荧光定量PCR检测侵袭性曲霉菌感染方法的建立

目的 建立并评价从血标本中检测曲霉菌的实时PCR方法.方法 摸索真菌DNA提取方法,用自行设计的高效率引物探针对种植在健康人血中的曲霉菌进行检测,对方法的敏感性、特异性进行评价.结果 检测出种植到血中的曲霉菌,敏感性达10拷贝ITS Ⅰ基因,相当于(1～5)CFU/ml,与人类基因组、其他真菌及细菌无交叉阳性反应,特异性好.结论 实时PCR检测血中真菌病原菌有较高的敏感性、特异性;可有效防止携带污染,避免假阳性结果,有一定的临床应用前景.     

红细胞参数区分小红细胞人群中珠蛋白生成障碍性贫血基因携带者与铁缺乏症的诊断价值

目的 评价在MCV<82fl的小红细胞人群中,红细胞(RBC)数和其它五种参数或公式区分珠蛋白生成障碍性贫血(珠蛋白生成障碍性贫血)基因携带者和铁缺乏症患者(ID)的诊断价值.方法 1 673名"健康"人参加了该次研究.笔者检测了所有参加体检者的七项红细胞参数、血清铁,并对血样进行了血红蛋白电泳.以血清铁作为铁缺乏症(SI)的诊断指标(男性:SI<10 μmol/L,女性:SI<9.0 μmol/L),同时对所有的MCV<82fl的参检者全部检测了6种α珠蛋白生成障碍性贫血和17种β珠蛋白生成障碍性贫血基因.绘制RBC数和其它参数或数学公式用于诊断珠蛋白生成障碍性贫血的受试者工作特征曲线(ROC曲线).通过ROC曲线确定它们的诊断临界值(Cut-off值),并比较它们的敏感度、特异度和Youden指数.结果 1 673自然人群中共检出小红细胞164例,47.6%为α珠蛋白生成障碍性贫血、15.2%为β珠蛋白生成障碍性贫血、35.4%为铁缺乏症.基于ROC曲线,推算出RBC数目对于珠蛋白生成障碍性贫血的诊断能力优于其它参数或公式.在男性群体中RBC的最佳诊断界值为5.41×1012/L,敏感度为82.5%,特异度为92.3%,Youden指数为74.8;在女性群体中RBC的最佳诊断界值为4.93×1012/L,敏感度为81.8%,特异度为94.4%,Youden指数为76.1.结论 RBC数目能准确、简捷地在小红细胞人群(MCV<82fl)中区分珠蛋白生成障碍性贫血基因携带者和铁缺乏症患者,值得在珠蛋白生成障碍性贫血高发地区,特别是经济比较落后的农村地区推广.     

Expression of Toll-like receptors 3 (TLR3) on peripheral blood mononuclear cells and serum IFN-γ,TNF-α levels in children with acute rotavirus diarrhea

Objective To explore the relationship between TLR3 mRNA expression on peripheral blood mononuclear cells(PBMCs)and acute rotavirus(RV)diarrhea.Methods Sixty-one children with acute RV diarrhea served as study subject,the expression of TLR3 mRNA on PBMCs was detected by real-time fluorescence quantitative RT-PCR.the concentrations of IFN-γand TNF-α in serum were measured by the method of Enzyrme-linked immunosorbent assay(EUSA).Results The expression of TLR3 on PBMCs and the serum levels of IFN-γ and TNF-α in the serious diarrhea group were 0. 820±0.051,(33.67±12.88)Pg/ml, (62.21±14.65)pg/ml,respectively,while it were 0.717±0.040,(24.01±10.06)pg/ml,(50.99± 12.18)pg/ml in the slight diarrhea group,and 0.525±0.029,(12.52±5.19)pg/ml,(28.65±7.44)pg/ml in the control group.Compared with the control group.the expression of TLR3 on PBMCs and the serum levels of IFN-γ,TNF-α in the serious and slight diarrhea group were significantly higher(P<0.01).There were significant differences between the serious and slight diarrhea group(P<0.01).There were positive relationship between the expression of TLR3 on PBMCs and tHe serum IFN-γ,TNF-α levels(r=0.431,P< 0.05,r=0.372,P<0.05).Conclusion The expression of TLR3 on PBMCs in children with acute rotavirus dialThea iS up-regulated,TLR3 and its mediated immune response are associated with the development of acute rotavirus diarrhea.     

微重力对血管内皮细胞生物学特性的影响

微重力状态下,人体将表现出一系列的心血管去适应性反应.由于血管内皮细胞是血管壁最重要的组成部分,因此血管内皮细胞生物学特性的改变将与去适也性反应直接相关.研究微重力状态下血管内皮细胞生物学特性的改变对预防和治疗航天员心血管的去适应性反应尤为重要.     

乙型肝炎病毒e抗原对Bewo细胞Toll样受体3表达的影响

目的探讨乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）对Bewo细胞Toll样受体3（TLR3）表达的影响。方法首先用TLR3配体polyI∶C处理Bewo细胞,观察细胞TLR3 mRNA表达的动力学变化。然后将2μg和8μg HBeAg重组质粒pcDNA3.1（＋）-HBe转染Bewo细胞,48 h后,用TLR3配体polyI∶C处理12 h。最后,用不同浓度的IFN-β处理Bewo细胞12 h。采用实时荧光定量RT-PCR和ELISA分别检测细胞TLR3 mRNA表达及细胞上清IFN-β水平。结果 polyI∶C可显著诱导Bewo细胞TLR3 mRNA表达（P〈0.05或0.001）,且呈时间和剂量依赖性;与对照组相比,转染8μg HBeAg重组质粒组polyI∶C诱导Bewo细胞TLR3表达及IFN-β水平显著下降（P〈0.001）,IFN-β可显著诱导Bewo细胞表达TLR3 mRNA（P〈0.001）,且呈剂量依赖性。结论 HBeAg可能通过下调IFN-β的产生而抑制Bewo细胞TLR3 mRNA的表达,为防治HBV宫内感染提供了新的途径。     

模拟微重力对机体内皮细胞、血小板功能的影响

重力状态的改变将引起机体一系列生理机能的异常,如心血管系统中血液的重新分布、骨骼系统中骨质破坏的增加、造血系统中造血组织的减少等.人类登月计划的顺利实现以及空间站的成功建立,为研究微重力状态下机体生理功能的改变开启了新的篇章.随着模拟微重力仪的研发更是使这一领域出现了飞速的发展,但关于微重力状态下机体凝血功能的改变还有...     

2型糖尿病肾病患者外周血单个核细胞组织因子活性检测的意义

目的探讨2型糖尿病肾病患者外周血单个核细胞组织因子促凝活性（TF-PCA）的改变及其临床意义。方法 63名2型糖尿病患者按照尿白蛋白/肌酐比共分为三组：比值〈30mg/g为正常蛋白尿组（n=22）,30mg/g≤比值〈300mg/g为微量白蛋白尿组（n=26）,比值≥300mg/g为大量白蛋白尿组（n=15）;同时选择21名健康体检者作为对照组。采用一期凝固法测定外周血单个核细胞TF-PCA。常规检测空腹血糖、糖化血红蛋白、超敏CRP（Hs-CRP）、尿酸（UA）、胱抑素C（CYSC）,并进行相关分析。结果糖尿病组外周血TF-PCA随尿蛋白水平升高而升高,同时单个核细胞TF-PCA与空腹血糖、Hs-CRP、UA等呈正相关,相关系数分别为0.419、0.293、0.232（P〈0.05）。结论 2型糖尿病患者外周血单个核细胞TF-PCA明显升高,且与多种因素相关,TF-PCA升高可能与DN的发病机制、病程进展相关。     

基于碳纳米管修饰的无酶型新型甲胎蛋白安培免疫传感器研究

目的构建新型甲胎蛋白安培免疫传感器。方法首先在玻碳电极（GCE）表面修饰一层羧基化碳纳米管（CNTs）,然后利用带负电荷的DNA分子和带正电荷的硫堇之间的静电作用,层层自组装修饰硫堇以增强检测信号,然后利用硫堇的氨基固定纳米金,以便固定抗体,最后利用牛血清白蛋白封闭未结合位点。结果修饰的碳纳米管能够显著地提高电极的导电性,利用层层组装技术修饰了5层硫堇。在优化的条件下（pH7.0,温浴时间25min）,制作的甲胎蛋白免疫传感器线性范围在0.5～25ng/ml内,检测限0.02ng/ml。结论成功利用层层自组装技术构建新型基于碳纳米管修饰的无酶型甲胎蛋白安培免疫传感器,该传感器灵敏度高,特异性好,有望成为原发性肝癌早期诊断的新方法。     

尿胰蛋白酶原-2与尿液淀粉酶早期诊断急性胰腺炎的循证评估

目的采用循证医学的方法评估尿胰蛋白酶原-2（TPS-2）和尿液淀粉酶（UAmy）早期诊断急性胰腺炎（AP）的诊断价值与诊断效能,为临床医生和检验人员选择AP生化标志物提供最佳临床决策证据。方法检索MEDLINE、EMBASE、中国生物医学文献数据库（CBMDISC）、中国生物医学期刊文献数据库（CMCC）、中文期刊全文数据库（CNKI）等数据库,按照纳入标准收集TPS-2与UAmy诊断AP的研究文献,采用QUADAS量表进行严格的文献质量评价,利用MetaDisc软件进行异质性分析及定量合成,绘制SROC曲线,计算相应的验后概率。结果39篇TPS-2与UAmy诊断AP的研究结果异质性分析,前者无明显异质性（P=0.5641,I2=0%）;后者有中等程度的异质性（P=0.0086,I2=38.5%）。合并敏感度Sen分别为93%（95%CI：92%～94%）与81%（95%CI：79%～83%）;合并特异度Spe分别为94%（95%CI：94%～95%）与82.0%（95%CI：81%～83%）;SROCAUC分别为0.9788（SE=0.0024）与0.8680（SE=0.0084）,差异有统计学意义,前者的综合诊断效能优于后者。TPS-2与UAmy结果阳性时诊断AP的验后概率分别约为56.88%与26.62%,阴性验后概率分别为0.69%与2.38%。结论检测尿液TPS-2诊断AP比UAmy具有更高的诊断价值,可作为AP诊断的过筛试验,阴性结果有99.31%的概率可排除AP的可能性。