NLRP3/Caspase-1炎性体通路在临床慢性根尖周炎病变组织中的表达

目的 探讨临床慢性根尖周炎病变组织中NLRP3/Caspase-1炎性体通路的表达情况.方法 收集2013年10月至2014年4月在大连医科大学附属口腔医院就诊的因慢性根尖周病需行根尖外科手术治疗或需拔牙的患者20例,取患者牙周组织作为根尖周炎病组;正畸治疗需要拔除的健康恒牙患者,搔刮拔除后的牙齿根尖周组织,作为对照组.通过Real-time qPCR及免疫组织化学的方法检测NLRP3、Caspase-1、IL-B mR-NA及蛋白的表达情况,并对NLRP3、Caspase-l、IL-B的蛋白表达进行相关性分析.结果 NLRP3、Caspase-1及IL-1β在根尖周炎病组中的mRNA及蛋白表达量均明显高于对照组,差异有显著性意义(P＜0.05).根尖周炎病组织内NLRP3、Caspase-1、IL-β阳性细胞主要位于中性粒细胞、淋巴细胞及浆细胞中,其中NLRP3、Caspase-1主要表达于胞浆,IL-1β可表达于胞浆与胞核.相关性分析结果显示,NLRP3与Caspase-l的表达存在着中度相关性,r=0.733;IL-1β与NLRP3及Caspase-1的表达存在着低度相关性,r=0.378及r=0.341,P均＜0.05.结论 NLRP3炎性体在人的慢性根尖周炎症中表达增高.     

MRI联合血清MBP、FGL2对弥漫性颅脑轴索损伤的诊断价值

目的探讨磁共振成像(MRI)联合血清髓鞘碱性蛋白(MBP)、凝血酶原酶(FGL2)、对弥慢性颅脑轴索损伤的诊断价值。方法进择2020年2月～2022年2月96例本院接收的疑似弥漫性颅脑轴索损伤患者,对研究对象进行MRI检查,酶联免疫吸附法检测患者血清MBP、 FGL2水平,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清MBP、FGL2对弥漫性颅脑轴索损伤的诊断价值,评价MRI联合血清MBP、FGL2对弥漫性颅脑轴索损伤的诊断效能。结果MRI检查结果显示,96例研究对象中弥漫性颅脑轴索损伤57例、非弥漫性颅脑轴索损伤39例,MRI诊断弥漫性颅脑轴索损伤的灵敏度为80.95%(51/63),特异度为81.82%(27/33),准确度为81,25%(78/96),误诊率为18.18(6/33),漏诊率19.05%(12/63)。与非弥漫性颅脑轴索损伤患者比较,弥漫性颅脑轴索损伤患者血清MBP与FGL2表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。血清M BP诊断弥漫性颅脑轴索损伤的曲线下面积为0.866(95%CI:0.782～0.927),灵敏度为71.43%,特异度为93,94%,截断...     

急诊经皮冠状动脉介入术与替罗非班联合治疗急性心肌梗死的临床效果分析

目的分析急诊经皮冠状动脉介入术与替罗非班联合治疗急性心肌梗死的临床效果。方法选取本院收治的100例急性心肌梗死患者,所有急性心肌梗死患者的收取时间(2016年5月10日至2017年2月1日),电脑随机分为观察组一组(50例急性心肌梗死患者)、对照组一组(50例急性心肌梗死患者),分别实施急诊经皮冠状动脉介入术与替罗非班联合治疗以及常规治疗,将两组急性心肌梗死的治疗效果进行对比。结果观察组急性心肌梗死患者的不良心脏事件发生率2.00%低于对照组(P0.05);观察组急性心肌梗死患者的总有效率94.00%与对照组总有效率具有显著差异(P0.05);观察组急性心肌梗死患者的症状改善时间(6.21±1.01)d和住院时间(10.25±1.21)d与对照组具有差异(P0.05);观察组术前CK-MB、c Tn I水平与对照组无显著差异(P0.05);两组急性心肌梗死患者术后的CK-MB、c Tn I水平均显著升高,观察组患者术后12小时CK-MB低于对照组,术后24小时c Tn I水平低于对照组(P0.05)。结论通过对急性心肌梗死患者实施急诊经皮冠状动脉介入术与替罗非班联合治疗后,取得显著效果,值得推广和应用。     

甲醛溶液对Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活效果研究

 目的  验证4%甲醛溶液使Sabin株Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎（脊灰）病毒达到预期灭活效果所需要的时间。方法  用4%甲醛溶液对15批Sabin株Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊灰病毒在(36.5±1) ℃ 环境进行灭活,同时以15批未加入4%甲醛溶液的病毒纯化液作为对照组,按照企业注册标准采用微量细胞病变法测定病毒滴度。为了消除4%甲醛溶液对Hep-2细胞的影响,取4%甲醛溶液接种Hep-2细胞作为实验组,同时设置Hep-2细胞为对照组,每天观察对比两组细胞形态。对同一个Hep-2细胞悬液的总细胞数和活细胞数采用传统手工计数和全自动细胞计数仪计数,并比较分析结果。结果  实验组随着灭活时间的延长病毒滴度呈下降趋势,在灭活到第4天起,3个型别样品均检测不到病毒滴度;对照组病毒滴度在每毫升9.1～10.6 lg半数细胞培养物感染量范围内,符合企业注册标准的要求。4%甲醛溶液对Hep-2细胞生长有抑制作用,在培养观察到第3天时细胞全部失去活力死亡;对照组细胞形态良好呈多边形长成致密单层,活细胞组t值为18.098,总细胞组t值为4.005,P值均＜0.05,差异有统计学意义。结论  脊灰病毒在第4天能被彻底灭活,在进行此实验时应先消除甲醛对细胞培养的影响,避免结果出现假病变现象,确保结果的准确性;应用全自动细胞计数能提高计数结果的精确度。     

特发性黄斑裂孔OCT影像与术后早期视力恢复的相关性研究

目的 研究特发性黄斑裂孔(idiopathic macular holes,IMH)患者术前光学相干断层扫描技术(optical coherence tomography,OCT)测量的相关参数与术后早期视力恢复的相关性.方法 收集24例(25眼)IMH患者,均行玻璃体切割+内界膜剥离+玻璃体内注气术,术前、术后12周均行最佳矫正视力(best corrected visual acuity,BCVA)检查,术前1周内OCT影像上直接测量裂孔最大高度,通过Image-Pro Plus 6.0软件测量黄斑裂孔最小径、基底径及外界膜光感受器断裂点与视网膜色素上皮层的最大垂直高度,并计算黄斑孔指数(macular hole index,MHI)、牵拉孔指数(tractional hole index,THI)、黄斑孔指数’(macular hole index’,MHI’)及牵拉孔指数’(tractional hole index’,THI’),应用SPSS 22.0软件包进行Spearman相关性分析,得出各参数与术后12周时BCVA的相关性,受试者工作特征曲线拟合分析得出MHI、THI、MHI’、THI’界值.结果 IMH患者术后12周BCVA较术前明显提高且差异有统计学意义(P=0.000).相关性分析结果表明:术后12周BCVA与术前MHI、THI、MHI’、THI’具有相关性(均为P＜0.05).MHI ≥0.705组术后12周时BCVA平均为0.297,好于MHI＜0.705组的0.103(P=0.023);THI≥1.425组术后12周时BCVA平均为0.288,好于THI＜1.425组的0.163(P =0.001).结论 THI≥1.425或MHI ≥0.705者术后12周时能获得较好的BCVA,可作为预测IMH患者术后早期视力恢复情况的指标.     

黄芩苷对注意缺陷多动障碍模型大鼠行为学特征的影响研究

目的研究黄芩苷对注意缺陷多动障碍(ADHD)模型大鼠行为学特征的影响,为黄芩苷治疗ADHD的进一步研究提供依据。方法将40只SHR大鼠随机分为模型组、盐酸哌甲酯组及黄芩苷低、中、高剂量组,每组8只,另设8只WKY大鼠为正常对照组。盐酸哌甲酯组(0.07 mg/mL)及黄芩苷低剂量(3.33 mg/mL)、中剂量(6.67 mg/mL)、高剂量(10 mg/mL)组分别按体重(1.5 mL/100 g)给予对应药物灌胃,正常对照组、模型组给予等量生理盐水灌胃,各组大鼠灌胃4周,每日2次。旷场实验观察实验第0天及灌胃后7、14、21、28 d各组大鼠的总运动距离及平均运动速度,评估药物对大鼠多动、冲动行为的控制作用;Morris水迷宫实验观察各组大鼠的潜伏期、目标象限活动比率及穿越平台次数,评估药物对大鼠注意力的影响。结果旷场实验数据显示,第0天,模型组及各用药组大鼠的总运动距离及平均运动速度均显著高于正常对照组(P0.05);第7天,盐酸哌甲酯组总运动距离及平均运动速度较模型组显著降低(P0.05);第14天,盐酸哌甲酯组及黄芩苷高剂量组大鼠在总运动距离及平均运动速度上均较模型组显著降低(P0.05);第21天及第28天,黄芩苷各剂量组在总运动距离及平均运动速度上较模型组均呈不断下降趋势(P0.05)。水迷宫空间探索实验结果显示,盐酸哌甲酯组及黄芩苷中、高剂量组目标象限停留时间比率显著高于模型组(P0.05),盐酸哌甲酯组、黄芩苷高剂量组目标象限运动距离所占比率亦显著高于模型组(P0.05);黄芩苷高剂量组穿越平台次数高于其余各组(P0.05)。结论黄芩苷及盐酸哌甲酯均能够调控ADHD模型SHR大鼠的运动能力及学习记忆能力,从而控制ADHD多动、冲动及注意力不集中的核心症状;黄芩苷药效呈剂量依赖性,高剂量黄芩苷疗效最为显著,但其药效的发挥迟于盐酸哌甲酯。     

神经解剖学相关技术推广课程的实践与探索

<正>随着近年来国家层面人才培养计划的推进,大学生科研创新能力的培养越来越受到重视,全国各高校陆续设立了大学生科研训练项目计划~([1])。正是在这样的大背景下,我校为了推广神经解剖学相关实验技术,开设了生物医药创新创业技术推广示范这门课程。笔者经过一学期的课程学习,对本课程有一定心得和体会,现总结如下。     

H_2S抑制ATP诱导的大鼠小胶质细胞活化及IL-1β的释放

目的:观察硫化氢(H_2S)供体硫氢化钠(Na HS)对三磷酸腺苷(ATP)损伤的大鼠小胶质细胞通透性、胞内Ca~(2+)浓度([Ca~(2+)]_i)及IL-1β释放的影响,探讨H_2S对ATP-P2X嘌呤信号通路的作用及其神经保护的分子机制。方法:取对数期形态结构及生长分化良好的大鼠小胶质细胞用于实验。Fura-2/AM荧光染料检测各组[Ca~(2+)]_i,细胞内YO-PRO-1荧光强度检测以反映膜的通透性,ELISA检测ATP-细菌脂多糖(LPS)激活的大鼠小胶质细胞IL-1β的释放水平。结果:随着ATP浓度的增加,大鼠小胶质细胞内YO-PRO-1的荧光强度显著增加,而给予Na HS预处理后细胞膜通透性明显降低,对YO-PRO-1的摄取明显减少(P0.05),胞内荧光强度明显减弱(P0.05)。ATP处理大鼠小胶质细胞引起[Ca~(2+)]_i迅速升高后缓慢下降形成持续时间较长的平台期。Na HS预处理虽不能改变[Ca~(2+)]_i的峰值,但可抑制平台期的形成(P0.05)。ATP与LPS联合作用可促进大鼠小胶质细胞IL-1β的生成和分泌,而Na HS预处理可明显逆转这一效应(P0.05)。结论:Na HS可降低ATP诱导的大鼠小胶质细胞膜通透性、Ca~(2+)内流和IL-1β释放,抑制该细胞的激活,提示嘌呤信号通路可能介导H_2S的细胞保护作用。     

H_2S抑制高浓度ATP诱导的SH-SY5Y细胞凋亡与P2X_7受体的相关性研究

目的:研究H_2S对高浓度ATP诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用和可能的机制。方法:人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞、HEK 293和HEK 293-hP2X_7R细胞,分为对照组,Na HS组,KN-62组,ATP组,ATP+Na HS组和ATP+KN-62组。倒置显微镜观察细胞形态变化,CCK-8法检测细胞活力,Hoechst 33258核染色分析细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot和RT-PCR法分别检测Caspase-3、Bcl-2在蛋白和mRNA水平的表达。结果:与对照组比较,6 mmol/L ATP处理3 h后SH-SY5Y细胞损伤明显,活力降低至62.7%±3.8%(P0.01),而凋亡率升高至30.75%±5.1%(P0.01)。与ATP组比较,用200μmol/L Na HS和500 nmol/L KN-62预处理30 min,SH-SY5Y细胞活力分别升高至90.1%±3.8%和84.6%±3.1%(P0.05),凋亡率则分别降低至14.73%±3.4%和18.32%±3.1%(P0.01)。ATP组SH-SY5Y细胞内Caspase-3表达上调,Bcl-2表达下调,但Na HS和KN-62可抑制Caspase-3表达,促进Bcl-2表达。与对照组和HEK293细胞比较,用2 mmol/L ATP分别处理HEK 293、HEK 293-h P2X7R细胞3 h,可见HEK 293-h P2X7R细胞内Caspase-3表达上调(P0.01)。与ATP组比较,200μmol/L Na HS预处理30 min,HEK 293-h P2X7R细胞内Caspase-3表达明显下调(P0.01)。HEK 293细胞Caspase-3表达在各组无差异(P0.05)。结论:H2S对高浓度ATP诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有抑制作用,且呈浓度依赖性,其作用机制可能与P2X7R相关。