒性等有关。近年来我们应用化学发法(CL)测定血清铜锌超氧化物歧化酶(CuZn SOD)的活性。     

脑细胞激活因子植入对脑损伤修复的临床应用与实验研究

脑细胞激活因子植入对脑损伤修复的临床应用与实验研究解放军二五三医院狄风桐，王希良，刘仕山，何福全，郭美香，武新友近十年来，用胚胎脑组织进行移植研究受到重视，并取得了很大进展。临床上也开展了这方面的研究和应用。我们从１９８７年开始在这方面的动物实验和临...     

应用XOD—X—Luminol发光体系检测血清内SOD活性的实验报告

超氧化物歧化酶(Superoxide dis-mutase·SOD)是需氧生物体内的一种酶,其功能是催化超氧阴离子自由基(superoxide anion radicls O(?))的歧化反应,从而起到抗衰老、抗炎症、抗氧毒性等的作用。近年来我们应用XOD-X-Luminal发光测定了70例高血压病、150例精神分裂症、39例神经症和129例健康人血清内SOD的活性含量,结果报告如下:1 材料与方法     

地高辛标记布氏杆菌544ADNA探针的制备及其应用

作者应用自构键的ｐＢＣ_４重组质粒，经Ｋｐｎｌ和ＢａｍＨ_１双酶切回收０．２２ｋｂ的Ｂｒ．ａｂｏｒｔｕｓ５４４ＡＤＮＡ片段，将此片段纯化后采用地高辛标记方法制备探针。点杂交结果表明：此探针检测布氏杆菌ＤＮＡ的灵敏度达５ｐｇ，对中国１９型布氏杆菌ＤＮＡ杂交出现强的杂交信号而对５种革兰氏阴性菌ＤＮＡ以及人白细胞ＤＮＡ没有产生杂交反应，具有特异性强、敏感性高、简便易行等特点。为进一步用于实验室诊断人、畜布氏杆菌病和流行病学的调查提供了有效的手段。