肠炎沙门菌sifA基因缺失株的无痕构建及其在巨噬细胞内的增殖特性研究

目的 本研究旨在探究sifA基因对肠炎沙门菌胞内寄生和增殖的影响,以探索肠炎沙门菌的致病机理。方法 根据同源重组原理,无痕构建肠炎沙门菌C50041的sifA基因缺失株,通过蓝白斑、抗生素耐药性、PCR和基因测序方法对基因缺失株进行鉴定,并从生物学特性、胞内沙门菌增殖、sifA基因在胞内外菌中表达等方面,分析sifA基因对肠炎沙门菌的影响。结果 成功构建肠炎沙门菌C50041ΔsifA,蓝白斑、抗生素耐药性、PCR和基因测序方法证明该菌株是正确的。其生长速度和生化特性没有发生改变。ΔsifA株感染巨噬细胞后,其胞内沙门菌量显著少于其野生株。sifA基因在spiC基因缺失株中表达量增加。结论 肠炎沙门菌C50041ΔsifA被成功构建,其在巨噬细胞内的增殖量显著降低,sifA基因表达可能受spiC基因调控,本研究为深入探究肠炎沙门菌在细胞内增殖及sifA基因的功能奠定基础。     

李斯特菌细胞溶解素在疫苗研制中的应用

李斯特菌细胞溶解素 (ListeriolysinO ,LLO)是单核细胞增生症李斯特菌 (Listeriamonocytogenes ,Lm)hly基因表达的一种结合胆固醇、活化巯基的细胞溶解素。LLO是Lm的主要致病因素 ,它通过溶解细胞吞噬体膜而使Lm逃离吞噬体〔1〕。LLO的N末端具有富含P(脯氨酸 )、E(谷氨酸 )、S(丝氨酸 )和T(苏氨酸 )的PEST样区〔2 ,3〕。蛋白质PEST区的主要作用是使蛋白质磷酸化并进入泛素蛋白酶降解途径。该途径也是真核细胞产生与MHCⅠ类分子结合的免疫原性多肽的主要途径。另外 ,LLO还能在感染细胞内诱导信号转导 ,以及强烈的前炎性反应和…     

单抗夹心ELISA检测李斯特氏菌方法的建立及其初步应用

本研究以李斯特氏菌属特异单抗为核心试剂,建立了快速检测该菌的单抗夹心ELISA试验,该法敏感、特异,且检测时间缩短为2～4天,对李斯特氏菌的最低检测限为10~scfu/ml。经对实际样品的初步检测结果显示,具有重要应用价值。     

针对SARS-CoV-2核衣壳蛋白的单克隆抗体的制备和鉴定

目的 研制SARS-CoV-2的N蛋白单克隆抗体,并对其特异性识别真核表达N蛋白等特性进行鉴定,为下一步应用奠定材料基础。方法 利用大肠杆菌表达并纯化SARS-CoV-2重组N蛋白,制备并筛选分泌N蛋白特异性单克隆抗体的阳性B细胞杂交瘤,制备腹水后利用间接ELISA法测定单抗的效价、亚型和亲和力;通过Western blot、间接免疫荧光试验分析其与原核、真核表达SARS-CoV-2重组N蛋白的特异性结合能力;通过间接ELISA法评价其在不同冠状病毒N蛋白检测中的应用潜力。结果 成功地表达和纯化SARS-CoV-2重组N蛋白,筛选获得1株特异性识别重组N蛋白的单克隆抗体并命名为11F4,其亚型为IgG1,腹水效价为2.0×10⁷以上,亲和力为4.44×10⁸ M^-1;Western Blot分析表明其能与SARS-CoV-2重组N蛋白特异性反应,间接免疫荧光试验显示其能特异性识别HEK-293T细胞表达的SARS-CoV-2 N蛋白,表明该蛋白免疫反应性良好;间接ELISA法结果表明其可特异性识别真核细胞表达的SARS-...     

结核分枝杆菌感染过程中宿主抗菌肽LL-37免疫调控功能的研究进展

抗菌肽是先天免疫系统的重要组成部分,LL-37是已知唯一在人体中表达的抗菌肽。LL-37除了具有抗结核活性和免疫调节等生物学功能外,还可能是活动性结核的重要标识。本文着重就结核分枝杆菌感染调控LL-37表达机制、LL-37在结核分枝杆菌感染过程中的免疫防御以及免疫调节功能等方面进行阐述。另外,讨论了LL-37在结核病诊断、治疗中的应用潜力,以期为结核病预防和控制工作提供新的思路。     

空肠弯曲菌鞭毛研究进展

空肠弯曲菌是世界范围内广泛流行的一种食源性病原菌,鞭毛是其主要的毒力因子,在其致病过程中发挥重要作用。本文对空肠弯曲菌鞭毛结构,合成机制及其作用进行了综述,以期为了解空肠弯曲菌鞭毛的基本信息及其致病机理提供一些参考资料。     

空肠弯曲菌细胞致死性肿胀毒素研究进展

空肠弯曲菌是一种食源性病原菌,它产生的细胞致死性肿胀毒素具有细胞毒性,能将细胞周期阻断在G2/M期,并最终导致细胞程序性死亡;它由3种多肽CdtA、CdtB和CdtC构成。本文将从空肠弯曲菌细胞致死性肿胀毒素的理化性质、生物学功能和作用机制等方面的研究进展作一介绍。     

4b型单核细胞增生李斯特菌内化素基因NTSN_0462的功能初探

目的单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)对宿主的粘附、侵袭作用与其多种内化素蛋白密切相关。本研究以4b型菌株LmNTSN的內化素基因NTSN_0462为研究对象,初步探究其致病作用。方法利用同源重组技术构建该基因缺失的突变株,研究0462基因对NTSN在生长、细胞侵袭和体内定植中的作用。人结肠腺癌细胞Caco-2、人肝癌细胞HepG2的侵袭率,以及BALB/c小鼠体内肝、脾脏中定植能力的差异。结果缺失株的生长曲线结果显示,NTSN_0462基因对Lm在BHI培养基中的生长及代谢未造成明显影响。以人结肠腺癌细胞Caco-2、人肝癌细胞HepG2进行的体外试验表明,缺失株的侵袭能力低于野生株(P0.001)。以BALB/c小鼠进行的体内试验显示,缺失株在肝脏中定殖的能力显著低于野生株(P0.001),在脾脏中无统计学差异。结论 NTSN_0462基因在LmNTSN入侵肝脏和定植中发挥重要作用,是侵袭相关的重要毒力因子。     

沙门菌tcpS基因的血清型分布及其在特定血清型鉴定中的应用

目的建立基于tcpS基因的PCR鉴定方法,同时筛选肠炎沙门菌、鸡白痢/伤寒沙门菌和都柏林沙门菌,为流行病学调查提供方便快速的实验室技术支持,并为PCR鉴定沙门菌方法的发展提供新的基因候选。方法利用生物信息学的方法分析沙门菌tcpS基因的血清型分布特点,选择27种不同血清型沙门菌以及10株非沙门菌菌株,对所建立PCR体系的特异性和灵敏性进行检测,并将该方法应用于江苏省分离的48株猪场分离株、22株鸡场分离株和11株牛场分离株的检测。结果生物信息学分析表明tcpS基因仅存在于肠炎沙门菌、鸡白痢/伤寒沙门菌和都柏林沙门菌中,该PCR方法具有高度特异性和灵敏性,可准确快速地从临床样本中筛选这3种血清型沙门菌,且对实际样本检测符合率达100%。结论基于tcpS的PCR检测方法可准确筛选肠炎沙门菌、鸡白痢/伤寒沙门菌和都柏林沙门菌,能作为传统血清学分型的辅助方法,为沙门菌PCR鉴定方法的发展提供了优良的基因候选。     

结核分枝杆菌NrdF1、PE_PGRS35、Rv1985c和Rv1986的原核表达及检测牛结核病抗体之应用

目的 在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌RD2区域的NrdF1、PE_PGRS35、Rv1985c和Rv1986蛋白,并评价诊断牛结核病中的应用潜能。方法 以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR 扩增nrdF1,pe_pgrs35,rv1985c 和 rv1986基因,并将其克隆到表达载体中,重组表达质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达,镍柱亲和纯化重组蛋白,SDS-PAGE和Western blotting试验鉴定目的蛋白的表达及其反应原性。以纯化的重组蛋白作为包被抗原,通过ELISA方法测定牛血清中特异性抗体,以之评价这些蛋白用于牛结核病抗体检测的价值。结果 成功表达了NrdF1、PE_PGRS35、Rv1985c和Rv1986蛋白,相对分子质量为42 ku、63 ku、46 ku和41 ku,对表达产物进行镍柱亲和纯化,获得了纯度较高的融合蛋白。重组蛋白均能与抗HIS单抗发生特异反应,表现出良好的反应原性。通过间接ELISA方法检测牛血清中特异性抗体,阳性检出率分别为7.35%、22.06%、16.18% 和16.18%。结论 结核分枝杆菌原核表达的NrdF1、PE_PGRS35、Rv1985c和Rv1986蛋白具有用作牛结核病血清学诊断试剂的潜能。