单克隆抗体在沙门氏菌血清学鉴定中的应用研究

应用肠杆菌科共同抗原单抗AA9、沙门氏菌属特异单抗试剂(CB_8+de7)、沙门氏菌O、H抗原单抗对1271株菌株进行鉴定,试验结果表明,AA9和CB_8+de7可用于沙门氏菌科、属的初步鉴定;沙门氏菌O、H抗原单抗只能选择性地与具有相应抗原的菌株的发生反应,而不与其它菌株产生交叉反应,其敏感性和特异性优于常规血清,完全可以取代后者用于沙门氏菌血清群、型的鉴定。可见,沙门氏菌单抗的应用为沙门氏菌的鉴定提供了新方法,文中进一步讨论了上述单抗的应用前景。     

以减毒沙门菌为载体布鲁氏菌DNA疫苗的构建及免疫原性分析

目的 构建携带布鲁氏菌BLS-L7/L12融合基因的重组减毒沙门菌并进行免疫原性分析,为口服布鲁氏菌DNA疫苗研究奠定基础.方法将BLS-7/L12融合基因克隆到真核表达载体asd -pVAX1,依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X4550得到重组沙门菌X4550(asd -pVAX1-BLS-L7/L12).以1×109CFU/只的剂量口服免疫Balb/C小鼠,3次免疫后进行免疫效果的评价.结果构建的重组减毒沙门菌质粒转染COS-7细胞经免疫组化和Western-blot试验证明BLS-L7/L12融合蛋白在细胞中得到了瞬时表达,ELISA检测到免疫小鼠血清和肠黏液中有特异性抗体IgG和sIgA产生.通过淋巴细胞增殖实验、细胞因子和CD分子测定表明DNA疫苗以诱发Th1型免疫为主.结论 所构建的以重组沙门菌为载体口服布鲁氏菌DNA疫苗具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,且以细胞免疫应答为主.可作为潜在的布鲁氏菌新型疫苗.     

PCR快速检测沙门菌试剂盒的研制与应用

目的 在优化聚合酶链反应(PCR)检测沙门菌程序的基础上,研制沙门菌PCR检测试剂盒。方法 通过样品检测，确定试剂盒的组成及各种组分对保存期的影响，对PCR和ELISA2种快速检测试剂盒进行比较。结果 该试剂盒能检测出20Pg的沙门菌DNA；在含有Taq酶、未冻干、-20℃的条件下，试剂盒保存期为12个月；以国标法做参照，ELISA试剂盒的敏感性和特异性分别为100％，97.2％．PCR试剂盒的敏感性和特异性均为100％；ELISA和PCR试剂盒的符合率为97．2％；PCR试剂盒检测临床粪便样品150份，检测结果与国标法相符。结论 沙门菌PCR试剂盒具有特异、灵敏、快速等优点，适用于沙门菌快速检测。     

不同副溶血弧菌的分子鉴别与生长动力学模型比较

目的探讨不同分子亚型副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)的生长动力学特征,为建立海产品中Vp预测模型提供数据。方法应用PCR和RAPD方法对5株不同来源的Vp分离株进行了分子鉴别,并对不同菌株在适宜温度(37℃)和低温(15℃)下生长变化进行了测定,采用修正的Gompertz方程拟合细菌的生长曲线,求出不同菌株的生长动力学参数并建立预测模型。结果4株食物中毒样品来源的Vp菌株基因型均为tl+tdh+trh-toxR+,1株海产品分离株为tl+tdh-trh-toxR+,筛选的随机引物P21可以将5株不同来源的Vp菌株分成5个不同的分子亚型,不同菌株37℃的世代时间在0.210~0.238h之间,延滞时间在1.705~1.849h之间,生长曲线没有显著差异(R2>0.995),应用预测模型求得各菌株的预测值与实测值均方根偏差在0.110~0.452之间;而在15℃条件下测得不同Vp菌株世代时间在0.727~1.062h之间,延滞时间在10467~12552h之间,生长曲线具有较大的变异性(R2>0.938),其中菌株VP06003和VP06127的预测值与实测值之间均方根偏差分别为1.425和1.318。结论不同分子亚型的Vp菌株具有不同的低温适应能力,在15℃下的生长动力学参数存在差异性,对预测模型的可信度具有一定的影响。     

结核分枝杆菌Ⅶ型分泌系统的研究进展

细菌的致病性依赖于分泌毒力因子的能力,这些毒力因子可以表达在细胞表面,也可以通过分泌的方式到达细胞外基质或者是直接进入宿主细胞。对蛋白分泌机制的研究主要集中在革兰氏阴性菌．并由此鉴定出了不同的分泌系统,分别命名为Ⅰ-Ⅳ型分泌系统。革兰氏阴性菌的蛋白分泌特别复杂．因为这些细菌都有两层膜包裹,也就是说分泌的蛋白必须通过内膜和外膜这两层膜才能进入胞外基质或者宿主细胞。相对而言,     

合肥市市售猪肉产单核细胞李斯特菌分离及hly基因序列分析

目的了解市售猪肉中产单核细胞李斯特菌(Lm)的污染状况及Lm分离菌株hly基因部分序列的分析比较。方法菌株分离鉴定应用多聚酶链反应(PCR);PCR产物直接测序,对780bp片段作序列分析。结果市售猪肉产单核细胞李斯特菌的污染率为1.17%(2/170);分离菌株WLD1和FCY1与国内外14个参考菌株的同源性分别为96.4～98.6%和95.0%～97.2%,而两者之间的同源性仅为95.9%。结论合肥市市售猪肉中有一定程度产单核细胞李斯特菌的污染,且存在李斯特菌病的可能性和食物中毒的潜在危险;分离菌株WLD1和FCY1,尤其是FCY1分化程度较高,Lmhly基因核苷酸序列差异的距离与地理分布、菌株的样品来源无一定的相关性。     

喹乙醇耐药基因 oqxAB 的发现与流行

喹乙醇是一种喹噁啉-N1, N4-二氧化物,作为动物生长促进剂而被广泛使用,曾被认为是一种相对安全的抗菌药物。随着该药物在养殖业中的长期使用,其耐药问题也逐步被认识。2003年从丹麦猪粪中分离出一株大肠杆菌,含有介导喹乙醇耐药的接合型质粒pOLA52。次年研究发现质粒pOLA52携带外排泵基因oqxAB,不仅介导喹乙醇耐药,还能降低细菌对氯霉素、喹诺酮类药物的敏感性。因此,2009年oqxAB基因也被归为一种质粒介导的喹诺酮类药物耐药(Plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR)基因。本文对喹乙醇耐药基因oqxAB的发现与流行做一综述。     

结核分枝杆菌PE/PPE蛋白研究进展

PE/PPE蛋白是分枝杆菌所独有的蛋白家族,因其氨基端分别含有Pro-Glu(PE)和Pro-Pro-Glu(PPE)的基序而得名,其编码基因约占结核分枝杆菌整个基因组的10%。PE/PPE蛋白从被发现开始就引起了人们的广泛兴趣,本文就近年来的研究进展作一综述。     

猪沙门菌疫苗研究进展

沙门菌病是一种重要的人兽共患病,我国是猪肉消费大国,受污染的猪肉是沙门菌病的主要来源,目前国内外有许多猪沙门菌疫苗在被使用。在欧洲现流行的猪沙门菌疫苗为减毒活疫苗,能减少沙门菌在猪体内的定殖,并能在二次免疫后诱导高效的抗体免疫应答。接种疫苗并非万无一失,问题就在于,当沙门菌的血清型与疫苗的抗原不相同时,对沙门菌的防控效果就较差,现阶段对猪疫苗交叉保护研究较少。本文就猪沙门菌疫苗的研究进展进行了综述。     

副溶血性弧菌Vop T蛋白的表达及其抗体的毒力菌株特异性研究

目的 研究副溶血性弧菌VopT蛋白的菌群特异性,为建立致病性副溶血性弧菌的快速检测方法以及探讨VopT的作用机制奠定基础。方法 根据副溶血性弧菌VopT蛋白基因(VPA1327)序列设计合成引物,通过PCR从副溶血性弧菌致病株WX06152(血清型O3∶K6)中扩增出目的基因,构建原核表达载体pET-30a(+)-VPA1327并转化大肠杆菌BL21(DE3)。经IPTG诱导表达,重组蛋白应用MALDI-TOF-MS/MS鉴定和His镍柱纯化,并通过免疫BALB/c小鼠制备抗血清,建立副溶血性弧菌VopT蛋白的间接ELISA检测方法,并分析其敏感性和毒力菌株特异性。结果 成功表达了大小为33 kDa融合蛋白,肽指纹图谱与副溶血性弧菌VopT蛋白一致。重组VopT抗血清能够特异性检测副溶血性弧菌毒力株的全菌细胞及其裂解蛋白,与环境株及其它种属菌株无明显交叉反应,灵敏度达到10⁵CFU·mL^-1。结论 重组VopT的抗血清具有良好特异性,为探讨VopT致病机理和分泌机制研究提供了一定的参考依据。