炭疽杆菌毒力因子作用机制研究进展

炭疽杆菌及其芽孢感染人兽 ,引起高热、皮肤溃疡及焦痂 ,亦可因不同侵入途径而引起肺炎、肠炎或全身性败血症 ,是一类重要的烈性人畜共患病病原。本菌存在于感染动物及人的各个组织及排泄物中 ,其芽孢存在于受污染的土壤、水草、皮毛及其制品中。本菌及其芽孢常从破损皮肤及伤口处或从呼吸道、消化道侵入草食兽及人 ,迅速繁殖而产生各种毒力因子 ,使局部组织出血、坏死及周围组织水肿甚至导致全身性症状 ,使动物及人休克及死亡。本菌致病作用主要依赖于其分泌的外毒素 ,即使在感染的某一时期使用抗生素消灭了体内所有的炭疽杆菌 ,亦很难保证…     

产单核细胞李斯特菌减毒候选菌株分子生物学特性研究

目的为了确定用于减毒的产单核细胞李斯特菌菌株,对初筛入选的血清型为1/2a菌株Lm1、Lm2、Lm3和Lm4的分子生物学特性进行了比较研究。方法利用PCR技术均成功地扩增出4株菌株的hly基因及actA和plcB基因片段。以LD50的测定试验作为菌株毒力指征,对4株菌株的毒力进行了测定。结果4株菌株均为强毒菌株,其中菌株Lm4的毒力最强,用BALB/c小鼠测得的LD50为1.47×104CFU。结论确定以Lm4作为候选菌株。     

我国部分地区猪源大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的检测

目的 采用PCR方法检测我国江苏等9个省市部分地区分离的1007株猪源大肠杆菌中肠细胞脱落位点毒力岛（LEE）和强毒力岛（HPI）。方法 对LEE毒力岛检测其核心区的衙和eaeA基因，对HPI毒力岛检测其irp2和fyuA基因。同时对LEE和／或HPI阳性大肠杆菌进行了O血清型的鉴定。结果 在分离的猪源大肠杆菌中。LEE毒力岛基因检测结果为：2．2％（22／1007）的菌株let和eaeA基因的扩增阳性，0．5％（5／1007）的菌株eaeA阳性。HPI毒力岛基因检测结果为：10．6％（107／1007）的菌株irp2和fruA基因扩增阳性，2．1％（21／1007）的菌株irp2阳性；其中有2株irp2和ler基因扩增阳性，有3株irp2、ler和eaeA基因扩增阳性，1株irp2、fyuA、ler和eaeA基因扩增都为阳性；在128个HPI阳性分离株中，093和0107血清型菌株分别占定型菌株的15．7％（13／83）和12．0％（10／83）。结论 2．7％的猪源大肠杆菌携带LEE．12．7％的菌株携带耶尔森菌HPI，O93和O107为猪源HPI大肠杆菌常见血清型。     

基于鞭毛蛋白的H5亚型禽流感疫苗候选株的构建及鉴定

目的构建基于鞭毛蛋白的H5亚型禽流感疫苗候选株。方法以H5N1禽流感病毒血凝素(HA)基因和鼠伤寒沙门菌SL7202基因组为模板,通过重叠PCR扩增出HA1-2-fljB基因片段,将其插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET32a-HA1-2-fljB,再将其转化表达菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达。SDS-PAGE和Western blot法鉴定分析融合蛋白HA1-2-fljB。通过刺激HEK293-TLR5细胞,检测融合蛋白的TLR5生物学活性。结果正确构建出重组质粒pET32aHA1-2-fljB,SDS-PAGE显示,融合蛋白HA1-2-fljB相对分子质量(Mr)约为100 000,Western blot法表明融合蛋白具有良好的免疫反应性。TLR5生物活性实验结果显示,与HA1-2蛋白刺激组相比,HA1-2-fljB诱导HEK293-TLR5细胞分泌了高水平的IL-8(P0.01)。结论成功表达出具有TLR5活性的融合蛋白HA1-2-fljB,为研究H5亚型禽流感新型疫苗奠定了基础。     

沙门氏菌单克隆抗体应用研究的进展

本文阐述了针对沙门氏菌O抗原、H抗原等不同抗原成份的单克隆抗体,以及这些单抗在沙门氏菌鉴定、沙门氏菌病诊断、食品沙门氏菌检验和沙门氏菌抗原结构分析等方面的应用研究情况,其结果表明,这些单抗完全可以取代常规抗血清作为诊断和检验试剂,同时,单技研制为沙门氏菌分子生物学方面的研究提供了有力的工具。文中进一步讨论了今后的研究前景。     

重组沙门菌表达结核分枝杆菌ESAT-6及其特异性免疫应答分析

Objective To determine the immune responses induced by recombinant Salmonella ty-phimurium expressing the secreting antigen ESAT-6 of Mycobacterium tuberculosis. Methods ESAT-6 cod-ing gene was cloned and identified by PCR and sequencing. Prokaryotic expression plasmid pYA33-esat car-rying the ESAT-6 coding sequence was constructed firstly and electro-transformed into an attenuated strain X4550 of Salmonella typhimurium, the recombinant bacteria was named as X4550(33-esat). C57BL/6 mice were immunized intranasally (I. N) with 108 CFU recombinant bacteria at day 0 and 18. Cells from spleen, lung, mesenteric lymph node (MLN) and Peyer's patch (PP) were collected from mice after second immu-nization, and the specific IFN-γ-secreting cells and IL-4-secreting cells were detected by ELISPOT assay u-sing ESAT-6 peptide as stimulus. Furthermore, CTL effects were in vivo evaluated by CFSE assay. Results The results showed that cellular immune responses specific for ESAT-6 could be detected by ELISPOT assay. In lung and PP cells, immune responses against ESAT-6 were biased toward Th1 type, the frequency of IFN-γ-secreting cells was much higher than that of IL-4-secreting cells. In splenocytes and MLN cells, the anti-gen specific immune responses acted as Thl and Th2 balance, the frequency of IFN-γ-secreting cells was close to that of IL-4-secreting cells. CFSE assay indicated that recombinant bacteria could induce the high level of CTL effects specific for ESAT-6 peptide. Conclusion These results suggested that recombinant Sal-monella typhimurium X4550(33-esat) not only can induce cellular immune responses, but also can elicit specific CTL responses after I. N immunization. It also provided the useful information for the control of infec-tious disease of tuberculosis.     

聚乙烯亚胺作为核酸疫苗佐剂的研究进展

疫苗是防控病原感染的最有效方式之一,通常需要添加佐剂才能确保其高效的免疫应答。聚乙烯亚胺(polyethyleneimine, PEI)是一种被广泛研究的阳离子聚合物,其传统用途是作为核酸转染试剂或DNA疫苗运载工具。近年来越来越多的研究表明PEI也能作为一种佐剂。本文回顾了PEI的理化性质及其在不同领域的应用,阐述了PEI具有免疫活化功能的细胞和分子机制。另外,本文总结了PEI作为疫苗佐剂在体内和临床试验中的应用,并讨论了其在未来应用中的前景和挑战。     

分子分型方法在单核细胞增生性李斯特菌流行病学研究中的应用

单核细胞增生性李斯特菌(Lm)是一种重要的食源性人兽共患病病原菌,所引起的李斯特菌病虽然发病率低,但病死率高。传统的Lm分型方法步骤繁琐、重复性差、分辨率低。目前,多种针对Lm的分子分型方法逐渐完善,而且分辨力、分辨率、操作性和敏感性均优于传统分型方法。就目前Lm分子流行病学研究中常用的分子分型方法(PFGE分型、MLVA分型、MLST分型、MVLST分型、Lineage分型)阐述、比较,为Lm食源性疾病监测、暴发的诊断及溯源提供参考。     

一株猴源空肠弯曲菌的鉴定及其生物学特性分析

目的 对一株腹泻猴源的空肠弯曲菌分离株M166进行鉴定和生物学特性研究。方法 通过多重PCR、生化鉴定、MALDI-TOF-MS质谱鉴定、电镜观察等方法验证猴源分离株,通过与标准株NCTC11168进行比较,对生长曲线、运动力、Balb/c小鼠体内定殖实验等生物学特性进行研究。结果 该分离株多重PCR显示空肠弯曲菌阳性,马尿酸钠水解阳性,VITEK-2生化和MALDI-TOF-MS分析均鉴定为空肠弯曲菌,电镜观察显示为典型的弯曲菌形态;与NCTC11168相比,M166在MH液体培养基中的生长速度和增殖程度弱于NCTC11168,但运动力更为活跃;攻毒后第7 d小鼠体内定殖实验结果表明,NCTC11168攻毒组无细菌检出,而M166攻毒组能持续排菌,且在十二指肠、空肠、回肠、盲肠中定殖,每克载菌量分别可达3.09±0.47,3.01±0.84,3.80±0.46,5.63±0.34 CFU/g。结论 M166具有空肠弯曲菌典型的生物学特性,且在小鼠肠道中定殖能力强,这可能是M166能在实验猴体内定殖并导致腹泻的重要因素。     

空肠弯曲菌感染与人格林-巴利综合征

弯曲菌是全球范围内主要的人兽共患性、细菌性肠道病原菌之一,对人致病的弯曲菌主要是空肠弯曲菌和结肠弯曲菌。特定血清型空肠弯曲菌引起的肠炎是人格林-巴利综合征(GBS)的重要前驱因子。本文对空肠弯曲菌引起GBS的流行病学与致病机制等研究情况及进展进行了综述。