家兔用于药物生殖发育毒性评价的研究进展

生殖发育毒性评价是药物安全性评价的重要组成部分。家兔属兔科兔形目,是药物生殖发育毒性评价的非啮齿类哺乳动物模型之一,但是其相关研究较啮齿动物少,对不同种属动物模型进行药物生殖发育毒性评价有助于提高风险评估的准确性。从生育力与早期胚胎发育毒性试验、胚胎-胎仔发育毒性试验、围产期发育毒性试验和体外生殖发育毒性评价等方面综述了家兔在药物生殖发育毒性评价中的研究进展,并探讨了家兔在药物生殖发育毒性评价研究中存在的问题及今后的发展方向,以期为今后研究提供参考。     

埋植有遥测传感器的Beagle犬安全药理模型的建立

目的建立有遥测传感器的Beagle犬安全药理动物模型。方法选择6-8月龄的、整体状况良好的Beagle犬。在备皮、手术室及手术器械消毒后,根据心电图检查的结果确定合适的手术切口位置,通过外科手术方法,在体内埋植遥测传感器,并在术后采取多种措施预防并发症的发生。结果成功建立了有遥测传感器的Beagle犬安全药理模型。结论传感器植入的手术操作及术后护理是Beagle犬安全药理模型成败的关键因素。     

中草药及其活性成分抗肿瘤的研究进展

查阅国内外相关文献，综述中草药及其活性成分抗肿瘤方面的研究进展。根据中草药及其天然活性成分所诱发的不同生物效应将其抗肿瘤作用分为11类进行了详细介绍，展示了中草药用于防癌、抗癌的巨大潜能和美好前景。     

基于拟胚体面积的体外胚胎毒性模型的建立和验证

目的 利用小鼠胚胎干细胞,以拟胚体面积为分化抑制终点,构建体外胚胎毒性模型。方法 模型建立：分别用训练集10个化合物青霉素G、异烟肼、5-氟尿嘧啶、羟基脲、阿司匹林、氟康唑、地塞米松、丙戊酸钠、洛伐他汀、苯海拉明处理小鼠胚胎干细胞ES-D3和小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3 5 d,用细胞活力检测试剂盒检测细胞活性,得到相应的半数抑制浓度（IC_{50 3T3}、IC_{50 D3}）;同时用10种化合物处理ES-D3细胞,用悬浮-悬滴培养的途径制备拟胚体,于第5天对拟胚体进行拍照,用 Image J 软件测量拟胚体的横截面积,并计算半数抑制细胞分化的浓度（ID₅₀）。根据得到的 IC_{50 3T3}、IC_{50 D3}、ID₅₀,用Python软件采用线性判别分析（LDA）拟合得到线性二分类判别式。模型验证：以上述同样的方法测定测试集3个化合物维生素C、布洛芬、顺铂的IC_{50 3T3}、IC_{50 D3}、ID₅₀,将其代入得到的判别式,并预测化合物的胚胎毒性。结果 通过训练集 10个化合物拟合出线性预测判别式为：判别值＝21.550 926 58×lg IC_{50 3T3}－7.600 241 83×lg IC_{50 D3}－14.007 571 16×lg ID₅₀＋6.675 517 2,判别值＜0,归为无胚胎毒性;判别值≥0,归为胚胎毒性。将测试集化合物的 IC_{50 3T3}、IC_{50 D3}、ID₅₀代入判别式,得到维生素C判别值＜0,为无胚胎毒性药物;顺铂和布洛芬判别值＞0,为胚胎毒性药物,均与文献中体内试验结果一致,预测正确。结论 基于拟胚体面积成功建立体外胚胎毒性模型。     

病毒载体疫苗非临床生物分布研究的关键点

目的总结病毒载体疫苗非临床生物分布研究的关键点,提高疫苗生物分布研究水平。方法依据文献、指导原则和实验室经验,分析实时荧光定量聚合酶链式反应（Q-PCR）和取材组织选择、取材时间点设定以及交叉污染预防措施等动物实验设计环节的关键质量控制点。结果生物分布研究应采用实时荧光定量PCR技术,并对核苷酸序列、扩增反应特异性、灵敏度、抑制因子及反应条件进行验证。对于动物实验部分,各时间点、各组及不同性别一般3～5只动物;给药途径、制剂和剂量应和预期临床应用一致;在给药后数天至数月的不同时间点进行组织取材;采取有效的方法预防组织间交叉污染。结论研究过程中的每个环节都会影响生物分布研究的结果 ,要采取相应的措施对研究过程中的关键环节进行质量控制,同时应尽快制定详细的具有指导意义的生物分布研究指导原则和标准。     

DNA-天坛痘苗复合型艾滋病疫苗小鼠体内生物分布研究

目的考察DNA-天坛痘苗复合型艾滋病疫苗在小鼠体内生物分布情况。方法采用定量PCR方法分别对复合疫苗免疫后DNA疫苗的分布情况以及复合疫苗组分HIV-痘病毒载体疫苗单独免疫后的生物分布情况进行测定。结果复合疫苗免疫后5d和30d,主要是在注射部位检测到质粒DNA残留,在免疫后第56d,各脏器均未检测到质粒DNA残留。HIV-痘病毒载体疫苗单独免疫后第5d,仅在给药部位检测到DNA残留,免疫后第36d,各脏器均未检测到DNA残留。结论复合疫苗免疫机体后短期只在注射部位分布,且随时间延长减少至消失,不会长期在机体内存留。     

用于CMV启动子序列检测的绝对定量PCR方法的建立及验证

目的建立和验证用于CMV启动子序列检测的绝对定量PCR方法。方法针对CMV启动子序列设计探针和引物,用SYBR Green I熔解曲线分析引物扩增的特异性。对反应体系进行系统优化。用含CMV启动子的基因治疗产品和质粒标准品验证建立的PCR方法。结果上游引物为5’-AGACTTGGAAATCCCCGTGAGT-3’,下游引物为5’-CGTATTAGTCATCGC-TATTACCATGGT-3’,探针为5’-AACCGCTATCCACGCCCATTGATG-3’。扩增的特异性较强,反应体系优化后能达到较高的灵敏度。Ct值的变异系数都小于2%。标准曲线的定量范围为1.5×102～1.5×107拷贝,灵敏度为30拷贝。质粒标准品和基因治疗产品的扩增效率相近。结论建立了检测CMV启动子序列的绝对定量PCR方法。     

吉九里香碱诱导K562细胞凋亡的研究

目的探讨吉九里香碱(girinimbine)通过诱导细胞凋亡而发挥其抑制肿瘤细胞增殖的作用。方法采用MTT法检测吉九里香碱对K562细胞增殖的抑制作用;采用荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;库尔特全自动颗粒粒度仪分析药物引起K562细胞体积大小分布的变化;琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯形条带及流式细胞术检测细胞凋亡时凋亡峰的变化。结果MTT结果显示不同浓度的吉九里香碱处理K562细胞不同时间均能抑制细胞的增殖,抑制率依赖于吉九里香碱的浓度和作用时间;50μmol/L吉九里香碱处理K562细胞24h时,细胞出现凋亡典型的形态学特征;50μmol/L吉九里香碱分别处理K562细胞6、12、24h及不同浓度吉九里香碱处理K562细胞24h时,能够使细胞产生明显的DNA梯形条带和体积大小变化,呈一定的量效和时效关系,并且细胞凋亡的亚G1峰随作用时间的延长而增加,分别为(15.93±3.79)%(6h)、(32.87±4.89)%(12h)、(41.30±1.91)%(24h)。结论吉九里香碱可能通过诱导K562细胞凋亡而发挥其抗K562细胞增殖的作用。     

啮齿类动物致癌性试验统计学方法的使用现状

啮齿类动物致癌性试验是新药研发中非临床安全性评价的重要组成部分。致癌性试验周期较长、数据量大,其统计学方法选用的合理性、科学性将可能影响试验结果的结论。首先介绍了目前致癌性试验常用的生存分析和肿瘤发生率统计方法;其次,汇总了生存分析和肿瘤发生率统计方法的选用情况;最后,通过比较申报方、美国食品药品监督管理局审评方和美国国家毒理学项目中心在统计学方法选用的差异,分析和讨论了这些差异的来源和影响,并总结了致癌性试验统计分析设计思路。希望通过对以上内容的汇总和分析,能够为新药非临床致癌性试验提供参考。     

高效液相色谱-串联质谱法定量测定大鼠血浆中LMV-12(HE003)及其代谢产物M4

目的 建立一种高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)同时测定SD大鼠血浆中LMV-12(HE003)(以下简称LMV-12)及其活性代谢产物M4的方法,并开展完整的生物分析方法学验证.方法 采用蛋白沉淀提取血浆中LMV-12及M4,用HPLC-MS/MS方法进行定量分析.采用ACQUITY HPLC?CSH ...