醋酸棉酚对白血病HL-60细胞凋亡及分化的影响

目的:通过醋酸棉酚(GAA)对经典白血病细胞系HL-60的研究,探索GAA治疗白血病的可能性. 方法: 用细胞培养、四唑盐比色试验(MTT)、细胞形态学、DNA电泳及NBT还原试验等方法观察不同浓度GAA促进HL-60细胞凋亡及诱导分化的作用. 结果: GAA在浓度》6 μmol/L时可显著抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,并表现出剂量效应;在诱导分化浓度下(1, 4 μmol/L),GAA可促进HL-60细胞向成熟粒细胞分化(P《0.05). 结论: GAA对白血病细胞HL-60的选择性促凋亡作用表明其可能是一种理想的高效低毒抗白血病药物.     

复方银杏叶制剂对非酒精性脂肪肝的干预作用及机制

目的:探究复方银杏叶制剂(CGB)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)的干预作用机制.方法:采用高脂饮食诱导C57BL/6小鼠NAFLD模型,于造模第2周起以600,200mg·kg-1 ·d-1的CGB灌胃8周,观察小鼠血清生化指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHOL)、血清内毒素(LPS)水平、肝组织病理变化与肝脏TNF-α表达;电镜观察小肠上皮细胞紧密连接变化,测定ZO-1,Occludin,Claudin-1紧密连接蛋白表达.结果:与正常组比较,模型组小鼠肝脏发生明显脂肪变性,TNF-α表达显著增高(P＜0.01);血清ALT,AST,TG,CHOL与LPS水平均显著增高(P＜0.01,P＜0.05);肠上皮紧密连接结构受损,ZO-1,Occludin,Claudin-1表达显著降低(P＜0.01).与模型组比较,CGB高、低剂量组明显减轻肝组织脂肪变性,TNF-α表达显著降低(P＜0.01,P＜0.05);血清AST,TG,CHOL与LPS水平均显著降低(P＜0.01,P＜0.05);肠道紧密连接破坏程度减轻,ZO-1,Occludin表达显著增高(P＜0.05).结论:CGB可以保护肠道紧密连接,减少LPS肠渗漏,缓解肝脏脂肪变性和炎症,防治NAFLD的发生发展.     

Cathepsin D在滤泡型淋巴瘤及淋巴滤泡过度增生中的表达及意义

目的 检测溶酶体蛋白酶cathepsin D在滤泡型淋巴瘤(FL)和淋巴滤泡过度增生(FH)生发中心的表达。方法 收集10例FL和9例FH的淋巴结石蜡标本，用免疫组化LSAB法检测cathepsin D在各例标本中的表达。结果 在10例FL标本中，cathepsin D阳性信号较弱，位于瘤性滤泡生发中心树突状细胞浆内。滤泡中心部分的阳性细胞数目少，而靠近边缘部位较多。所有病例的滤泡生发中心瘤细胞cathepsin D表达阴性。在9例FH标本中，胞浆染色阳性的树突状细胞均匀弥散地分布于生发中心，阳性信号比FL组强。滤泡内少许组织细胞胞浆内也呈阳性，而滤泡内其他细胞均为阴性。滤泡生发中心周围有由T淋巴细胞组成的外套层。有4例FL的瘤性滤泡被反应性T淋巴细胞包绕，这些被包绕的滤泡中阳性细胞数目较其他6例无反应性T淋巴细胞包绕的滤泡多。在部分无T淋巴细胞包绕的滤泡中，cathepsin D阳性染色细胞甚至缺如。结论 cathepsin D可以作为滤泡树突状细胞和组织细胞良好的标志物。Cathepsin D在FL瘤性滤泡和FH滤泡树突状细胞中的差异表达可作为鉴别两种疾病的一项指标。FL瘤性滤泡中cathepsin D阳性树突状细胞的减少，可能与机体免疫系统对肿瘤细胞的免疫识别能力低下有关。     

激光捕获显微切割技术在石蜡切片中的应用

激光捕获显微切割（1asercapture microdissection，LCM）技术是在显微镜下从组织切片中高选择性地分离、纯化单一类型细胞群或单个细胞的新技术，可有效地克服组织中细胞异质性造成的偏差。本研究通过应用LCM技术从甲状腺疾病组织中精确分离目的细胞后，结合PCR技术检测显微切割病变甲状腺上皮细胞中的目的基因及人微小病毒B19基因组，并探讨了福尔马林固定的石蜡切片在LCM技术中的应用。     

HFCL细胞下调HL-60细胞cxcr4基因的表达及意义

目的:研究正常人骨髓成纤维样基质细胞HFCL对急性髓细胞白血病HL-60细胞cxcr4基因表达的影响及意义. 方法:采用流式细胞仪检测细胞周期,NBT还原实验和CD11b, CD14, CD13, CD33细胞表面抗原的测定作为细胞分化的指标;采用半定量RT-PCR, Northern blot检测cxcr4基因的表达. 结果:HL-60细胞与HFCL细胞共培养后,NBT阳性细胞增高,CD11b和CD14的表达增多,并有明显的统计学意义;而且cxcr4 mRNA的表达下调. 结论:HFCL细胞能诱导HL-60细胞部分向单核细胞分化,并使趋化因子受体cxcr4表达下调.     

黄蜂致小白鼠实验性螫伤后的组织病理改变

人被黄蜂螫伤后 ,可发生受螫部位局部病变 ,喉头水肿、失明、瘫痪、肾衰、休克甚至死亡。每年7～ 9月份 ,黄蜂活动频繁 ,被蜂螫伤是山区人民健康甚至生命受到严重威胁的主要危险因素之一。为了探讨蜂毒对机体的损害主要发生在哪些组织器官以及蜂毒量的多少与损伤程度的关系 ,我们观察了小白鼠实验性螫伤后受螫部位皮肤及各重要脏器组织的病理改变。材料与方法1　黄蜂 :取自陕西省柞水县秦岭南坡山中。小白鼠 :来自第四军医大学动物室纯种小白鼠 ,体重 2 0 g,健康公鼠。2　将 3只小白鼠完全随机分为三个处理组 :1无蜂螫对照鼠 ;2 5只蜂螫鼠 ;…     

正常人骨髓成纤维样基质细胞对HL-60/VCR耐药细胞增殖的影响

目的观察正常人骨髓成纤维样细胞系HFCL对白血病多药耐药细胞HL-60/VCR增殖和分化的影响.方法采用四唑氮蓝(MTT)法进行HL-60/VCR细胞药物敏感实验.建立HL-60/VCR细胞和HFCL细胞共培养体系,苔盼蓝拒染法测定生长曲线;硝基四氮唑蓝(NBT)确定细胞分化;流式细胞仪检测细胞周期和CD11b、CD13、CD14、CD33细胞表面抗原进一步鉴定细胞分化;Western blot检测增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)和P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp).结果HL-60/VCR细胞对多种药物耐药.与HFCL细胞共培养后,HL-60/VCR细胞生长受抑,且与HFCL细胞直接接触组的抑制作用＞用transwell组.同时发现HL-60/VCR细胞与HFCL细胞共培养后,G1期细胞增多,S期细胞减少;同时CD11b和CD14表达增高,CD13和CD33变化不大;且NBT阳性细胞轻度增多.Western blot检测结果显示,PCNA表达下调,以直接接触组为甚.但是P-gp表达无变化.结论正常人骨髓成纤维样细胞HFCL能抑制白血病MDR细胞HL-60/VCR的增殖,抑制PCNA的表达,出现G1期阻滞,并部分向单核细胞分化.     

涎腺导管上皮细胞体外感染HCMV模型的建立

目的　建立涎腺导管上皮细胞体外人巨细胞病毒 (HCMV)感染模型。方法　用免疫细胞化学方法初步鉴定涎腺导管上皮细胞 (HSG)角蛋白 8(cytokeratin 8,CK8)和角蛋白 18(CK18)抗原的表达 ;观察HCMV感染HSG后导致的病变 ;观察宿主细胞中病毒颗粒的超微结构 ;用RT PCR及nest RT PCR检测HCMVIE1(即刻早期 1) /IE2基因的转录 ;用免疫细胞化学法检测HCMV感染细胞中IE1/IE2蛋白的表达。结果　呈上皮样贴壁生长的HSGCK8和CK18阳性表达 ;HCMV感染后 12小时 ( 12h .p .i.)即可见细胞病变 ,6 0h .p .i.CPE已极为明显 ,72h .p .i.绝大部分细胞出现病变。感染的HSG细胞在细胞核、内质网、细胞质中出现数量不等的 3种不同形态的疱疹病毒样颗粒。宿主细胞中可检测到HCMVIE1/IE2的转录以及IE1/IE2蛋白的表达。结论　成功建立了涎腺导管上皮细胞体外HCMV感染模型     

氨基葡萄糖硫酸盐诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的　探讨氨基葡萄糖硫酸盐(GS)对慢性髓系白血病K 5 62细胞凋亡诱导作用和分子机理。方法　采用台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线来观察GS对K5 62细胞的生长抑制作用;取对数生长期K 5 62细胞,在0 .5 ,1.0 ,5 .0mmol/LGS不同浓度作用48h后,利用细胞计数、电镜、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色、DNA梯状电泳、流式细胞仪等方法来观察GS对K 5 62细胞的抑制效应和促凋亡作用。并用Westernblot检测活化的caspase 3和bcl- 2基因的表达。结果　0 .5 ,1.0 ,5 .0mmol/LGS对K 5 62细胞的生长有抑制作用,并呈时间和剂量依赖性(P <0 .0 1)。采用光镜、电镜和AO /EB染色法发现5mmol/LGS作用K 5 62细胞后,出现典型的凋亡形态学改变。AnnexinV染色后流式细胞仪能检测到早期凋亡细胞,细胞周期显示:G1期细胞比例增高,S期比例减低,并有凋亡峰。有明显的梯状DNA。同时GS诱导K 5 62细胞凋亡后出现活化的Caspase 3 ,而Bcl- 2蛋白表达减弱,甚至消失。结论　GS能诱导白血病K- 5 62细胞凋亡,该过程伴有Caspase- 3的活化和Bcl- 2蛋白表达降低。     

组织细胞性坏死性淋巴结炎中微小病毒B19的检测及其意义

目的研究人微小病毒B19感染与组织细胞性坏死性淋巴结炎(histiocytic necrotizing lymphadenitis,HNL)的关系。方法采用双盲法在32例真性HNL患者及13例正常对照淋巴结活检组织中用巢式PCR和免疫组化染色检测B19病毒基因组DNA和病毒蛋白。结果在32例真性HNL患者淋巴结中,B19病毒DNA和病毒蛋白阳性率分别为90·0%和59·4%,而在对照淋巴结中,两者阳性率分别为53·8%和23·1%。统计学分析显示在真性HNL中B19病毒基因组DNA及病毒蛋白的阳性率更高(P<0·05)。结论B19病毒在真性HNL中有更高感染率,推测与真性HNL的发病可能有一定关系。