快速检测O9抗原沙门菌免疫金标层析法的建立及其应用研究

目的:建立一种快速检测O9抗原沙门菌的新方法。方法:利用针对沙门菌O9抗原的两株特异性单克隆抗体,建立一种双抗体夹心检测O9抗原沙门菌的胶体金免疫层析试纸条(GICA)。结果:该试纸条对标准肠炎沙门菌LPS的最小检出量为0.15 ng/条,对肠炎沙门菌菌液的最小检出量为2×105cfu/条。蛋品、鸡肉、猪肉的人工污染试验显示,经增菌后免疫层析试纸条可检出1 cfu的肠炎沙门菌,在大肠杆菌与沙门菌比例为1000:1仍不干扰试纸条的检测。共对市场采集的鸡蛋、鸡肉以及猪肉样品577份进行免疫层析试纸的检测,试纸条与经典细菌分离鉴定法相比:敏感度为90.0%,特异性为98.6%。结论:检测O9抗原沙门菌的GICA法快速、特异、灵敏,在重要沙门菌病检测方面有着潜在、广阔的应用前景。     

合肥市零售猪肉中沙门菌分离株多重耐药谱研究

采用Kirby-Bauer法对合肥市零售猪肉中分离的26株沙门菌进行药敏试验,并进行多重耐药谱分析,为抗生素的合理使用提供科学依据.     

产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆表达和生物学活性的鉴定

目的利用原核表达系统表达具有生物学活性的产气荚膜梭菌α毒素。方法设计针对α毒素基因的一对引物，用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增出α毒素的全基因。经测序确认正确后，回收的α毒素目的条带与pGEX6p-1表达载体经限制性内切酶Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后，进行连接，转化大肠杆菌BL21。诱导表达后，做SDS-PAGE电泳，出现特异的表达产物条带。表达产物做溶血活性、卵磷脂水解活性和腹腔接种小鼠实验。结果构建的重组质粒经内切酶Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后，发现特异的目的基因条带。SDS-PAGE电泳后，发现重组菌株有特异的表达条带。实验证明表达产物具有溶血活性、卵磷脂水解活性和腹腔接种后致死小鼠特性。结论重组菌株BL21(pGEX6p-1-epα)表达了具有活性的α毒素蛋白。     

牛肿瘤坏死因子α小鼠单克隆抗体的制备

目的制备抗牛肿瘤坏死因子α(BoTNF-α)的单克隆抗体(mAb)。方法以原核系统表达的带有组蛋白(His)标签的重组牛TNF-α蛋白(rHis-BoTNF-α)为免疫原,带有谷胱甘肽硫转移酶(GST)标签的重组牛TNF-α蛋白(rGST-BoTNF-α)为检测原,采用杂交瘤细胞技术制备mAb。Western blot法检测mAb与rHis-BoTNF-α和rGST-BoTNF-α的反应性,间接ELISA检测mAb效价、特异性以及mAb与商品化重组BoTNF-α的反应性,流式细胞术分析mAb识别天然抗原的活性。结果成功筛选出7株稳定分泌抗rBoTNF-αmAb的杂交瘤细胞株。结果证明7株mAb均具有良好的反应性及特异性。流式细胞术分析显示mAb 4G4具有良好的识别天然抗原的活性。结论成功制备了抗BoTNF-α的mAb。     

屠宰生猪沙门氏菌分离株的血清型和药物感受性分析

目的了解合肥市屠宰生猪沙门氏菌分离株的血清型分布和药物感受性。方法应用GB/T4789.4-2003对来自五个定点屠宰场生猪胴体体表和肉样的沙门氏菌分离株进行血清型鉴定,并采用标准K-B纸片法对分离菌株进行22种抗生素敏感试验。结果胴体体表沙门氏菌以B群为优势菌群,优势血清型包括里定沙门氏菌和山夫登堡沙门氏菌;胴体肉样沙门氏菌以E1群为优势菌群,明斯特沙门氏菌为优势血清型;沙门氏菌分离株对头孢曲松钠和丁胺卡那感受性最大,对强力霉素和四环素高度耐受;51株耐药菌株中有33株(64.71%)为多重耐药,最常见的多重耐药谱是强力霉素-四环素-卡那霉素-氯霉素。结论实施宰前检验和管理是控制沙门氏菌病,保证病健隔离分宰,减轻对加工环境和产品污染的重要措施;沙门氏菌优势血清型的分布具有一定的区域性;应加强畜牧养殖业中抗生素的合理使用,以减少细菌耐药性的产生。     

肠出血性大肠杆菌传播模式

大肠杆菌是寄居在哺乳动物和禽类胃肠道中的正常菌群之一,然而少数具有致病性,可引起机体肠道和肠道外感染。依其毒力特征和所致疾病症状不同,现已报道的肠道感染性大肠杆菌有：产肠毒素性大肠杆菌（enterotoxigenic E．coli,ETEC）;肠致病性大肠杆菌（enteropathogenic E．coli,EPEC）;肠出血性大肠杆菌（enterohaemorrhagic E．coli,EHEC）;肠聚集性大肠杆菌（enteroaggregative E．coli,EAggEC）; （enteroinvasiveE．coli,EIEC）;细     

副溶血弧菌毒力因子及其致病机理研究进展

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,简称Vp)是一种革兰氏阴性嗜盐细菌,主要分布于沿岸海水、海河交界处以及鱼贝类等海产品中.Vp是食用海产品引起腹泻、呕吐和发烧等肠胃炎反应的主要病原菌之一.     

产单核细胞李斯特菌的分子鉴定与亚分型研究

目的　建立产单核细胞李斯特菌的分子检测方法及其亚分型体系。方法　对LM菌株进行hly基因的PCR检测 ,并扩增其中 10株PCR检测阳性菌株的actA基因 3’末端的 82 7bp的DNA片段 ,对扩增的片段进行测序。利用遗传进化树分析软件分析。结果　 2 4株LM的hly基因扩增均出现 85 0bp左右特异性片段 ,而非LM株未出现该特异性片段。所建立的分子亚分型方法将 10株LM归为两个遗传谱系。结论　新建立的PCR法检测LM具有较高的灵敏性与特异性 ,LM分子亚分型体系的建立为进一步研究不同LM分离株的群体遗传学、流行病学及生态学奠定了技术基础。