MCF-7/BCRP细胞系的建立及其生物学特征

目的：建立表达乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的耐药细胞系MCF-7／BCRP。方法：提取MCF-7细胞的总RNA,设计BCRP基因上下游引物,用RT-PCR法克隆出BCRP基因全长并连接到真核表达栽体pcDNA3．1(-)上,转染MCF-7细胞后以G418筛选细胞。采用米托蒽醌外排实验、细胞毒性实验、细胞群体倍增时间、免疫荧光法鉴定构建的耐药细胞系。结果：MCF-7／BCRP对米托蒽醌耐药指数增加至14．72：外排米托蒽醌的作用增强;细胞群体倍增时间较亲代细胞延长：MCF-7／BCRP细胞能表达一定量的BCRP。结论：MCF-7／BCRP细胞能够表达BCRP并具有BCRP的耐药表型。     

食管鳞癌患者血清DKK-1的检测及其临床意义

目的 检测食管癌患者血清中DKK-1(dickkopf-1)的表达水平,探讨其在食管癌辅助诊断中的价值.方法 应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测80例食管鳞癌患者和35例健康对照组血清中DKK-1的浓度,计算DKK-1诊断食管鳞癌的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值,并与细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)和癌胚抗原(CEA)的检测做比较,探讨其在食管癌辅助诊断中的价值.结果 ①食管鳞癌患者血清中DICK-1浓度为90.44±57.41 ng/ml,而正常对照组为11.29±9.45 ng/ml,两者差异有统计学意义(P<0.01).②以正常人血清DKK-1浓度95%可信区间上限(14.54 ng/ml)为界值,则食管鳞癌患者血清中DICK-1的敏感性为66.25%(53/80);正常人血清中的DICK-1阳性率仅为17.14%(6/35),两者差异有统计学意义(P<0.01).③食管鳞癌患者血清中DKK-1的阳性率与肿瘤大小、分化程度无关(P>0.05),而与肿瘤分期和淋巴结转移密切相关(P<0.05).④3种肿瘤标记物检测比较分析显示,在诊断食管癌时,DKK-1的敏感性为66.25%,与CEA(39.44%)和CYFRA21-1(25.35%)间差异有统计学意义(P<0.05).结论 DKK-1在食管癌的发生、生长和转移过程中起着极其重要的作用,有可能成为一种新的肿瘤标记物用于食管癌的辅助诊断.     

乏氧射线双调控的TK腺病毒载体对乳腺癌细胞生长和凋亡的影响

目的:观察乏氧射线双调控的TK腺病毒载体-Ad.HRE.CArG.HSV-TK对体外培养的乳腺癌细胞Bcap37和MDA-MB-435生长和凋亡的影响.方法:MTT法检测腺病毒转导联合放疗对常氧(37℃,19%0:,5%C02)和乏氧(37℃,0.1%02,5%C02)状态下细胞的生长抑制作用,Annexin v-FITC染色检测细胞凋亡.结果:HSv-TK/GCV系统对乳腺癌细胞具杀伤效应和旁观者效应,Bcap37和MDA-MB-435细胞对GCV的IC50分别为9.09和7.83 μg/mL.常氧状态下腺病毒栽体(Ad)与放疗(RT)联用组(Ad+RT)细胞生长抑制率和凋亡率明显高于Ad组和相应同等剂量放疗组(P<0.05),对Beap37和MDA-MB-435细胞的增敏比(SER)均为1.55.乏氧和(或)放疗处理后,乏氧+Ad+RT组抑制率明显高于常氧+Ad+假照射组和常氧+Ad+RT组,P<0.05.结论:Ad.HRE.CArG.HSvrTK腺病毒裁体联合放疗可显著抑制乳腺癌细胞生长并诱导凋亡,为进一步开展乳腺癌的基因一放射治疗研究奠定了基础.中华肿瘤防治杂志,2009,16(1):22-26     

三氧化二砷抑制人神经胶质瘤细胞生长及其机制

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）对人神经胶质瘤细胞株U251的生长抑制作用及对基因表达和钙含量的影响。 方法： MTT法观察As2O3对U251细胞的生长抑制作用；流式细胞仪测定不同浓度As2O3处理后U251细胞周期、增殖细胞核抗原（PCNA）、凋亡相关蛋白Fas和Bcl-2阳性细胞百分率及细胞内钙离子（IECa2+）含量变化。Annexin V-FITC+PI双参数检测细胞凋亡。 结果： (1) As2O3可显著抑制U251细胞生长，且剂量-效应和时间-效应关系显著（P<0.05），其24 h、48 h和72 h的IC50值分别为14.28 μmol/L、13.63 μmol/L和2.34 μmol/L。（2）As2O3能显著增加Fas蛋白表达和IECa2+含量（P<0.01），下调PCNA蛋白表达（P<0.01），并使细胞周期阻滞在G2 M期，但对Bcl-2表达无影响（P>0.05）。（3）U251细胞经As2O3处理后可出现凋亡。 结论: As2O3在体外可显著抑制人神经胶质瘤U251细胞生长并引起凋亡，其机制可能与上调Fas表达和IECa2+含量、降低PCNA蛋白表达及阻滞细胞周期有关。     

人乳腺癌细胞化疗敏感性与相关基因表达的关系

目的探讨人乳腺癌细胞化疗敏感性与多药耐药相关基因和凋亡调控基因表达的关系。方法MTT法检测5株人乳腺癌细胞株Bcap37、MCF-7、T47D、MDA-MB-231和MDA-MB-435对阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、卡氮芥(BCNU)的敏感性。流式细胞术检测多药耐药基因P-糖蛋白(P-GP)、谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)、肺耐药蛋白(LRP)、多药耐药相关蛋白(MRP)和甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)等耐药相关基因和凋亡调控基因FAS、BCL-2、P53和P16的表达。结果不同人乳腺癌细胞株对同一药物敏感性差异较大。相关分析表明,细胞株对5-Fu的敏感性与P16表达呈正相关(P<0.01),对其余药物的敏感性与所检基因的表达水平无关。结论人乳腺癌细胞株对5-Fu的敏感性与P16表达有关。     

SYBR Green实时定量POR检测乳腺癌组织OXCR4基因的表达

目的：运用实时定量PCR检测趋化因子受体CXCR4基因在人乳腺癌组织中的表达及其与肿瘤恶性程度之间的关系。方法：SYBRGreen实时定量PCR方法定量检测CXCR4mRNA在63例乳腺癌（TNM分期：Ⅰ期9例,ⅡA期25例,ⅡB期13例,ⅢA期16例）和20例正常乳腺组织中的表达;采用Kruskal Wallis检验、Mann-Whit—ney检验等分析CXCR4mRNA表达在不同·临床参数间的表达差异。结果：乳腺癌组织CXCR4mRNA表达水平（1．22±0．80）高于正常乳腺组织（0．65±0．59）,P=0．001。CXCR4mRNA在乳腺癌中表达上调与淋巴结转移数目（〉3个）、HER-2表达情况（＋＋＋）密切相关,P值分别为0．013和0．031。但CXCR4 mRNA在不同年龄、绝经情况、组织学分级、病理类型、肿瘤大小以及其他免疫组化指标（ER、PR、p53和Ki67）组间的差异均无统计学意义,P〉0．05。结论：趋化因子受体CXCR4表达可作为预测乳腺癌转移的生物学指标,有望成为乳腺癌治疗的新靶点。     

低氧诱导下HRE调控HSVtk基因对肺癌细胞的杀伤效应

目的:探讨低氧时HRE诱导增强的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,EGFP)在SPCA1和A549肺癌细胞株中的表达变化,及驱动HSVtk基因对肺癌细胞的杀伤作用。方法:转染细胞低氧处理后24h用流式细胞术测EGFP表达强度,用MTT法测定细胞存活率。结果:转染pDNA.HRE.EGFP质粒的SPCA1和A549细胞低氧组EGFP表达强度分别是对照组的(2.02±0.23)和(2.37±0.24)倍;转染pDNA.HRE.HSVtk质粒的SPCA1和A549细胞低氧GCV组存活率较对照组分别降低(29.9±1.60)%和(42.83±2.57)%,低氧GCV组与对照组相比,细胞存活率显著降低,P<0.01。结论:质粒载体中包含的HRE对低氧敏感,低氧处理后通过诱导下游的HSVtk基因大量表达,使转染细胞对GCV的敏感性增高,而大大增加对SPCA1和A549细胞的杀伤效应。     

COX-2在直肠腺瘤性息肉与癌组织中的表达及意义

目的 :研究COX 2在直肠家族性腺瘤性息肉病 (familialadenomatouspolyposis,FAP)与癌组织中的表达及意义。方法 :用流式细胞仪 (FCM )分别检测 1 2例正常直肠粘膜组织、1 9例FAP、7例FAP癌变组织及 36例直肠癌组织的COX 2蛋白表达。结果 :1 2例正常直肠粘膜组织COX 2蛋白表达的平均FI值为 0 .67± 0 .2 8,均呈阴性表达 ;FAP 1 8(94.74% )例、FAP癌变组织 7(1 0 0 % )例及直肠癌组织 36 (1 0 0 % )例阳性表达 ,COX 2蛋白表达平均FI值分别为 1 .97± 0 .36、2 .0 2± 0 .2 4、2 .1 4± 0 .31 ,COX 2蛋白表达及阳性表达率与正常直肠粘膜组织差异均有显著性 (P <0 .0 1 ) ,而三者之间差异无显著性 (P >0 .0 5)。结论 :提示COX 2蛋白表达检测对预测腺瘤性息肉癌变可能性、进而用化学干预具有重要意义     

血清乳酸脱氢酶水平对肺癌诊断意义的研究

目的 :探讨血清中乳酸脱氢酶 (LDH)水平对肺癌诊断的意义及其与TNM分期、组织学分型的关系。方法 :采用酶促反应法检测肺癌患者血清中LDH的水平。结果 :62例肺癌患者血清LDH水平明显升高 ,与正常对照组比较差异有显著意义 ,P <0 0 5 ;血清中LDH值患者晚期高于早期 ,P <0 0 5 ,各病理类型之间差异无显著意义。结论 :血清中LDH水平对肺癌的辅助诊断、预后判断有参考价值     

非小细胞肺癌组织miRNA-21表达及预后相关性研究

目的:探讨miRNA-21在Ⅰ期非小细胞肺癌组织中的表达及其与复发转移和预后的关系.方法:回顾性分析2002-2006年间本院48例Ⅰ期肺癌手术患者的临床资料,采用定量RT-PCR方法检测上述病例肺癌组织标本中miR-NA-21的表达水平,根据miRNA-21相对表达量进行实验分组.应用x2检验分析miRNA-21表达与肺癌患者复发转移的关系,应用Kaplan-Meier方法分析miR-21表达与生存的关系.结果:肺癌组织中miRNA-21的表达显著高于正常肺组织.以肿瘤组织与正常组织miR-21表达量比值为2作为分界值,将肺癌患者分为miRNA-21分为高表达组和低表达组.miRNA-21高表达组中,肺癌复发转移率为52.4％(11/21),miRNA-21低表达组中,复发转移率为11.1％(3/27),两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).生存分析显示miRNA-21高表达组较之miRNA-21低表达组患者生存期明显降低.结论:miRNA-21高表达与肺癌复发转移具有密切的关系,miRNA-21表达增高提示肺癌患者预后不良.